1、NORME INTERNATIONALE ISO 7346-l Deuxime dition 1996-06-15 Qualit de leau - Dtermination de la toxicit aigu ltale de substances vis-vis dun poisson deau douce Brachydanio rerio Hamilton-Buchanan (Tlostei, Cyprinidae) - Partie 1: Mthode statique Water quality - Determination of the acute lethal toxici
2、ty of substances to a freshwater fish Brachydanio rerio Hamilton-Buchanan (Teleostei, Cyprinidae) - Part 1: Static method Numro de rfrence ISO 7346-1:1996(F) ISO 7346-I : 1996(F) Avant-propos LISO (Organisation internationale de normalisation) est une fdration mondiale dorganismes nationaux de norma
3、lisation (comits membres de IISO). Llaboration des Normes internationales est en gnral confie aux comits techniques de IISO. Chaque comit membre intress par une tude a le droit de faire partie du comit technique cr cet effet. Les organisations internationales, gouvernementales et non gouvernemen- ta
4、les, en liaison avec IISO participent galement aux travaux. LISO colla- bore troitement avec la Commission lectrotechnique internationale (CEI) en ce qui concerne la normalisation lectrotechnique. Les projets de Normes internationales adopts par les comits techniques sont soumis aux comits membres p
5、our vote. Leur publication comme Normes internationales requiert lapprobation de 75 % au moins des co- mits membres votants. La Norme internationale ISO 7346-l a t labore par le comit techni- que lSO/TC 147, Qualit de leau, sous-comit SC 5, Mthodes biologi- ques. Cette deuxime dition annule et rempl
6、ace la premire dition (ISO 7346-l :1984), dont elle constitue une rvision technique. LISO 7346 comprend les parties suivantes, prsentes sous le titre g- nral Qualit de leau - Dtermination de la toxicit aigu l tale de substances vis-vis dun poisson deau douce Brachydanio rerio Hamilton-Buchanan (Tlos
7、tei, Cyprinidaefl: - Partie 1: Mthode statique - Partie 2: Mthode semi-sta tique - Partie 3: Mthode avec renouvellement continu Les annexes A, B et C de la prsente partie de IISO 7346 sont donnes uniquement titre dinformation. 0 60 1996 Droits de reproduction rservs. Sauf prescription diffrente, auc
8、une partie de cette publi- cation ne peut tre reproduite ni utilise sous quelque forme que ce soit et par aucun pro- cd, lectronique ou mcanique, y compris la photocopie et les microfilms, sans laccord crit de lditeur. Organisation internationale de normalisation Case Postale 56 l CH-l 211 Genve 20
9、l Suisse Imprim en Suisse ii 0 ISO ISO 7346-1: 1996(F) Introduction Les trois parties de IISO 7346 dcrivent des procdures dessai pour d- terminer la toxicit aigu ltale de substances vis-vis du poisson-zbre (Brachydanio rerio Hamilton-Buchanan), mais il faut souligner que lemploi recommand du poisson
10、-zbre nexclut pas lutilisation dautres espces. Les mthodologies prsentes ici peuvent aussi tre utilises pour dau- tres espces de poissons deau douce, deau de mer ou deau saumtre, avec les modifications appropries de, par exemple, la qualit de leau de dilution ou des conditions de temprature de lessa
11、i. Parmi les trois parties de IISO 7346, un choix peut tre fait entre les mthodes statique, semi-statique et avec renouvellement continu. Lessai statique dcrit dans la prsente partie de IISO 7346, dans lequel la solu- tion nest pas renouvele, a lavantage de ne ncessiter quun appareillage simple, bie
12、n que la substance puisse spuiser dans le rcipient dessais au cours de lessai et la qualit globale de leau se dtriorer. La mthode avec renouvellement continu, dcrite dans IISO 7346-3, dans laquelle la solution dessai est renouvele de faon continue, vite de tels probl- mes, mais ncessite lemploi dun
13、appareillage plus complexe. Dans la mthode semi-statique, dcrite dans IISO 7346-2, les solutions dessai sont renouveles toutes les 24 h ou 48 h, offrant ainsi un compromis en- tre les deux. La mthode avec renouvellement continu peut tre utilise pour la plupart des types de substances, y compris cell
14、es qui sont instables dans leau, mais les concentrations de la substance exprimenter sont dtermines chaque fois que cest possible. La mthode statique est limite ltude des substances dont les concentrations exprimentales restent rela- tivement constantes pendant la dure de lessai. La mthode semi- sta
15、tique peut tre utilise pour exprimenter des substances dont les concentrations peuvent tre maintenues constantes, de faon satisfai- sante, tout au long de lessai par le renouvellement des solutions toutes les 24 h ou 48 h. Des adaptations peuvent tre ncessaires pour les substances hautement volatile
16、s. Pour faciliter la prparation et le maintien de concentrations de substances qui peuvent tre ltales lorsquelles sont proches de la solubilit aqueuse, il est possible dutiliser un faible volume de solvant, comme prescrit dans les mthodes. Page blanche NORME INTERNATIONALE 0 ISO ISO 7346-l :1996(F)
