1、Numro de rfrence ISO 5565-2:1999(F) ISO 1999 NORME INTERNATIONALE ISO 5565-2 Premire dition 1999-12-15 Vanille Vanilla fragrans (Salisbury) Ames Partie 2: Mthodes dessai Vanilla Vanilla fragrans (Salisbury) Ames Part 2: Test methodsISO 5565-2:1999(F) PDF Exonration de responsabilit Le prsent fichier
2、 PDF peut contenir des polices de caractres intgres. Conformment aux conditions de licence dAdobe, ce fichier peut tre imprim ou visualis, mais ne doit pas tre modifi moins que lordinateur employ cet effet ne bnficie dune licence autorisant lutilisation de ces polices et que celles-ci y soient insta
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7、ghtiso.ch Web www.iso.ch I mpri menSuis se ii ISO 1999 Tous droits rservsISO 5565-2:1999(F) ISO 1999 Tous droits rservs iii Avant-propos LISO (Organisation internationale de normalisation) est une fdration mondiale dorganismes nationaux de normalisation (comits membres de lISO). Llaboration des Norm
8、es internationales est en gnral confie aux comits techniques de lISO. Chaque comit membre intress par une tude a le droit de faire partie du comit technique cr cet effet. Les organisations internationales, gouvernementales et non gouvernementales, en liaison avec lISO participent galement aux travau
9、x. LISO collabore troitement avec la Commission lectrotechnique internationale (CEI) en ce qui concerne la normalisation lectrotechnique. Les Normes internationales sont rdiges conformment aux rgles donnes dans les Directives ISO/CEI, Partie 3. Les projets de Normes internationales adopts par les co
10、mits techniques sont soumis aux comits membres pour vote. Leur publication comme Normes internationales requiert lapprobation de 75 % au moins des comits membres votants. Lattention est appele sur le fait que certains des lments de la prsente partie de lISO 5565 peuvent faire lobjet de droits de pro
11、prit intellectuelle ou de droits analogues. LISO ne saurait tre tenue pour responsable de ne pas avoir identifi de tels droits de proprit et averti de leur existence. La Norme internationale ISO 5565-2 a t labore par le comit technique ISO/TC 34, Produits agricoles alimentaires, sous-comit SC 7, pic
12、es. Cette premire dition de lISO 5565-2, en association avec lISO 5565-1, annule et remplace lISO 5565:1982, laquelle a fait lobjet dune rvision technique. LISO 5565 comprend les parties suivantes, prsentes sous le titre gnral Vanille Vanilla fragrans (Salisbury) Ames: Partie 1: Spcifications Partie
13、 2: Mthodes dessaiNORME INTERNATIONALE ISO 5565-2:1999(F) ISO 1999 Tous droits rservs 1 Vanille Vanilla fragrans (Salisbury) Ames Partie 2: Mthodes dessai 1 Domaine dapplication La prsente partie de lISO 5565 spcifie des mthodes dessai pour lanalyse de la vanille appartenant aux espces Vanilla fragr
14、ans (Salibury) Ames syn. Vanilla planifolia Andrews. Elle est applicable la vanille en gousses, la vanille en vrac, la vanille coupe et la vanille en poudre. Elle nest pas applicable aux extraits de vanille. Trois mthodes dessai spcifiques lanalyse de la vanille sont dcrites dans la prsente partie d
15、e lISO 5565: a) la dtermination de la teneur en eau de la vanille en gousses et en poudre (4.1); b) le dosage de la vanilline, de lacide vanillique, de laldhyde 4-hydroxybenzoque et de lacide 4-hydroxy- benzoque par chromatographie liquide haute performance (4.2); c) la dtermination de la teneur en
16、vanilline par spectromtrie dans lultraviolet (4.3). NOTE Les spcifications de la vanille font lobjet de lISO 5565-1. 2 Rfrence normative Le document normatif suivant contient des dispositions qui, par suite de la rfrence qui y est faite, constituent des dispositions valables pour la prsente partie d
17、e lISO 5565. Pour les rfrences dates, les amendements ultrieurs ou les rvisions de ces publications ne sappliquent pas. Toutefois, les parties prenantes aux accords fonds sur la prsente partie de lISO 5565 sont invites rechercher la possibilit dappliquer ldition la plus rcente du document normatif i
18、ndiqu ci-aprs. Pour les rfrences non dates, la dernire dition du document normatif en rfrence sapplique. Les membres de lISO et de la CEI possdent le registre des Normes internationales en vigueur. ISO 1042, Verrerie de laboratoire Fioles jauges un trait. 3 Termes et dfinitions Pour les besoins de l
