1、ICS 11 020C 61 WS中 华 人 民 共 和 国 卫 生 行 业 标 准WS T 631 2018日本血吸虫毛蚴检测尼龙绢袋集卵孵化法 Detection of Schistosoma japonicum miracidium Egg hatching method after nylon mesh bag concentration 2018 09 26发布 2019 04 01实施中华人民共和国国家卫生健康委员会发布 WS T 631 2018 I 前 言本标准按照GB T 1 1 2009给出的规则起草 本标准由国家卫生标准委员会寄生虫病标准专业委员会提出 本标准起草单位 浙
2、江省医学科学院寄生虫病研究所 中国疾病预防控制中心寄生虫病预防控制所 安徽省血吸虫病防治研究所 江西省寄生虫病防治研究所 浙江省开化县疾病预防控制中心 本标准主要起草人 严晓岚 闻礼永 郑彬 汪天平 熊彦红 张剑锋 林丹丹 卢美 周晓农 WS T 631 2018 1 日本血吸虫毛蚴检测 尼龙绢袋集卵孵化法1 范围本标准规定了检测人体粪便中日本血吸虫毛蚴的尼龙绢袋集卵孵化法 本标准适用于各级疾病预防控制机构和医疗机构对日本血吸虫毛蚴的检测 2 规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的 凡是注日期的引用文件 仅所注日期的版本适用于本文件 凡是不注日期的引用文件 其最新版本 包括所有的修
3、改单 适用于本文件 WS 233 病原微生物实验室生物安全通用准则3术语和定义下列术语和定义适用于本文件 3 1日本血吸虫虫卵 Schistosoma japonicum egg呈椭圆形 淡黄色 大小为 74 106 m 55 80 m 卵壳薄而均匀 无卵盖 侧面有一小棘 成熟虫卵内可见毛蚴 3 2 日本血吸虫毛蚴 Schistosoma japonicum miracidium日本血吸虫幼虫发育中的最早阶段 呈梨形或长椭圆形 左右对称 银灰色 大小为 78 120 m 30 40 m 前端有锥形突起 体表具有纤毛 3 3 毛蚴孵化 miracidiumhatching毛蚴在日本血吸虫虫卵内完
4、成胚胎发育后破壳而出的现象 4仪器设备4 1 光照培养箱 WS T 631 2018 2 光照强度 1 Lx 5000 Lx4 2 显微镜光学显微镜 40 400 4 3 放大镜放大倍数 10 5试剂材料5 1 孵化用水采用无原生动物 水中余氯低于0 3 mg L pH 6 8 7 2的清洁水 参见附录A 5 2 尼龙绢袋57 m 25 4 mm 260目 尼龙绢袋 参见附录B 5 3 筛子孔径为250 m 25 4 mm 60目 5 4 烧瓶250 mL或500 mL三角或长颈烧瓶 5 5 其他压舌板或竹签 夹子 毛细吸管 载玻片 2 碘酒等 6 检测步骤 6 1样本准备采集受检者新鲜粪便
5、重量不少于30 g 存放于广口带盖且防渗漏洁净的密闭容器中 将受检者基本信息 姓名 编号 送检日期 标记于容器外部 采集后的样本应及时送检 如未能及时检测 应在4 条件下冷藏保存 时间不超过24 h 6 2 样本检测6 2 1 验收登记验看粪便重量 质量及标签 核对无误后统一编号 登记 6 2 2 淋水冲洗6 2 2 1 将筛子叠放于尼龙绢袋上 尼龙绢袋下口用夹子夹住 6 2 2 2 取受检者粪便30 g置于筛子中 用水冲淋 压舌板或竹签调浆 使粪液滤入尼龙绢袋中 6 2 2 3 移去筛子 继续用水冲洗袋内粪渣 用压舌板或竹签轻轻振荡尼龙绢袋使过滤加速 直至滤出液变清为止 WS T 631 2
6、018 3 6 2 2 4 将尼龙绢袋下口移入烧瓶口内 取下夹子 将袋内的滤渣用孵化用水淋洗入烧瓶 继续加孵化用水满至离瓶口1 cm处 6 2 3 毛蚴孵化将盛有滤渣的烧瓶置于光照培养箱 20 30 或相同室温下孵化 在3 600 Lx 3 800 Lx光照强度下 孵化4 h 12 h 范围为0 5 h 24 h 需观察2 3次 参见附录C 每批实验均需设置血吸虫虫卵阳性粪便作为对照 6 2 4 毛蚴观察取出烧瓶 瓶口向着光源 背衬以黑色背景 平视观察水面下0 4 cm范围内浮游生物 每瓶每次观察时间不少于3 min 必要时可用放大镜观察 发现毛蚴后 用毛细吸管吸出 均匀分滴于载玻片上 观察其
