1、NORME INTERNATIONALE INTERNATIONAL ORGANIZATION FOR STANDARDIZATION ORGANISATION INTERNATIONALE DE NORMALISATION MEXAYHAPOJJHAR OPTAHM3AMR Il0 CTAHflAPTM3AWl Sorgho - Dosage des tanins Sorghum - Determina tion of tannin content ISO 9648 Premire dition 1988-12-15 Numro de rfrence KO 9648 : 1988 (F) I
2、sO 9648 : 1988 (FI Avant-propos LISO (Organisation internationale de normalisation) est une fdration mondiale dorganismes nationaux de normalisation (comits membres de IISO). Llaboration des Normes internationales est en gnral confie aux comits techniques de IISO. Chaque comit membre intress par une
3、 tude a le droit de faire partie du comit technique cr cet effet. Les organisations internationales, gouvernementales et non gouvernementales, en liaison avec IISO participent galement aux travaux. LISO col- labore troitement avec la Commission lectrotechnique internationale (CEI) en ce qui concerne
4、 la normalisation lectrotechnique. Les projets de Normes internationales adopts par les comits techniques sont soumis aux comits membres pour approbation, avant leur acceptation comme Normes inter- nationales par le Conseil de IISO. Les Normes internationales sont approuves confor- mment aux procdur
5、es de IISO qui requirent lapprobation de 75 % au moins des comits membres votants. La Norme internationale ISO 9648 a t labore par le comit technique ISO/TC 34, Produits agricoles alimentaires. 0 Organisation internationale de normalisation, 1988 Imprim en Suisse NORME INTERNATIONALE ISO 9648 : 1988
6、 (F) Sorgho - Dosage des tanins 1 Domaine dapplication La prsente Norme internationale prescrit une mthode globale de dosage des tanins dans les graines de sorgho. Elle nest pas spcifique dun seul type de polyphnols. Son intrt se justifie cependant par la bonne corrlation ngative qui a t observe ent
7、re lnergie mtabolisable des graines de sorgho, mesuree par exprimentation animale sur des coqs, et les rsultats obtenus par cette mthode. 2 Rfrences normatives Les normes suivantes contiennent des dispositions qui, par suite de la rfrence qui en est faite, constituent des disposi- tions valables pou
8、r la prsente norme internationale. Au moment de la publication, les ditions indiques taient en vigueur. Toute norme est sujette rvision et les parties pre- nantes des accords fonds sur cette norme internationale sont invites rechercher la possibilit dappliquer les ditions les plus rcentes des normes
9、 indiques ci-aprs. Les membres de la CEI et de IISO possdent le registre des normes internationa- les en vigueur un moment donn. ISO 712 : 1985, Crales et produits craliers - Ddtermination de la teneur en eau fMthode de rfrence pratique). ISO 950 : 1979, Crales - chan tilfonnage (des grains). 3 Prin
10、cipe Extraction des tanins par le dimthylformamide avec agitation. Aprs centrifugation, addition de citrate dammonium et de fer(lll) et dammoniaque une partie aliquote du liquide surna- geant et mesure spectromtrique de Iabsorbance de la solution ainsi obtenue, a 525 nm. Dtermination de la teneur en
11、 tanins en utilisant une courbe dtalonnage prpare partir dacide tannique. 4 Ractifs Tous les ractifs doivent tre de qualit analytique. Leau utili- se doit tre de leau distille ou de puret au moins quivalente. 4.1 Acide tannique, solution 2 g/l. Lorigine de lacide tannique ayant une influence certain
12、e sur la courbe dtalonnage, il est, en consquence, recommand dutiliser lacide tannique Merck rfrence 773), pour permet- tre une comparaison des rsultats entre laboratoires. Cette solution se conserve une semaine. 4.2 Ammoniaque, solution 8,0 g/l de NHS. 4.3 Dimthylformamide, solution 75 % WV). Dans
