1、 Numros de rfrence ISO/TS 15495:2010(F) FIL/MR 230:2010(F) ISO et FIL 2010SPCIFICATION TECHNIQUE ISO/TS 15495 FIL/MR 230 Premire dition 2010-11-01Lait, produits laitiers et formules infantiles Lignes directrices pour la dtermination quantitative de la mlamine et de lacide cyanurique par CL-SM/SM Mil
2、k, milk products and infant formulae Guidelines for the quantitative determination of melamine and cyanuric acid by LC-MS/MS ISO/TS 15495:2010(F) FIL/MR 230:2010(F) PDF Exonration de responsabilit Le prsent fichier PDF peut contenir des polices de caractres Intgres. Conformment aux conditions de lic
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6、problme dutilisation, veuillez en Informer le Secrtariat central de lISO ladresse donne ci-dessous. DOCUMENT PROTG PAR COPYRIGHT ISO et FIL 2010 Droits de reproduction rservs. Sauf prescription diffrente, aucune partie de cette publication ne peut tre reproduite ni utilise sous quelque forme que ce
7、soit et par aucun procd, lectronique ou mcanique, y compris la photocopie et les microfilms, sans laccord crit soit de lISO soit de la FIL, lune ou lautre des adresses ci-aprs. ISO copyright office Fdration Internationale de Laiterie Case postale 56 CH-1211 Geneva 20 Diamant Building Boulevard Augus
8、te Reyers 80 B-1030 Bruxelles Tel. + 41 22 749 01 11 Tel. + 32 2 733 98 88 Fax + 41 22 749 09 47 Fax + 32 2 733 04 13 E-mail copyrightiso.org E-mail Infofil-idf.org Web www.iso.org Web www.fil-idf.org Publi en Suisse ii ISO et FIL 2010 Tous droits rservsISO/TS 15495:2010(F) FIL/MR 230:2010(F) ISO et
9、 FIL 2010 Tous droits rservs iiiSommaire Page Avant-propos .iv Avant-propos v 1 Domaine dapplication 1 2 Rfrences normatives.1 3 Termes et dfinitions 1 4 Principe 2 5 chantillonnage.2 6 Prparation de lchantillon pour essai 2 7 Mode opratoire.3 7.1 Analyse CL-SM/SM Chromatographie 3 7.2 Analyse CL-SM
10、/SM Spectromtrie de masse 3 8 Critres de performance.3 8.1 Gnralits .3 8.2 Sensibilit minimale requise 3 8.3 Exactitude et recouvrement .4 8.4 Rptabilit 4 8.5 Reproductibilit interlaboratoires4 9 Rapport dessai4 Annexe A (informative) Exemple A Lait de vache et formule infantile base de lait Dtermin
11、ation quantitative simultane de la teneur en mlamine et en acide cyanurique par chromatographie en phase liquide avec ionisation par lectrospray et spectromtrie de masse en tandem .5 Annexe B (informative) Exemple B Analyse quantitative de la mlamine et de lacide cyanurique dans une formule infantil
12、e base de lait et dans du lait de vache par chromatographie en phase liquide laide de la spectromtrie de masse pige ionique linaire 20 Bibliographie.31 ISO/TS 15495:2010(F) FIL/MR 230:2010(F) iv ISO et FIL 2010 Tous droits rservsAvant-propos LISO (Organisation internationale de normalisation) est un
13、e fdration mondiale dorganismes nationaux de normalisation (comits membres de lISO). Llaboration des Normes internationales est en gnral confie aux comits techniques de lISO. Chaque comit membre intress par une tude a le droit de faire partie du comit technique cr cet effet. Les organisations intern
14、ationales, gouvernementales et non gouvernementales, en liaison avec lISO participent galement aux travaux. LISO collabore troitement avec la Commission lectrotechnique internationale (CEI) en ce qui concerne la normalisation lectrotechnique. Les Normes internationales sont rdiges conformment aux rg
15、les donnes dans les Directives ISO/CEI, Partie 2. La tche principale des comits techniques est dlaborer les Normes internationales. Les projets de Normes internationales adopts par les comits techniques sont soumis aux comits membres pour vote. Leur publication comme Normes internationales requiert
16、lapprobation de 75 % au moins des comits membres votants. Dans dautres circonstances, en particulier lorsquil existe une demande urgente du march, un comit technique peut dcider de publier dautres types de documents: une Spcification publiquement disponible ISO (ISO/PAS) reprsente un accord entre le
17、s experts dans un groupe de travail ISO et est accepte pour publication si elle est approuve par plus de 50 % des membres votants du comit dont relve le groupe de travail; une Spcification technique ISO (ISO/TS) reprsente un accord entre les membres dun comit technique et est accepte pour publicatio
18、n si elle est approuve par 2/3 des membres votants du comit. Une ISO/PAS ou ISO/TS fait lobjet dun examen aprs trois ans afin de dcider si elle est confirme pour trois nouvelles annes, rvise pour devenir une Norme internationale, ou annule. Lorsquune ISO/PAS ou ISO/TS a t confirme, elle fait lobjet