17、Qualit de leau - Dtermination de la toxicit aigu ltale de substances vis-vis dun poisson deau douce Brachydanio rerio Hamilton-Buchanan (Tlostei, Cyprinidae) - Partie 1: Mthode statique 1 Domaine dapplication La prsente partie de IISO 7346 prescrit une m- thode statique pour la dtermination de la to
18、xicit ai- gu ltale de substances simples, stables, non volatiles, solubles dans leau dans les conditions prescrites, vis-vis dun poisson deau douce Brachydanio rerio Hamilton-Buchanan (Tlostei, Cyprinidae) - nom commun, poisson-zbre, dans une eau de qualit donne. La mthode est applicable pour chaque
19、 substance exprimenter, pour donner une ide globale de la toxicit aigu ltale vis-vis du Brachydanio rerio, dans les conditions de lessai. Les rsultats sont en eux-mmes insuffisants pour dfinir des normes de qualit de leau en vue de la protection de lenvironnement. La mthode est galement applicable c
20、ertaines au- tres espces de poissons deau douce comme orga- nismes pour essais? La mthode peut tre adapte pour dautres poissons deaux douce, marine ou saumtre avec des modifi- cations appropries des conditions dessai, concer- nant notamment la quantit et la qualit de leau de dilution et la tempratur
21、e. 2 Principe Dtermination, dans des conditions dfinies, des concentrations auxquelles une substance est ltale pour 50 % dune population dessai de Brachydanio rerio, aprs des priodes dexposition cette subs- tance de 24 h, 48h, 72 h et 96 h dans leau ambiante. Ces concentrations moyennes ltales sont
22、dsignes par CL50 - 24 h, CL50 - 48 h, CL50 - 72 h et CL50 - 96 h. 1) Les espces suivantes de poissons deau douce peuvent tre utilises, en sus de Brachydanio rerio, sans modification de la prsente partie de NS0 7346: - Lepomis macrochirus (Tlostei, Centrarchidae) - Oryzias latipes (Tlostei, Poeciliid
23、ae) - Pimephales promelas (Tlostei, Cyprinidae) - Poecilia reticulata (Tlostei, Poeciliidae) 1 ISO 7346-1: 1996(F) Lessai est ralis en deux tapes: a) un essai prliminaire qui donne une indication ap- proximative des concentrations moyennes aigus ltales et qui sert dterminer la gamme des concentratio
24、ns pour lessai dfinitif; b) un essai dfinitif dont seuls les rsultats sont re- ports. Sil est manifeste que les concentrations restent rela- tivement constantes (par exemple scartant au plus de 20 % de la valeur nominale) pendant lessai, les concentrations nominales ou mesures sont utilises pour les
25、timation de la CL50. Si des analyses mon- trent que les concentrations relles restent rela- tivement constantes, mais infrieures 80 % ou suprieures 120 % des valeurs nominales, les va- leurs analytiques sont utilises pour lestimation de la CL50. Sil nest pas manifeste que les concentrations dessai r
26、estent un niveau acceptable pendant la du- re de lessai ou sil est connu (ou suspect) que les concentrations de la substance dessai ont dcru si- gnificativement un certain stade de lessai, alors, sans tenir compte des donnes analytiques disponi- bles ou non, la CL50 ne peut tre dtermine en uti- lisa
27、nt la prsente mthode dessai. Dans ce cas, lessai nest pas ncessairement invalid, mais il peut seulement tre tabli que la CL50 de la substance est x mg/l, la valeur, X, tant estime partir des concentrations nominales utilises. 3 Organismes pour essai et ractifs Les ractifs chimiques doivent tre de qu
28、alit analyti- que reconnue. Leau utilise pour la prparation des solutions de ractif doit tre distille dans un appareil en verre ou dionise dune puret au moins quiva- 31 . Organismes pour essai Lespce utilise pour lessai doit tre le Brachydanio rerio Hamilton-Buchanan (Tlostei, Cyprinidae), ap- pele
29、communment (poisson-zbre). Chaque pois- son pour essai doit avoir une longueur totale de 30 mm + 5 mm ce qui, en principe, correspond une - masse de 0,3 g + 0,l g. Ils doivent tre slectionns partir dune population mre unique. II convient que cette population mre ait t acclimate et, dans tous les cas
30、, maintenue au moins 7 jours avant lessai dans leau de dilution, are de manire continue par barbotage dair (voir 3.2), dans des conditions de qualit de leau et dclairement semblables celles utilises pour lessai. Ils doivent tre nourris nor- malement jusquaux 24 h prcdant immdiatement lessai. Les poi
31、ssons pour essai doivent tre exempts de maladies ou de malformations visibles. Ils ne doivent subir aucun traitement pendant lessai ou pendant les 2 semaines prcdant lessai. lissue de lessai, il convient dliminer de faon convenable les poissons restant en vie. Les conditions denvironnement pour la m
32、aintenance et llevage du poisson-zbre sont donnes dans lannexe A. 3.2 Eau de dilution norma I Leau de dilution normalise frachement prpare doit avoir un pH de 7,8 + 0,2, une duret calcique denviron 250 mg/l, exprime en carbonate de cal- cium, et doit contenir les concentrations suivantes de sels dis
