1、Norme internationale INTERNATIONAL ORGANIZATION FOR STANDARDIZATIONWlEYHAPOHAR OPI-AHM3ALlMR ll0 CTAHAPTM3Al&lM.ORGANISATION INTERNATIONALE DE NORMALISATION Corps gras dorigines animale et vgtale - Recherche et identification des antioxygnes - Mthode par chromatographie en couche mince Animal and ve
2、getable fats and oils - De tee tion and identification of an tioxidan ts - Thin-la yer chroma tographic method Premire dition - 1982-10-01 CDU 664.3 : 543.544 : 547.53 Rf. no : ISO 55584982 (FI Descripteurs : produit agricole, corps gras animal, corps gras vgtal, dtection, antioxygne, mthode chromat
3、ographique. 0 v) Prix bas sur 3 pages Avant-propos LISO (Organisation internationale de normalisation) est une fdration mondiale dorganismes nationaux de normalisation (comits membres de IISO). Llaboration des Normes internationales est confie aux comits techniques de IISO. Chaque comit membre intre
4、ss par une tude a le droit de faire partie du comit technique correspondant. Les organisations internationales, gouvernementales et non gouverne- mentales, en liaison avec IISO, participent galement aux travaux. Les projets de Normes internationales adopts par les comits techniques sont soumis aux c
5、omits membres pour approbation, avant leur acceptation comme Normes inter- nationales par le Conseil de IISO. La Norme internationale ISO 5558 a t labore par le comit technique ISO/TC 34, Produits agricoles alimentaires, et a t soumise aux comits membres en mars 1981. Les comits membres des pays sui
6、vants lont approuve : Afrique du Sud, Rp. d Allemagne, R.F. Australie Autriche Brsil Canada Core, Rp. de Egypte, Rp. arabe d Espagne thiopie France Hongrie Inde Iraq Isral Italie Mexique Nouvelle-Zlande Pays-Bas Philippines Aucun comit membre ne la dsapprouve. Cette Norme internationale a galemen ch
7、imie pure et applique (U ICPA). t t a pprouve par lUnion internationale de Portugal Rpublique dominicaine Roumanie Royaume-Uni Sri Lanka Tchcoslovaquie Tanzanie Thalande URSS Yougoslavie 0 Organisation internationale de normalisation, 1982 Imprim en Suisse NORME INTERNATIONALE ISO 55584982 (F) Corps
8、 gras dorigines animale et vgtale - Recherche et identification des antioxygnes - Mthode par chromatographie en couche mince 1 Objet et domaine dapplication La prsente Norme internationale spcifie une mthode de recherche et didentification, par chromatographie en couche mince, des antioxygnes suivan
9、ts dans les corps gras dorigines animale et vgtale : - acide nordihydroguairtique (NDGA) - gallate de propyle (GP) - gallate doctyle (GO) - gallate de dodcyle (GD) - tertiobutylhydroquinone (TBHQ) - butylhydroxyanisol (tert-butyl-mthoxy-4 phnol) (BHA) - a-tocophrol - butylhydroxytolune (di-tert-buty
10、l-2,6 mthyl-4 phnol) (BHT) Ces antioxygnes sont cits dans lordre de leur valeur Rf. La recherche de la-tocophrol est parfois difficile, cet anti- oxygne donnant une tache daspect gnralement diffus. La limite de dtection de la mthode se situe vers 20 mg/kg (ppm) pour le BHT et 10 mg/kg (ppm) pour les
11、 autres anti- oxygnes. II est noter que le BHT nest pas compltement isole par cette mthode. 2 Principe Mise en solution dune prise dessai dans le n-hexane et extrac- tion des antioxygnes par Iactonitrile. Identification de ces antioxygnes par chromatographie en cou- che mince. 3 Ractifs Tous les rac
12、tifs doivent tre de qualit analytique reconnue. Leau utilisee doit tre de leau distille ou de leau de puret au moins quivalente. 3.1 Silice en poudre avec liant, de qualit pour chromato- graphie en couche mince, de dimension de particules infrieure 30 prn. 3.2 MethanoI, ne contenant pas plus de 0,5
13、% (mlm) deau. 3.3 thanol, 96 % (Wl4. 34 n-hexane, ou, dfaut, ther de ptrole, ayant un intervalle de distillation de 30 60 OC. 3.5 Actonitrile satur de n-hexane. Verser 900 ml dactonitrile dans une fiole de 1 000 ml, ajouter 100 ml de n-hexane (3.4) et un peu de sulfate de sodium anhy- dre ou de chlo
14、rure de calcium anhydre. Agiter, fermer le flacon avec le bouchon et laisser reposer une nuit. 36 . n-hexane satur dactonitrile. Verser 900 ml de n-hexane (3.4) dans une fiole de 1 000 ml, ajouter 100 ml dactonitrile et un peu de sulfate de sodium anhydre ou de chlorure de calcium anhydre. Agiter, f
15、ermer le flacon avec le bouchon et laisser reposer une nuit. 3.7 Rvelateur, solution 10 g/l de dichloro-26 p-benzoquinone-4 chloroimide dans Ithanol 96 % (V/ VI. Prparer cette solution, juste avant lemploi, en dissolvant 500 mg de dichloro-26 p-benzoquinone-4 chloroimide dans 50 ml dthanol (3.3). 3.