19、dun nouvel examen aprs trois ans qui dcidera soit de sa transformation en Norme internationale soit de son annulation. Lattention est appele sur le fait que certains des lments du prsent document peuvent faire lobjet de droits de proprit intellectuelle ou de droits analogues. LISO ne saurait tre ten
20、ue pour responsable de ne pas avoir identifi de tels droits de proprit et averti de leur existence. LISO/TS 15495FIL/MR 230 a t labore par le comit technique ISO/TC 34, Produits alimentaires, sous-comit SC 5, Lait et produits laitiers, et la Fdration internationale de Laiterie (FIL). Elle est publie
21、 conjointement par lISO et la FIL. ISO/TS 15495:2010(F) FIL/MR 230:2010(F) ISO et FIL 2010 Tous droits rservs vAvant-propos La FIL (Fdration Internationale de Laiterie) est une organisation sans but lucratif reprsentant le secteur laitier mondial. Les membres de la FIL se composent des Comits Nation
22、aux dans chaque pays membre et des associations laitires rgionales avec lesquelles la FIL a sign des accords de coopration. Tout membre de la FIL a le droit de faire partie des Comits permanents de la FIL auxquels sont confis les travaux techniques. La FIL collabore avec lISO pour llaboration de mth
23、odes normalises danalyse et dchantillonnage pour le lait et les produits laitiers. La tche principale des Comits permanents est dlaborer les Normes internationales. Les projets de Normes internationales adopts par les Comits permanents sont soumis aux Comits Nationaux pour approbation avant publicat
24、ion en tant que Norme internationale. La publication comme Norme internationale requiert lapprobation de 50 % au moins des Comits Nationaux de la FIL votants. Dans dautres circonstances, particulirement quand une demande urgente du march survient pour de tels documents, un Comit permanent peut dcide
25、r de publier un autre type de document valeur de norme que la FIL appelle Mthode rvise. Une telle mthode illustre un consensus entre les membres dun Comit permanent et est accepte pour publication si elle est approuve par au moins 50 % des Comits Nationaux mettant un vote. Une Mthode rvise est quiva
26、lente une ISO/PAS ou une ISO/TS et sera donc aussi publie conjointement selon les conditions ISO. Lattention est appele sur le fait que certains des lments du prsent document peuvent faire lobjet de droits de proprit intellectuelle ou de droits analogues. La FIL ne saurait tre tenue pour responsable
27、 de ne pas avoir identifi de tels droits de proprit et averti de leur existence. LISO/TS 15495FIL/MR 230 a t labore par la Fdration Internationale de Laiterie (FIL) et le comit technique ISO/TC 34, Produits alimentaires, sous-comit SC 5, Lait et produits laitiers. Elle est publie conjointement par l
28、a FIL et lISO. Lensemble des travaux a t ralis par un Groupe de projet mixte sur la Dtermination de la mlamine du Comit permanent sur les Mthodes danalyse pour les additifs et les contaminants sous la conduite de ses chefs de projet, Dr S.E. Holroyd (NZ) et Dr T. Delatour (CH). SPCIFICATION TECHNIQU
29、E ISO/TS 15495:2010(F) FIL/MR 230:2010(F) ISO et FIL 2010 Tous droits rservs 1Lait, produits laitiers et formules infantiles Lignes directrices pour la dtermination quantitative de la mlamine et de lacide cyanurique par CL-SM/SM 1 Domaine dapplication La prsente Spcification technique fournit des li
30、gnes directrices pour la dtermination quantitative de la teneur en mlamine et en acide cyanurique dans le lait, les produits laitiers en poudre et les formules infantiles par chromatographie en phase liquide avec ionisation par lectrospray et spectromtrie de masse en tandem (CL-SM/SM). NOTE Des exem
31、ples de mthodes CL-SM/SM sont donns dans les Annexes A et B. 2 Rfrences normatives Les documents de rfrence suivants sont indispensables pour lapplication du prsent document. Pour les rfrences dates, seule ldition cite sapplique. Pour les rfrences non dates, la dernire dition du document de rfrence
32、sapplique (y compris les ventuels amendements). ISO 3534 (toutes les parties), Statistique Vocabulaire et symboles ISO 5725-1, Exactitude (justesse et fidlit) des rsultats et mthodes de mesure Partie 1: Principes gnraux et dfinitions 3 Termes et dfinitions Pour les besoins du prsent document, les te
33、rmes et dfinitions donns dans lISO 3534 et lISO 5725-1, ainsi que les suivants sappliquent. 3.1 teneur en mlamine fraction massique de substance dtermine par les modes opratoires spcifis dans la prsente Spcification technique NOTE La teneur en mlamine est exprime en milligrammes par kilogramme de pr