13、une fiole jauge de 100 ml, introduire 75 ml de dimthyl- formamide. Diluer avec de leau, laisser refroidir et complter au trait repre. AVERTISSEMENT - La dimthylformamide est une substance nocive par inhalation et contact avec la peau, et irritante pour les yeux. 4.4 Citrate dammonium et de fer(lll),
14、 ayant une teneur en fer comprise entre 17 % (mlm) et 20 % (mlm), solution 3,5 g/l, prpare 24 h avant emploi. La teneur en fer du citrate ayant une influence sur les rsultats, celle-ci doit tre respecte imprativement. 5 Appareillage Matriel courant de laboratoire, et notamment 5.1 Broyeur mcanique,
15、permettant dobtenir des particules passant intgralement au travers du tamis (5.2). 5.2 Tamis, de 0,5 mm douverture de maille. 5.3 Centrifugeuse, permettant dobtenir une acclration centrifuge de 3 OOOg (3 000 x 9,81 m/s2). 5.4 Tubes centrifuger, denviron 50 ml de capacit, munis de bouchons fermant he
16、rmtiquement. 1) Lacide tannique Merck rfrence 773 est un exemple dun produit appropri disponible sur le march. Cette information est donne lintention des utilisateurs de la prsente Norme internationale et ne signifie nullement que IISO approuve ou recommande lemploi exclusif de ce produit. Iso 9648
17、: 1988 (FI 5.5 Agitateur mcanique, agitateur magntique. 5.6 Agitateur Vortex). mcanique mouvement de va-et-vient, ou (type 5.7 Spectromtre, quip de cuves de 10 mm dpaisseur, permettant deffectuer les mesures 525 nm. 5.8 Pipettes, de 1 ml, 5 ml et 20 ml de capacit. 5.9 Pipettes gradues, de 5 ml et 10
18、 ml de capacit. 5.10 Tubes essais, 140 mm x 14 mm. 5.11 Fioles jauges, de 20 ml de capacit. 6 chantillonnage Lchantillonnage doit tre effectu conformment IISO 950. . liminer de lchantillon pour laboratoire les matires tran- gres au sorgho, puis broyer lchantillon dans le broyeur mcanique (5.1) afin
19、de le rduire en particules passant intgra- lement au travers du tamis (5.2). Bien homogniser. Les tanins des produits broys soxydent rapidement; il est donc recommand de procder immdiatement lanalyse aprs broyage. NOTE - Le produit broy peut tre conserv au plus labri de la lumire et, de prfrence, ap
20、rs schage. quelques jours, 8 Mode opratoire 81 . Teneur en eau de lchantillon pour essai Dterminer la teneur en eau de lchantillon pour essai selon IISO 712. 8.2 Prise dessai Introduire dans un tube tillon pour essai (article 7 centrifuger (5.4) environ ) pes 1 mg prs. 1 g dchan- 8.3 Dtermination 8.
21、3.1 Verser dans le tube centrifuger, la pipette (5.8), 20 ml de la solution de dimthylformamide (4.3). Boucher le tube hermtiquement et lagiter durant 60 min + 1 min laide de lagitateur (5.5). Centrifuger ensuite durant 10 min avec une acclration de 3 OOOg. 8.3.2 Prlever, laide dune pipette (5.81, 1
22、 ml du liquide sur- nageant (8.3.1) et lintroduire dans un tube essais (5.10). Ajouter successivement la pipette: 6 ml deau et 1 ml de la solution dammoniaque (4.21, puis agiter pendant quelques secondes laide de lagitateur (5.6). 8.3.3 Prlever, laide dune pipette (5.8), 1 ml du liquide sur- nageant
23、 (8.3.1) et lintroduire dans un tube essais (5.10). Ajouter successivement la pipette: 5 ml deau, 1 ml de la solution de citrate dammonium et de fer(lll) (4.41, agiter pen- dant quelques secondes laide de lagitateur (5.61, puis ajouter la pipette 1 ml de la solution dammoniaque (4.2) et agiter nouve
24、au pendant quelques secondes laide de lagitateur (5.6). 8.3.4 Transvaser les solutions obtenues en 8.3.2 et 8.3.3 dans des cuves de mesure et mesurer les absorbantes au spectro- mtre (5.71, 525 nm par rapport leau, 10 min + 1 min aprs la fin des oprations de 8.3.2 et 8.3.3. Prendre comme rsultat la
