1、NORME IN.TERNATIONALE Iso 7346-3 Deuxime dition 1996-06-I 5 Qualit de leau - Dtermination de la toxicit aigu ltale de substances vis-vis dun poisson deau douce Bcydanio rerio Hamilton-Buchanan (Tlostei, Cyprinidae) - Partie 3: Mthode avec renouvellement continu Water quality - Determination of the a
2、cute lethal toxicity of substances to a freshwater fish Brachydanio rerio Hamilton-Buchanan (Teleostei, Cyprinidae) - Part 3: Flow-through method Numro de rfrence ISO 7346-3:1996(F) ISO 7346-3: 1996(F) Avant-propos LISO (Organisation internationale de normalisation) est une fdration mondiale dorgani
3、smes nationaux de normalisation (comits membres de IISO). Llaboration des Normes internationales est en gnral confie aux comits techniques de KO. Chaque comit membre intress par une tude a le droit de faire partie du comit technique cr cet effet. Les organisations internationales, gouvernementales e
4、t non gouvernemen- tales, en liaison avec IISO participent galement aux travaux. LISO colla- bore troitement avec la Commission lectrotechnique internationale (CEI) en ce qui concerne la normalisation lectrotechnique. Les projets de Normes internationales adopts par les comits techniques sont soumis
5、 aux comits membres pour vote. Leur publication comme Normes internationales requiert lapprobation de 75 % au moins des co- mits membres votants. La Norme internationale ISO 7346-3 a t labore par le comit techni- que lSO/TC 147, Qualit de leau, sous-comit SC 5, Mthodes biologi- ques. Cette deuxime d
6、ition annule et remplace la premire dition (ISO 7346-3:1984), dont elle constitue une rvision technique. LISO 7346 comprend les parties suivantes, prsentes sous le titre g- nral Qualit de leau - Dtermination de la toxicit aigu ltale de substances vis-vis dun poisson deau douce Brachydanio rerio Hami
7、lton-Buchanan (Tlostei, Cyprinidae): - Partie 1: Mthode statique - Partie 2: Mthode semi-sta tique - Partie 3: Mthode avec renouvellement continu Les annexes A, B et C de la prsente partie de IISO 7346 sont donnes uniquement titre dinformation. 0 ISO 1996 Droits de reproduction rservs. Sauf prescrip
8、tion diffrente, aucune partie de cette publi- cation ne peut tre reproduite ni utilise sous quelque forme que ce soit et par aucun pro- cd, lectronique ou mcanique, y compris la photocopie et les microfilms, sans laccord crit de lditeur. Organisation internationale de normalisation Case Postale 56 l
9、 CH-121 1 Genve 20 l Su isse Imprim en Suisse ii 0 ISO ISO 7346=3:1996(F) Introduction Les trois parties de IISO 7346 dcrivent des procdures dessai pour d- terminer la toxicit aigu ltale de substances vis-vis du poisson-zbre (Brachydanio rerio Hamilton-Buchanan), mais il faut souligner que lemploi r
10、ecommand du poisson-zbre nexclut pas lutilisation dautres espces. Les mthodologies prsentes ici peuvent aussi tre utilises pour dau- tres espces de poissons deau douce, deau de mer ou deau saumtre, avec les modifications appropries de, par exemple, la qualit de leau de dilution ou des conditions de
11、temprature de lessai. Parmi les trois parties de IISO 7346, un choix peut tre fait entre les mthodes statique, semi-statique et avec renouvellement continu. Lessai statique dcrit dans IISO 7346-1, dans lequel la solution nest pas renou- vele, a lavantage de ne ncessiter quun appareillage simple, bie
12、n que la substance puisse spuiser dans le rcipient dessais au cours de lessai et la qualit globale de leau se dtriorer. La mthode avec renou- vellement continu, dcrite dans la prsente partie de IISO 7346, dans la- quelle la solution dessai est renouvele de faon continue, vite de tels problmes, mais
13、ncessite lemploi dun appareillage plus complexe. Dans la mthode semi-statique, dcrite dans IISO 7346-2, les solutions dessai sont renouveles toutes les 24 h ou 48 h, offrant ainsi un compromis en- tre les deux. La mthode avec renouvellement continu peut tre utilise pour la plupart des types de subst
14、ances, y compris celles qui sont instables dans leau, mais les concentrations de la substance exprimenter sont dtermines chaque fois que cest possible. La. mthode statique est limite ltude des substances dont les concentrations exprimentales restent rela- tivement constantes pendant la dure de lessa
15、i. La mthode semi- statique peut tre utilise pour exprimenter des substances dont les concentrations peuvent tre maintenues constantes, de faon satisfai- sante, tout au long de lessai par le renouvellement des solutions toutes les 24 h ou 48 h. Des adaptations peuvent tre ncessaires pour les substan
16、ces hautement volatiles. Pour faciliter la prparation et le maintien de concentrations de substances qui peuvent tre ltales lorsquelles sont proches de la solubilit aqueuse, il est possible dutiliser un faible volume de solvant, comme prescrit dans les mthodes. Page blanche NORME INTERNATIONALE 0 IS