19、a prsente partie de lISO 5565, le terme et la dfinition suivants sappliquent. 3.1 teneur en eau quantit deau entrane et recueillie selon la mthode spcifie dans la prsente partie de lISO 5565 NOTE La teneur en eau est exprime comme fraction massique, en pourcentage dans le pass galement exprime en %(
20、 m/m).ISO 5565-2:1999(F) 2 ISO 1999 Tous droits rservs 4 Mthodes dessai 4.1 Dtermination de la teneur en eau de la vanille en gousses et en poudre NOTE La mthode gnrale dcrite dans lISO 939 nest pas applicable la vanille. 4.1.1 Principe Dtermination de la quantit deau entrane par distillation azotro
21、pique, en utilisant un liquide organique non miscible leau. Cette eau est recueillie dans un tube gradu. 4.1.2 Ractif Sauf indication diffrente, utiliser uniquement des ractifs de qualit analytique reconnue et de leau distille ou dminralise, ou de leau de puret au moins gale. 4.1.2.1 Tolune. Saturer
22、 le tolune en lagitant avec une petite quantit deau et distiller. Utiliser le distillat pour la dtermination de la teneur en eau. 4.1.3 Appareillage Matriel courant de laboratoire et, en particulier, ce qui suit. 4.1.3.1 Appareil de distillation, consistant en un ballon en verre, chauff par un moyen
23、 appropri, et pourvu dun rfrigrant reflux se dversant dans un tube rcepteur et reli au ballon. Les connexions entre le rcepteur, le rfrigrant et le ballon doivent tre des joints en verre rod interchangeables. Le tube sert recueillir et mesurer leau condense et renvoyer le solvant dans le ballon. Le
24、montage de lappareil est reprsent la Figure 1, et ses diffrentes parties sont dcrites ci-aprs. 4.1.3.1.1 Ballon, de 500 ml de capacit, ayant la forme reprsente la Figure 1, en verre rsistant la chaleur, bien recuit et aussi exempt que possible de stries et dautres dfauts similaires. 4.1.3.1.2 Rfrigr
25、ant reflux, en verre, refroidi par leau, avec un manchon denviron 400 mm de longueur et un tube intrieur de 9,5 mm 12,5 mm de diamtre extrieur. Lextrmit du rfrigrant qui doit tre introduite dans le tube rcepteur peut tre biseaute suivant un angle de 30 par rapport laxe vertical du rfrigrant. Lorsque
26、 celui-ci est introduit dans le tube rcepteur, lextrmit du rfrigrant doit se trouver entre 6 mm et 7 mm au-dessus de la surface du liquide dans le tube rcepteur, aprs que les conditions de la distillation ont t tablies. 4.1.3.1.3 Tube rcepteur, de 5 ml de capacit, en verre rsistant la chaleur, bien
27、recuit et aussi exempt que possible de stries et dautres dfauts similaires, muni de joints rods et ayant la forme, les dimensions et les tolrances indiques la Figure 1. Il comprend essentiellement la chambre suprieure, avec un tube et un joint rod conduisant au ballon, ainsi que le tube gradu. La pa
28、rtie gradue doit avoir une capacit de 5 ml jusquau trait de graduation le plus lev. La graduation doit stendre de 0 ml 5 ml par intervalles de 0,10 ml. Les traits de graduation correspondant chaque millilitre doivent tre numrots et faire le tour complet du tube. Les traits de graduation situs mi-int
29、ervalle entre les traits numrots doivent stendre sur les trois-quarts de la circonfrence du tube, et les autres traits doivent stendre sur la moiti de cette circonfrence. Lerreur sur la capacit indique ne doit pas dpasser 0,05 ml.ISO 5565-2:1999(F) ISO 1999 Tous droits rservs 3 Dimensions en millimt
30、res Lgende 1 Rfrigrant reflux (4.1.3.1.2) 2 Tube rcepteur (4.1.3.1.3) 3 Tube de capacit 5 ml, gradu par intervalles de 0,10 ml 4 Ballon (4.1.3.1.1) Figure 1 Appareil de distillationISO 5565-2:1999(F) 4 ISO 1999 Tous droits rservs 4.1.3.1.4 Source de chaleur,s o i tu nbain dhuile,s o i tune enveloppe
31、 chauffante lectrique, munis dun rhostat ou de tout autre moyen de rglage du chauffage. Il convient que la temprature de lhuile du bain ne soit pas beaucoup plus leve que le point dbullition du tolune. 4.1.3.1.5 Fil de cuivre, assez long pour pouvoir traverser le rfrigrant, et ayant une extrmit tord
32、ue en spirale. Le diamtre de la spirale doit lui permettre dentrer juste dans la partie gradue du tube et ensuite de pouvoir sy mouvoir de haut en bas. 4.1.3.2 Balance analytique, ayant une rsolution de 0,001 g. 4.1.4 Prparation de lchantillon pour essai 4.1.4.1 Vanille en gousses, vanille coupe et
33、vanille en vrac Prparer lchantillon pour essai en coupant la vanille en morceaux de 5 mm au maximum, en prenant soin de ne pas modifier la teneur en eau. 4.1.4.2 Vanille en poudre Mlanger soigneusement lchantillon pour laboratoire. 4.1.5 Mode opratoire 4.1.5.1 Prparation de lappareil Nettoyer lensem