34、oduit. 3.2 teneur en acide cyanurique fraction massique de substance dtermine par les modes opratoires spcifis dans la prsente Spcification technique NOTE La teneur en acide cyanurique est exprime en milligrammes par kilogramme de produit. ISO/TS 15495:2010(F) FIL/MR 230:2010(F) 2 ISO et FIL 2010 To
35、us droits rservs3.3 limite maximale LM teneur maximale en mlamine ou en acide cyanurique autorise ou acceptable dans le lait, les produits laitiers en poudre ou les formules infantiles NOTE La LM peut tre une limite spcifie nationalement ou internationalement ou un seuil de danger dfini. 4 Principe
36、Lchantillon est homognis et facultativement reconstitu en cas dchantillons pulvrulents. Un solvant appropri est ajout lchantillon pour essai pour prcipiter les protines de la matrice et extraire la mlamine et lacide cyanurique. Aprs centrifugation, une aliquote du surnageant est analyse par CL-SM/SM
37、. Pour les besoins de la prsente Spcification technique, le terme CL-SM/SM dsigne toute mthode combinant soit la chromatographie liquide haute performance (CLHP) soit la chromatographie liquide ultraperformance (CLUP) et la dtection spectromtrique de masse triple quadriple ou pige ionique. La sparat
38、ion chromatographique sappuie sur la chromatographie liquide dinteraction hydrophile (CLIH) pour garantir une bonne sparation de la mlamine et de lacide cyanurique. Lionisation de la substance est effectue par ionisation par lectrospray (IES) et la dtection est ralise en mode SRM (selected reaction
39、monitoring). NOTE Dautres techniques dionisation suffisamment performantes peuvent tre utilises. Dautres analyseurs de masse peuvent tre utiliss condition quils remplissent les critres de performance (points didentification) de la dcision 2002/657/CE (Rfrence 8). La quantification de la mlamine et d
40、e lacide cyanurique repose sur la dilution isotopique utilisant des talons internes isotopiques stables pour les deux analytes. 5 chantillonnage Lchantillonnage ne fait pas partie de la mthode spcifie dans la prsente Spcification technique. Une mthode dchantillonnage recommande est donne dans lISO 7
41、07FIL 50 1 . Il est important que le laboratoire reoive un chantillon rellement reprsentatif, non endommag ou modifi lors du transport ou de lentreposage. 6 Prparation de lchantillon pour essai Il convient que la masse de lchantillon pour essai destin tre analys ou soumis la reconstitution facultati
42、ve soit reprsentative du produit et approprie lextraction efficace des analytes cibles. Lors de la premire tape danalyse, il convient de supplmenter directement les talons isotopiques marqus dans lchantillon sec ou humide. Il convient que la concentration en talons internes ajouts soit du mme ordre
43、de grandeur que celui tudi pour la mlamine et lacide cyanurique. Lextraction peut tre effectue avec au moins 5 ml de solvant dextraction par gramme de matriau chantillon afin de donner une fraction massique finale de solvant organique en pourcentage dans le mlange dextraction dau moins 70 %. Il conv
44、ient que lextraction dure au moins 5 min en agitant nergiquement ou en combinant passage aux ultrasons et passage au vortex. Il convient ensuite de centrifuger lchantillon dans des conditions appropries et de le filtrer laide dun filtre pour seringue. Toute autre alternative est acceptable condition
45、 que les critres de performance et de validation soient conformes aux exigences spcifies dans la prsente Spcification technique. ISO/TS 15495:2010(F) FIL/MR 230:2010(F) ISO et FIL 2010 Tous droits rservs 37 Mode opratoire 7.1 Analyse CL-SM/SM Chromatographie Effectuer la sparation par chromatographi
46、e liquide laide dune colonne rserve cet effet. Le temps de rtention minimal acceptable pour la mlamine et lacide cyanurique doit tre deux fois suprieur au temps de rtention correspondant au volume mort de la colonne. Le temps de rtention dans lextrait dchantillon doit correspondre celui de ltalon da
47、ns une plage de temps de rtention spcifie. Le rapport du temps de rtention relatif de lanalyte celui de ltalon interne doit correspondre celui des talons, avec une tolrance de 2,5 %. 7.2 Analyse CL-SM/SM Spectromtrie de masse La dtection spectromtrique de masse de la mlamine et de lacide cyanurique doit tre effectue en utilisant de prfrence un instrument CL-SM/SM triple quadriple. La dtermination quantitative et lidentification doivent tre ralises en mode SRM. Lorsquun instrument triple quadriple est utilis pour cha