17、O ISO 7346-3: 1996(F) Qualit de leau - Dtermination de la toxicit aigu ltale de substances vis-vis dun poisson deau douce Brachydanio rerio Hamilton-Buchanan (Tlostei, Cyprinidae) - Partie 3: Mthode avec renouvellement continu 1 Domaine dapplication La prsente partie de IISO 7346 prescrit une m- tho
18、de avec renouvellement continu pour la dtermi- nation de la toxicit aigu ltale de substances simples, stables, non volatiles, solubles dans leau dans les conditions prescrites, vis-vis dun poisson deau douce Brachydanio rerio Hamilton-Buchanan (Tlostei Cyprinidae) - nom commun, poisson-zkbre, dans u
19、ne eau de qualit donne. La mthode est applicable pour chaque substance exprimenter, pour donner une ide globale de la toxicit aigu ltale vis-vis du Brachydanio rerio, dans les conditions de lessai. Les rsultats sont en eux-mmes insuffisants pour dfinir des normes de qualit de leau en vue de la prote
20、ction de lenvironnement. La mthode est galement applicable certaines au- tres espces de poissons deau douce comme orga- nismes pour essai? La mthode peut tre adapte pour dautres poissons deaux douce, marine ou saumtre avec des modifi- cations appropries des conditions dessai, concer- nant notamment
21、la quantit et la qualit de leau de dilution et la temprature. 2 Principe Dtermination, dans des conditions dfinies, des concentrations auxquelles une substance est ltale pour 50 % dune population dessai de Brachydanio rerio, aprs des priodes dexposition cette subs- tance de 24 h, 48 h, 72 h et 96 h
22、dans leau ambiante. Ces concentrations moyennes ltales sont dsi- gnes par CL50 - 24 h, CL50 - 48 h, CL50 - 72 h et CL50 - 96 h. 1) Les espces suivantes de poissons deau douce peuvent tre utilises, en sus de Brachydanio rerio, sans modification de la prsente partie de IISO 7346: - Lepomis macrochirus
23、 (Tlostei, Centrarchidae) - Oryzias latipes (Tlostei, Poeciliidae) - Pimephales promelas (Tlostei, Cyprinidae) - Poecilia reticulata (Tlostei, Poeciliidae) 1 ISO 7346-3: 1996(F) Lessai est ralis en deux tapes: a) un essai prliminaire qui donne une indication ap- proximative des concentrations moyenn
24、es aigus ltales et qui sert dterminer la gamme des concentrations pour lessai dfinitif; W un essai dfinitif dont seuls les rsultats sont re- ports. Sil est manifeste que les concentrations restent rela- tivement constantes (par exemple scartant au plus de 20 % de la valeur nominale) pendant lessai,
25、les concentrations nominales ou mesures sont utilises pour lestimation de la CL50. Si des analyses mon- trent que les concentrations relles restent rela- tivement constantes, mais infrieures 80 % ou suprieures 120 % des valeurs nominales, les va- leurs analytiques sont utilises pour lestimation de l
26、a CL50. Sil nest pas manifeste que les concentrations dessai restent un niveau acceptable pendant la du- re de lessai ou sil est connu (ou suspect) que les concentrations de la substance dessai ont dcru si- gnificativement un certain stade de lessai, alors, sans tenir compte des donnes analytiques d
27、isponi- bles ou non, la CL50 ne peut tre dtermine en uti- lisant la prsente mthode dessai. Dans ce cas, lessai nest pas ncessairement invalid, mais il peut seulement tre tabli que la CL50 de la substance est x mg/l, la valeur, X, tant estime partir des concentrations nominales utilises. 3 Organismes
28、 pour essai et ractifs Les ractifs chimiques doivent tre de qualit analyti- que reconnue. Leau utilise pour la prparation des solutions de ractif doit tre distille dans un appareil en verre ou dionise dune puret au moins quiva- lente. 31 . Organismes pour essai Lespce utilise pour lessai doit tre le
29、 Brachydanio rerio Hamilton-Buchanan (Tlostei, Cyprinidae), ap- pele communment (poisson-zbre). Chaque pois- son pour essai doit avoir une longueur totale de 30 mm + 5 mm ce qui, en principe, correspond une - masse de 0,3 g + 0,l g. Ils doivent tre slectionns partir dune population mre unique. II co
30、nvient que cette population mre ait t acclimate et, dans tous les cas, maintenue au moins 7 jours avant lessai dans leau de dilution, are de manire continue par barbotage dair (voir 3.2) dans des conditions de qualit de leau et dclairement semblables celles utilises pour lessai. Ils doivent tre nour
31、ris nor- malement jusquaux 24 h prcdant immdiatement lessai. 0 Les poissons pour essai doivent tre exempts de maladies ou de malformations visibles. Ils ne dei ent subir aucun traitement pendant lessai ou pendant les 2 semaines prcdant lessai. lissue de lessai, il convient dliminer de faon convenabl
32、e les poissons restant en vie. SO a Les conditions denvironnement pour la maintenance et llevage du poisson-zbre sont donnes dans lannexe A. 3.2 Eau de dilution normalise Leau de dilution normalise frachement prpare doit avoir un pH de 7,8 + 0,2, une duret calcique denviron 250 mg/l, exprime en carb