25、diffrence des deux absorbantes. 8.4 Nombre de dterminations Effectuer deux dterminations su du mme chantillon pour essai. r des prises dessai provenant 7 Prparation de lchantillon pour essai 8.5 tablissement de la courbe dtalonnage tablir la courbe dtalonnage journellement comme indiqu de a) CI. a)
26、Prparer six fioles jauges de 20 ml (5.11) et introduire laide dune pipette gradue (5.9) respectivement 0 ml, 1 ml, 2 ml, 3 ml, 4 ml et 5 ml de la solution dacide tannique (4.1). Complter au trait repre avec la solution de dimthyl- formamide (4.3). La gamme dtalonnage ainsi obtenue cor- respond des t
27、eneurs en acide tannique de 0 mg/ml, 0,l mg/ml, 0,2 mg/ml, 0,3 mg/ml, 0,4 mg/ml et 0,5 mg/ml. b) Introduire la pipette, dans des tubes essais (5.101, 1 ml de chacune de ces solutions et y ajouter, la pipette (5.81, successivement 5 ml deau et 1 ml de solution de citrate dammonium et de fer(lll) (4.4
28、1, agiter pendant quel- ques secondes laide de lagitateur (5.61, puis ajouter 1 ml de solution dammoniaque (4.2) et agiter nouveau pendant quelques secondes avec lagitateur (5.6). Transvaser les solutions ainsi obtenues dans des cuves de mesure et mesurer aprs 10 min + 1 min les absorbantes au spect
29、romtre, 525 nm, par rapport leau. CI Tracer la courbe dtalonnage en portant, en ordon- nes, les valeurs de Iabsorbance et, en abscisses, les con- centrations correspondantes dacide tannique de la gamme dtalonnage a), en milligrammes par millilitre. Cette droite ne passe pas par lorigine du zro ne do
30、it tre effectue. et au cune correction 2 ISO 9648 : 1988 (FI 9 Expression des rsultats 10 Fidlit La teneur en tanins, exprime en pourcentage en masse dacide tannique par rapport la matiere sche, est gale 2c 100 -x- m 100 - H o Un essai interlaboratoire organis en France avec la participa- tion de ne
31、uf laboratoires, dont les rsultats de huit laboratoires ont t retenus pour lanalyse statistique, chaque laboratoire ayant effectu trois dterminations sur chaque chantillon, a donn les rsutats statistiques (valus conformment IISO 5725) indiqus au tableau 1. c est la concentration en acide tannique, e
32、n milligrammes par millilitre, de la solution dessai, lue sur la courbe dta- lonnage 18.5 dl; 11 Rapport dessai m est la masse, en grammes, de la prise dessai (8.2); Ii est la teneur en eau de lchantillon pour essai, en pour- centage en masse (8.1). Le rapport dessai doit indiquer la mthode utilise
33、en prcisant la marque et la rfrence de lacide tannique retenu et le rsultat obtenu. II doit, en outre, mentionner tous les dtails opratoires non prvus dans la prsente norme internationale ou faculta- tifs, ainsi que les incidents ventuels susceptibles davoir agi sur le rsultat. Prendre comme rsultat
34、 la moyenne arithmtique des deux dterminations, si les conditions de rptabilit dduites du tableau 1 (article 10) par interpolation linaire sont remplies. Le rapport dessai doit donner tous les renseignements nces- saires lidentification complte de lchantillon. Tableau 1 Rsultats exprims en pourcenta
35、ge en masse dacide tannique par rapport la matire sche chantillon Moyenne Varit Argence 0,05 Varit NK 121 0,62 Varit Sultan 1,ll cart-type de rptabilit, s, 0,Ol 0,02 0,02 Coefficient de variation de rptabilit 21 % 3,3 % 1,9 % Rptabilit, 2,8 s, 0,03 o,m 0,06 cart-type de reproductibilit, sR 0,02 0,03
36、 0,07 Coefficient de variation de reproductibilit 44% 4,8 % 6,l % Reproductibilit, 2,8 sR 0,16 0,08 0,19 I 1) ISO 5725 : 1986, Fidlit des mthodes dessai - Dtermination de la rptabilit et de la reproductibilit dune mthode dessai normalise par essais in terlabora toires. 3 Page blanche Page blanche ISO 9648 : 1988 (FI CDU 633.174 : 543.8 : 547.98 Descripteurs : produit agricole, crale en grain, sorgho, analyse chimique, dosage, tanin. Prix bas sur 3 pages