34、ble de lappareil avec un mlange de dichromate de potassium et dacide sulfurique, afin de rduire ladhrence des gouttes deau sur les parois du rfrigrant et du tube rcepteur. Rincer soigneusement leau et scher compltement avant lemploi. 4.1.5.2 Prise dessai Peser, 0,1 g prs, environ 10 g de lchantillon
35、 pour essai (4.1.4.1 ou 4.1.4.2), de manire que la quantit deau recueillie ne dpasse pas 4,5 ml. 4.1.5.3 Dtermination Transvaser quantitativement la prise dessai (4.1.5.2) dans le ballon de distillation (4.1.3.1.1) en utilisant du tolune (4.1.2.1). Ajouter suffisamment de tolune (environ 75 ml au to
36、tal) pour recouvrir compltement la prise dessai, puis mlanger par un mouvement de rotation du ballon. Monter lappareil et remplir le rcepteur (4.1.3.1.3) avec le tolune, en le versant travers le rfrigrant reflux (4.1.3.1.2), jusqu ce quil commence se dverser dans le ballon de distillation. Insrer, s
37、i ncessaire, un tampon lche de coton en haut du rfrigrant ou y adapter un petit tube contenant du chlorure de calcium pour viter la condensation de lhumidit atmosphrique dans le tube du rfrigrant. Afin de rgulariser le reflux, envelopper le ballon et le tube conduisant au tube rcepteur avec un isola
38、nt thermique. Chauffer le ballon de faon que le dbit du distillat soit environ de 100 gouttes par minute. Lorsque la plus grande partie de leau a t entrane, augmenter la vitesse de distillation environ 200 gouttes par minute et continuer jusqu ce que lon ne recueille plus deau. Purger le rfrigrant r
39、eflux de temps en temps pendant la distillation avec des fractions de 5 ml du tolune pour faire descendre, par rinage, toute leau adhrant aux parois du rfrigrant. Leau du tube gradu peut tre spare du tolune, en passant de temps en temps une spirale de fil de cuivre de haut en bas dans le rfrigrant e
40、t le tube gradu, ce qui amne leau se rassembler au fond du tube. Distiller ISO 5565-2:1999(F) ISO 1999 Tous droits rservs 5 reflux jusqu ce que le niveau de leau reste constant dans le tube durant 30 min, puis arrter le chauffage. Laver le rfrigrant avec du tolune en utilisant la spirale de fil de c
41、uivre pour enlever toute gouttelette deau adhrente, si ncessaire. Immerger le tube dans leau la temprature ambiante durant au moins 15 min ou jusqu ce que la couche de tolune soit limpide; ensuite, lire le volume deau. 4.1.6 Expression des rsultats La teneur en eau, w, exprime en pourcentage en mass
42、e, est gale : m V w 100 o V est le volume, en millilitres, deau recueillie; m est la masse, en grammes, de la prise dessai. Il est suppos que la masse volumique de leau est exactement de 1 g/ml. 4.2 Dosage de la vanilline, de lacide vanillique, de laldhyde 4-hydroxybenzoque et de lacide 4-hydroxyben
43、zoque dans la vanille en gousses, coupe, en vrac ou en poudre, par chromatographie liquide haute performance (Mthode de rfrence) 4.2.1 Principe Extraction et/ou dilution (selon le cas), puis dosage par chromatographie liquide haute performance (CLHP), au moyen dun talon interne avec dtection par spe
44、ctrophotomtrie ultraviolette. 4.2.2 Ractifs Sauf indication diffrente, utiliser uniquement des ractifs de qualit analytique reconnue et de leau distille ou dminralise, ou de leau de puret au moins gale. 4.2.2.1 thanol 96 % (fraction volumique). 4.2.2.2 Mthanol. 4.2.2.3 Acide phosphorique dilu, c(H 3
45、 PO 4 ) = 0,01 mol/l. 4.2.2.4 Phase mobile ( titre indicatif). Mlanger 75 parties dacide phosphorique dilu (4.2.2.3) avec 25 parties de mthanol (4.2.2.2). Filtrer sur membrane (4.2.3.3). Dgazer. 4.2.2.5 talons de rfrence, ayant une puret minimale de 99 %. 4.2.2.5.1 Vanilline (4-hydroxy-3-mthoxybenza
46、ldhyde). 4.2.2.5.2 Acide vanillique (acide 4-hydroxy-3-mthoxybenzoque). 4.2.2.5.3 Aldhyde 4-hydroxybenzoque. 4.2.2.5.4 Acide 4-hydroxybenzoque.ISO 5565-2:1999(F) 6 ISO 1999 Tous droits rservs 4.2.2.6 talon interne: acide actylsalicylique, ayant une puret minimale de 99 %. 4.2.2.7 Solutions mres des
47、talons, les talons tant dissous de prfrence dans la phase mobile. 4.2.2.7.1 Solution mre de vanilline, concentration 1 g/l, pese 0,001 g prs. 4.2.2.7.2 Solution mre dacide vanillique, concentration 0,1 g/l, pese 0,001 g prs. 4.2.2.7.3 Solution mre daldhyde 4-hydroxybenzoque, concentration 0,1 g/l, pese 0,001 g prs. 4.2.2.8 Solution de travail. La solution de travail est obtenue par dilution des solutions mres (4.2.2.7), de prfrence dans la