33、onate de cal- cium, et doit contenir les concentrations suivantes de sels dissous dans leau distille ou dionise: 294,0 mg/1 CaC1,2 123,3 mg/1 MgSO, 63,0 mg/1 NaHCO, 5,5 mg/1 KCI -iO 2 7ti,O Arer leau de dilution jusqu ce que la concentration en oxygne dissous atteigne au moins 90 % de la valeur de s
34、aturation dans lair et jusqu stabilisation du pH 7,8 + 0,2. Si ncessaire, ajuster le pH de la - solution en ajoutant une solution dhydroxyde de so- dium ou de lacide chlorhydrique. Leau de dilution ainsi prpare ne doit recevoir aucune aration sup- plmentaire avant emploi dans les essais. 3.3 Solutio
35、ns mres des substances exprimenter Il convient de prparer une solution mre de la subs- tance exprimenter par dissolution dune quantit connue de la substance dans un volume dfini deau de dilution, deau dionise ou deau distille dans un appareil en verre. II convient de prparer la solution mre une frqu
36、ence approprie la stabilit de la substance exprimenter. Afin de permettre la pr- paration des solutions mres et daider leur transfert dans les rcipients dessais, les substances de faible solubilit aqueuse peuvent tre solubiiises ou dis- perses par des moyens adquats, tels que des dis- positifs ultra
37、sons et des solvants organiques de faible toxicit vis-vis du poisson. Lorsquun solvant organique est employ, sa concentration dans la so- ution dessai ne doit pas excder 0,l ml/l ou un vo- urne contenant 0,l g/l (prendre en compte la valeur a plus leve). Lorsquun solvant est utilis, deux jeux 0 ISO
38、ISO 7346-3: 1996(F) dessais tmoins, lun contenant le solvant la concentration maximale utilise dans les rcipients dessais et lautre sans solvant ni substance expri- menter, doivent tre inclus. 3.4 Solutions dessai Les solutions dessai sont prpares par ajout des quantits appropries de la solution mre
39、 de la subs- tance exprimenter leau de dilution pour obtenir les concentrations ncessaires. II est recommand, lorsquune solution mre est prpare dans de leau dionise ou de leau distille, de ne pas ajouter plus de 100 ml de la solution mre pour 10 litres deau de dilution. 4 Appareillage Tout matriau q
40、ui est susceptible dentrer en contact avec tout liquide dans lequel les poissons sont placs ou avec lequel ils sont mis en contact doit tre inerte et ne doit pas adsorber significativement la substance exprimenter. Matriel courant de laboratoire et ce qui suit. 4.1 Rcipients dessais, qui peuvent tre
41、 de diff- rentes formes, adapts aux proprits de la subs- tance exprimenter et tels que les critres de vali- dit soient satisfaits spcialement 7.1 b). Pour les substances volatiles, un systme ferm peut tre n- cessaire. Lorsque des produits chimiques non volatils sont expriments, les rcipients peuvent
42、 tre ou- verts leur extrmit suprieure. II convient que la capacit des rcipients dessais soit suffisante afin de ne pas dpasser, aucun moment de lessai, un rap- port massique de 1,5 g de poisson par litre deau. Avant emploi, les rcipients dessais doivent tre soi- gneusement nettoys, par exemple laide
43、 dun d- tergent non ionique (suivi par des lavages laide dacide et de solvant pour les substances suscepti- bles de sadsorber dans le rcipient dessais). 4.2 Dispositif de contrle de la temprature, pour rguler la temprature des solutions dessai et de leau dans les rcipients de stockage, 23 “C + 1 “C
44、- laide dune mthode approprie. 4.3 Dispositif de renouvellement des solutions, appareillage doseur et mlangeur capable de mainte- nir les concentrations ncessaires de la substance exprimenter dans les rcipients dessais & 20 % et install de faon suffisamment renouveler les solutions dessai des rcipie
45、nts pour prvenir une chute de la concentration en oxygne dissous au- dessous de 60 % de la valeur de saturation dans lair. 4.4 Filet, en nylon ou en un autre matriau chimi- quement inerte, pour les rcipients de contrle et un autre pour tous les rcipients dessais (4.1). 5 Environnement de lessai La p
46、rparation et la conservation des solutions, la conservation des poissons et lensemble des mani- pulations et des essais doivent tre raliss dans des locaux dont latmosphre est exempte de contami- nants de lair des concentrations nocives. viter soigneusement toute perturbation indsirable susceptible d
47、e modifier le comportement des pois- sons. Raliser les essais sous un clairement normal de laboratoire dune photopriode quotidienne de 12 h 16 h. 6 Mode opratoire 6.1 tat des poissons En cas de changement de la population mre, effec- tuer un essai de toxicit selon la mthode dfinie dans la prsente partie de IISO 7346 en utilisant un produit chimique de rfrence appropri par exemple le dichromate de potassium (K,Cr,O,). Les rsultats de tels essais doivent tre en accord raisonnable
