1、ICS 65.020.30 B 44 DB12 天津市 地 方 标 准 DB12/T 862 2019 水产微生态制剂 乳酸菌生产技术规程 Aquatic probiotics - Technical regulation for production of lactic acid bacteria 2019 - 01 - 14发布 2019 - 02 - 15实施 天津市市场监督管理委员会 发布 DB12/T 862 2019 I 前 言 本标准依 据 GB/T 1.1 2009标准化工作导则 第 1部分：标准的结构和编写的要求起草。 本标准由天津市农业科学院 提出并 归口。 本标准起草单位
2、： 天津市农业生物技术研究中心。 本标准主要起草人：谢凤行、张峰峰、周可、赵琼、赵玉洁、孙海波 、高宝山 。 DB12/T 862 2019 1 水产微生态制剂 乳酸菌生产技术规程 1 范围 本标准规定了 乳酸菌 生产中所涉及的 术语和定义、 生产环境 和 设备 要求 、 生产技术流程、 质量检测 和 储运 。 本标准适用于 水产微生态制剂 乳酸菌的生产 。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期 的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB 3095 环境空气质量标准 GB 3838 地表
3、水环境质量标准 GB 20287 农用微生物菌剂 3 术 语和定义 下列术语和定义适用于本标准。 3.1 乳酸菌 lactic acid bacteria 能 利用碳水化合物产生 乳酸的一类无芽孢、革兰氏染色阳性细菌的总称，在水产养殖中可作为饲 料 添加剂和水质净化剂。 注： 本标准中涉及的乳酸菌主要包括植物乳杆菌 (lactobacillus plantarum)、嗜酸乳杆菌 (lactobacillus acidophilus)、戊糖乳杆菌 (lactobacillus pentosus)、德氏乳杆菌 (lactobacillus leichmannii)和粪肠球 菌 (enterococ
4、cus faecalis)。 3.2 原菌种 the original strain 由单菌落分离纯化，并在试管上穿刺繁殖保存的菌种。 3.3 一级菌种 first class strain 原菌种在培养皿上活化，挑取单菌落接种至玻璃瓶中， 并 厌氧培养的菌种。 3.4 二级菌种 second class strain 玻 璃瓶中的菌种接种至种子罐中，在种子罐中厌氧放大培养的菌种。 4 生产环境和设备 要求 4.1 生产环境 DB12/T 862 2019 2 4.1.1 厂区空气质量应符合大气环境质量标准 GB 3095中类要求。 4.1.2 发酵用水应符合地表水环境质量标准 GB 3838
5、中类水质要求，冷却水及其他用水符合该标准 中类水质要求。 4.1.3 生产车间配备消毒灭菌设施 ， 菌种储藏室和无菌操作间与生产车间 分开。 4.2 生产设备 生产设备需为不锈钢发酵罐，体积根据生产规模自定。 5 生产技术流程 5.1 生产流程 见附录 A。 5.2 菌种质量 5.2.1 用于发酵的 菌种应有菌种鉴定报告或 菌株 来源相关信息 。 5.2.2 发酵前应先检测菌种的纯度和性能，如不纯或退化，应先进行提纯复壮。 5.2.3 菌种在 上罐生产之前需检测种子罐中菌体的纯度和浓度，不能有杂菌污染，浓度达到每毫升亿 级以上，发酵菌液 pH 4.0。 5.3 培养基 5.3.1 原菌种和一级
6、菌种的培养基应保证菌种生长的延滞期短，生长旺盛，碳 、 氮源营养丰富。 5.3.2 二级菌种培养基原则上为发酵培养基或接近发酵培养基。 5.3.3 发酵培养基在保证菌体生长旺盛 的前提下 ，尽量利用来源充足、价格低廉的原料。 5.4 灭菌 5.4.1 液体发酵，发酵罐的装液量 60% 70%，液体培养基、发酵设备、管道、补料罐等采用高压蒸汽 灭菌，灭菌条件为 115 121， 0.1 MPa 0.15 MPa，灭菌 20 min 30 min。 5.4.2 固体物料含水率 为 50% 5%，灭菌条件为 115 121 ， 0.1 MPa 0.15 MPa，灭菌 1.0 h 1.5 h。 5.4
7、.3 灭菌后无菌操作取灭菌后的培养基，制片，染色，镜检，无微生物说明灭菌彻底，若有，需重 复 5.3的工作。 5.5 接种 一级 种子到 二级 种子接种量为 3% 5%， 二级种子 到发酵罐接种量 为 5% 7%。接种 时需要 无菌操作， 调节进、排气阀 （通入的气体为氮气或 其它惰性气体 ） ，使 接种口有气体排出 。 5.6 发酵 5.6.1 乳酸菌的发酵温度控制在 25 35 。 5.6.2 发酵过程中不通气，或通入氮气，搅拌转数 50 r/min 100 r/min。 5.6.3 当有效活菌数达到每毫升十亿级， 并 pH降低到 4.0以下，结束发酵。 5.6.4 发酵周期为 24 h
8、48 h。 5.7 发酵后处理 DB12/T 862 2019 3 发酵后的液体菌剂 、 固体 菌剂 密封包装 ， 包装容器经过 灭菌 处理。 6 质量检测 6.1 检测指标 每个批次的产品抽样检测 包括 感官、水分、 pH、 有效 活菌数和杂菌率 等指标 ，检验合格方可出厂。 6.2 感官检测 6.2.1 取 菌液 250 mL（或固体菌剂 250 g） 于无色玻璃杯中，采用目测、鼻嗅的方法进行检验。 6.2.2 菌液为浅棕至深棕色的悬浊液，有特殊 的酸香味 。固体菌剂因培养基原料不同呈现不同颜色， 有特殊的酸香味 。 6.3 pH测定 按 GB 20287执行 。 6.4 有效活菌数 检测
9、 乳酸菌有效活菌数的测定按 GB 20287规定检测。 6.5 杂菌率的测定（好氧或兼性厌氧杂菌） 从用来测定有效活菌数且已经过 10倍系列稀释的样品中，选取 3个 稀释度 （ 10-5、 10-6、 10-7） 进行 杂菌率测定。平板 计 数法，按 GB 20287操作。 6.6 固体菌剂水分含量测定 按 GB 20287执行 。 7 储运 7.1 应贮存在通风、干燥、清洁的仓库，仓库内无有害气体、易燃易爆物品及腐蚀性化学物品，远离 热源。 7.2 长途运输 时，防止日晒、雨淋，避免长期受压和机械损伤 ， 产品不应和易燃、易爆、易腐蚀的物 品同车（或其他运输工具）装运。 DB12/T 862 2019 4 A A 附 录 A （规范性附录） 乳酸菌生产技术流程图 图 A.1 乳酸菌生产技术流程图 _ 原 菌种 一级菌种 二级菌种 配置培养基 接种 发酵 合格 灭菌 质量检测 合格 不合格 按规 定处理 出厂 发酵物检测 不合格 按规定处理 发酵后处理 纯度和性能检查
