1、ICS 65.020.20 B 04 DB12 天津市 地 方 标 准 DB12/T 883 2019 食用菌中甲醛的测定 高效液相色谱法 Determination of formaldehyde in mushroom-High performance liquid chromatography 2019 - 03 - 25发布 2019 - 05 - 01实施 天津市市场监督 管理 委员会 发布 DB12/T 883 2019 I 前 言 本标准依据 GB/T1.1-2009给出的规则 起草。 本标准由天津市 农业 科学 院 提出并归口。 本标准起草单位：天津市农业质量标准与检测技术研究
2、所。 本标准主要起草人： 刘征辉 、 魏静娜 、 赵琳琳 、 张强 、 薛天凯 、 赵云平 、 徐石勇 、 郑贵忠。 DB12/T 883 2019 1 食用菌中甲醛的测定 高效液相色谱法 1 范围 本标准规定了采用高效液相色谱法测定食用菌中甲醛的原理、试剂和材料、仪器和设备、操作步骤 及结果表示。 本标准适用于食用菌中甲醛的含量测定。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应 用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。 凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法。 3 原理 用衍生液提取样品
3、中的甲醛，反应生成甲醛衍生物。液液萃取净化后，在 365 nm波长处，液相色谱 法测定，外标法定量。 4 试剂和材料 4.1 试剂 4.1.1 乙 腈 （ C2H3N）。 4.1.2 硫酸铵 （ (NH4)2SO4）。 4.1.3 冰乙酸 （ C2H4O2）。 4.1.4 乙酸钠 （ C2H3NaO2）。 4.1.5 2, 4-二硝基苯肼：纯度 99%（ C6H6N4O4） 4.1.6 水（ H2O）： GB/T 6682规定的一级水 。 注： 除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯。 4.2 试剂配制 4.2.1 缓冲溶液（ pH 5）：称取 2.64 g乙酸钠，以适量水溶解，加入 1.0
4、mL冰乙酸，用水定容至 500 mL。 4.2.2 2, 4-二硝基苯肼溶液（ 0.6 g/L）：称取 2,4-二硝基苯肼 300 mg，用乙腈溶解定容至 500 mL。 4.2.3 衍生液：量取 100 mL缓冲溶液和 100 mL 2,4-二硝基苯肼溶液，混匀。 4.3 标准 溶液 甲醛标准溶液 ： 100 g/mL。安培瓶封装，置于 10 以上保存，使用前于室温下平衡，摇匀，推荐 打开后一次性使用，或 者将标准溶液转移至棕色瓶密封。 DB12/T 883 2019 2 5 仪器和设备 5.1 高效液相色谱仪：配有二极管阵列检测器或紫外检测器 。 5.2 天平：感量 0.001 g。 5.
5、3 粉碎机 。 5.4 涡旋 混合 仪 。 5.5 离心机：转速 4000 r/min。 5.6 恒温振荡器 。 5.7 具塞塑料离心管：聚丙烯， 50 mL。 5.8 具塞比色管或刻度试管： 20 mL。 6 试样制备与保存 从所取全部样品中取出样品约 500 g，取可食部分经粉碎机充分粉碎均匀，均分成两份，分别装入 洁净容器内作为试样，密封并注明标记。鲜样于 -18 下冷冻保存；干样于 0 4 下冷藏保存。 7 分析步骤 7.1 提取 称取已混匀的鲜样 5.0 g（干品 1.0 g），精确至 0.001 g，置于 50 mL塑料离心管中，准确加入 10.0 mL 衍生液。旋紧塞子，涡旋混匀
6、后置于 60 恒温振荡器中， 150 r/min振摇，间隔 20 min取出混匀一次， 振摇 1 h后取出冷却至室温。 7.2 净化 将 样品 提取液，以不低于 4000 r/min离心 5 min。如离心后溶液澄清，过 0.22 m微孔滤膜后， 滤液 直接供 HPLC测定。如离心后溶液浑浊或分层，在提取液中加入 8 g硫酸铵，混匀，以不低于 4000 r/min 离心 5 min。移取上清液于 20 mL具塞比色管或刻度试管 中，下层溶液用 5 mL乙腈重复萃取一次，合并上 清液，用乙腈定容至 10.0 mL，混匀后，过 0.22 m微孔滤膜，滤液供 HPLC测定。 7.3 甲醛衍生物标准溶
7、液的制备 移取 0 L、 20 L、 50 L、 100 L、 200 L、 500 L甲醇标准溶液（ 4.3），置于 10 mL具塞比色管 中，补加缓冲溶液（ 4.2.1）至 5.0 mL，再用 2,4-二硝基苯肼溶液（ 4.2.2）定容至 10.0 mL，盖上塞后 混匀， 60 水浴加热 1 h，取出冷却至室温。过 0.22 m微孔滤膜，滤液供 HPLC测定。 7.4 测定条件 液相 色谱条件如下： 色谱柱： C18， 5 m， 4.6250 mm； 流速： 1.0 mL/min； 柱温： 30 ； 进样量： 20 L； 流动相： 甲醇 -水（ 70-30）； 检测波长： 365 nm。
8、DB12/T 883 2019 3 7.5 色谱测定 标准溶液和样液中甲醛衍生物的响应值应在仪器检测的线性范围内 ， 以峰面积为 纵 坐标，甲醛衍生 物标准溶液对应的甲醛浓度为横坐标，绘制标准曲线。 通过 保留时间定性，外标法定量 。 色谱图 参 见 附录 A。 8 分析结果 表述 试样中 甲醛 的 残留 量按式（ 1）计算： )1.(.1000m 1000 VCX . (1) 式中： X 试样中甲醛的残留量，单位为毫克每千克（ mg/kg）； C 从标准工作曲线得到的样液对 应 的甲醛浓度，单位为毫克每升（ mg/L）； V 样液最终定容体积，单位为毫升 (mL)； m 样液所代表的试样质量，单位为克 (g)。 测定结果保留到小数点后两位。 9 测定低限 本标准对食用菌中甲醛的测定低限为 0.1mg/kg。 10 测定低限 在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的 10 %。 DB12/T 883 2019 4 附 录 A （资料性附录） 标准品色谱图 注： 1. 2， 4-二硝基苯肼 2. 甲醛 -2,4-二硝基苯腙 图 A.1 甲醛衍生物的标准液相色谱图 _