33、sous dans leau distille ou dionise: 2940 mg/1 CaCl,2H,O 123,3 mg/1 MgSOJH,O 3,0 mg/1 NaHCO, 5,5 mg/1 KCI Arer leau de dilution jusqu ce que la concentration en oxygne dissous atteigne au moins 90 % de la valeur de saturation dans lair et jusqu stabilisation du pH 7,8 + 0,2. Si ncessaire, ajuster le
34、pH de la - solution en ajoutant une solution dhydroxyde de so- dium ou de lacide chlorhydrique. Leau de dilution ainsi prpare ne doit recevoir aucune aration sup- plmentaire avant emploi dans les essais. 3.3 Solutions mres des substances exprimenter II convient de prparer une solution mre de la subs
35、- tance exprimenter par dissolution dune quantit connue de la substance dans un volume dfini deau de dilution, deau dionise ou deau distille dans un appareil en verre. Afin de permettre la prparation des solutions mres et daider leur transfert dans les rcipients dessais, les substances de faible sol
36、ubilit aqueuse peuvent tre solubilises ou disperses par des moyens adquats, tels que des dispositifs ul- trasons et des solvants organiques de faible toxicit vis-vis du poisson. Lorsquun solvant organique est employ, sa concentration dans la solution dessai ne doit pas excder 0,l ml/l ou un volume c
37、ontenant 0,l g/l (prendre en compte la valeur la plus leve). Lorsquun solvant est utilis, deux jeux dessais t- moins, lun contenant le solvant la concentration maximale utilise dans les rcipients dessais et Iau- 2 0 ISO ISO 73461:1996( F) tre sans so tre inclus. Ivant ni substance exprimen ter, doiv
38、ent 3.4 Solutions dessai Les solutions dessai sont prpares par ajout des quantits appropries de la solution mre de la subs- tance exprimenter leau de dilution pour obtenir les concentrations ncessaires. II est recommand, lorsquune solution mre est prpare dans de leau dionise ou de leau distille, de
39、ne pas ajouter plus de 100 ml de la solution mre pour 10 litres deau de dilution. 4 Appareillage Tout matriau qui est susceptible dentrer en contact avec tout liquide dans lequel les poissons sont placs ou avec lequel ils sont mis en contact doit tre inerte et ne doit pas adsorber significativement
40、la substance exprimenter. Matriel courant de laboratoire et ce qui suit. 4.1 Rcipients dessais, de capacit suffisante (une capacit suprieure 10 litres peut tre ncessaire), avec une grande aire dinterface entre lair et le milieu dessai (denviron 800 cm* pour 10 litres de milieu) et quips dun couvercl
41、e srement fix. II convient que la capacit des rcipients dessais soit suffisante afin de ne pas dpasser, aucun moment de lessai, un rapport massique de 1 g de poisson par litre deau. Avant emploi, les rcipients dessais doivent tre soi- gneusement nettoys, par exemple laide dun d- tergent non ionique
42、(suivi par des lavages laide dacide et de solvant pour les substances suscepti- bles de sadsorber dans le rcipient dessais). 4.2 Dispositif de contrle de la temprature, pour rguler la temprature des solutions dessai et de leau dans les rcipients de stockage, 23 “C & 1 “C laide dune mthode approprie.
43、 4.3 Filet, en nylon ou en un autre matriau chimi- quement inerte, pour les rcipients de contrle et un autre pour tous les rcipients dessais (4.1). 5 Environnement de lessai La prparation et la conservation des solutions, la conservation des poissons et lensemble des mani- pulations et des essais do
44、ivent tre raliss dans des locaux dont latmosphre est exempte de contami- nants de lair des concentrations nocives. viter soigneusement toute perturbation indsirable susceptible de modifier le comportement des pois- sons. Raliser les essais sous un clairement normal de laboratoire dune photopriode qu
45、otidienne de 12 h 16 h. 6 Mode opratoire 6.1 tat des poissons En cas de changement de la population mre, effec- tuer un essai de toxicit selon la mthode dfinie dans la prsente partie de IISO 7346 en utilisant un produit chimique de rfrence appropri par exemple le dichromate de potassium (K,Cr,O,). L
46、es rsultats de tels essais doivent tre en accord raisonnable avec les rsultats obtenus prcdemment par le mme la- boratoire. Les poissons utiliss dans soumis 1 des essais essai ne d oivent pas avoir t antrieurs Maintenir la temprature de leau dans les rcipients de stockage 23 “C + 1 “C (4.2). 6.2 Ess
47、ai de limite En utilisant les modes opratoires dcrits dans la prsente partie de IISO 7346, un essai de limite peut tre ralis la limite de solubilit aqueuse dans les conditions de lessai ou 100 mg/1 (prendre en compte la valeur la plus faible), afin de dmontrer que la CL50 - 96 h est plus leve que cette concen- tration. Si aucun poisson ne meurt lors de lessai de limite, aucun essai supplmentaire nest requis. Raliser lessai de limite un nombre identique dans partir de 10 poiss ons,