7、游动状态 然后加1滴碘酒固定 在显微镜下 40 100 观察形态 毛蚴应与水中原生动物 相鉴别 参见附录D 为提高检出率 如孵化阴性 可进行沉渣镜检虫卵 6 3 结果判定查见日本血吸虫毛蚴即判定为阳性 WS T 631 2018 4 AA附 录 A 资料性附录 孵化用水 用具及废弃物处理A 1孵化用水处理A 1 1自来水处理 将自来水放在敞开的容器内静置24 h让其自然脱氯 或在自来水中加入硫代硫酸钠 4 mg L 8 mg L 静置30 min后使用 A 1 2井水处理 若水质较浑浊 可静置至澄清或加入明矾澄清水质 30 mg L 40 mg L 若含有水中原生动物 可加入65 有效氯的漂精
8、片 3 4 mg L 或30 有效氯的漂白粉 7 mg L 进行杀虫 然后静置24 h自然脱氯或硫代硫酸钠脱氯 A 1 3余氯测定取处理后的水100 mL于纳氏比色管中 加邻甲苯联胺5 mL混合2 min 3 min后 与余氯标准管比色测定 达到杀死水中原生动物的水余氯浓度应为0 7 mg L 1 0 mg L 符合孵化用水余氯浓度应低于0 3 mg L A 1 4 pH调节孵化用水需经过pH值的测试 若水质偏酸 可采用10 氢氧化钠溶液调节 若水质偏碱 可用10 盐酸溶液调节 调节至最适宜的pH值范围内 A 2 孵化用具处理用具每次使用后要洗刷干净 用70 80 热水浸泡2 min 3 mi
9、n灭卵 A 3 废弃物处理存放粪便样本的容器 调浆后的淋洗水 粪渣等废弃物依据 WS 233进行处理 WS T 631 2018 5 B附 录 B 资料性附录 尼龙绢袋和筛子制作尼龙绢袋 呈圆锥弧形 上口直径为80 mm 下口直径为15 mm 深200 mm 绢孔为57 m 25 4 mm 260目 示意图见图B 1 筛子 呈圆柱形 外径为90 mm 内径为75 mm 筛孔为250 m 25 4 mm 60目 示意图见图B 1 图 B 1尼龙绢袋和筛子示意图 WS T 631 2018 6 附 录 C 资料性附录 毛蚴孵化观察时间毛蚴孵化一般需观察2 3次 观察时间随温度高低而不同 温度高时毛
10、蚴孵化快 温度低时毛蚴孵化慢 25 是毛蚴孵化的适宜温度 温度超过30 时 第1次观察可在0 5 h 1 h后进行 阴性者可在4 h后观察第2次 8 h后观察第3次 温度在26 29 时 可在孵化后4 h开始观察 阴性者8 h及12 h再观察1次 温度在20 25 时 则可在8 h后观察第1次 12 h后观察第2次 24 h后观察第3次 温度在15 19 时 则可在12 h后观察第1次 24 h后观察第2次 当室温在25 以上时 可利用自然条件孵化 无需加温 见表C 1 表C 1 不同温度下观察毛蚴的时间温度 观察毛蚴时间 h 第1次 第2次 第3次30 40 0 5 1 0 4 826 29
11、 4 8 1220 25 8 12 2415 19 12 24 WS T 631 2018 7 附 录 D 资料性附录 毛蚴与水中原生动物鉴别观察毛蚴时 应将烧瓶向着光源 并衬以黑色背景肉眼观察 必要时在显微镜下进行鉴别 毛蚴与水中原生动物的鉴别要点见表D 1 表D 1 毛蚴与水中原生动物的鉴别要点鉴别要点 毛 蚴 原 生 动 物形 状 针尖大 大小一致 稍带长形 大小不一 扁形或圆形颜 色 透明发亮 有折光 灰黄或灰白色 不透明 无折光 游动速度 游动迅速 来回不停 匀速前进 游动缓慢 时游时停 游速不匀游动方向 都为直线的斜向 横向 直向前进 多为曲线 无一定方向游动方式 呈直线式 碰壁后折回 折回后又直线匀速前进 呈间歇式 波浪式 螺旋式 跳板式和摇摆式等游动范围 多在水面下0 4 cm范围内 范围广 水之上 中 下层都有 WS T 631 2018 8 参 考 文 献 1 闻礼永 血吸虫病监测手册 北京 人民卫生出版社 2014 2 吴观陵 人体寄生虫学 4版 北京 人民卫生出版社 2013 3 周晓农 人体寄生虫病基层预防控制丛书 北京 人民卫生出版社 2011 4 卫生部疾病控制司 血吸虫病防治手册 3版 上海 上海科学技术出版社 2000 5 WS261 2006血吸虫病诊断标准 中华人民共和国卫生部