16、8 M&ange de solvants de developpement. Prparer juste avant lemploi, un mlange de deux volumes de n-hexane (3.41, deux volumes de benzne et un volume dacide actique cristallisable. AVERTISSEMENT : Le benzene est toxique et inflamma- ble et des prcautions doivent tre prises lors de son utili- sation.
17、3.9 Solutions talons dantioxygnes, contenant 1 g dantioxygne par litre de mthanol. Dans une srie de huit bchers, dissoudre respectivement 100 mg de chaque antioxygne (voir chapitre 1) dans le mtha- nol (3.21, transvaser dans une srie de huit fioles jauges de 100 ml, ajuster au trait repre avec du mt
18、hanol et agiter. ISO 5558-1982 (FI 4 Appareillage 5 Mode opratoire Matriel courant de laboratoire, et notamment : 5.1 Prise dessai Effectuer une prise dessai de 75 10 g partir de lchantillon pour essai. 4.1 Cuve de dveloppement pour chromatographie en couche mince, en verre, avec couvercle en verre
19、rod, sus- ceptible de contenir des plaques en verre de dimensions 200 mm x 200 mm. 52 . Extraction des antioxygnes 4.2 taleur et socle, pour la prparation des plaques. Dissoudre la prise dessai dans un bcher de 150 ml (4.101, avec 100 ml de n-hexane (3.4) en chauffant lgrement, si nces- saire, et tr
20、ansvaser cette solution dans une ampoule dcanter de 250 ml (4.51, en faisant attention quaucune particule insolu- ble ne passe dans lampoule dcanter. 4.3 Plaq ues en verre, 200 mm x 200 mm, cou che de gel de silice de OI40 mm dpaisseur revtues dune Utiliser merce, les ou plaques toutes prpares, les
21、prparer comme suit. disponibles dans le com- Rincer le bcher avec 25 ml de n-hexane (3.4) et transvaser le liquide de rincage dans lampoule dcanter, en faisant atten- tion quaucune particule insoluble ne passe dans lampoule dcanter. Nettoyer soigneusement les plaques Ithanol, au lactone jusqu limina
22、tion totale des graisses. n- hexane et Ajouter 25 ml dactonitrile satur de n-hexane (3.5) et agiter pendant 1 min. Recueillir la phase dactonitrile (phase inf- rieure) dans une seconde ampoule dcanter de 250 ml (4.5). Peser 30 g de gel de silice (3.1) dans une fiole conique de 250 ml (4.8) et ajoute
23、r 60 ml deau. Boucher et homogniser le contenu en agitant nergiquement pendant 1 min. NOTE - Si une mulsion sest forme, faire tourner soigneusement lampoule dcanter sous un courant deau 50 OC environ jusqu obtention de phases limpides. Appliquer immdi atement une couche de OI4 mm de la pte de gel de
24、 silice sur la surface des plaques laide de 1 taleur (4.2). Scher les plaques la temprature ambiante pendant 15 min, les porter dans ltuve (4.6) rgle 103 + 2 OC, pendant 1 h. Laisser refroidir dans le dessiccateur (4.13) et conserver les pla- ques dans le dessiccateur jusqu emploi. Effectuer trois l
25、aide de 25 ml fois. nouvelles extractions de la phase n- hexane dactonitrile satur de n- hexane (3.5) chaque Runir les extraits dactonitrile et laver deux fois avec, chaque fois, 25 ml de n-hexane satur dactonitrile (3.6). 4.4 vaporateur rotatif. Transvaser la phase dactonitrile dans un ballon de 25
26、0 ml fond rond (4.11) et vaporer le solvant sous vide dans Ivapo- rateur rotatif (4.4) une temprature aussi basse que possible. II est essentiel que la temprature du bain deau ne dpasse pas 40 OC. 4.5 Ampoules dcanter, de capacit 250 ml. 4.6 tuve lectrique, de prfrence bien ventile, rglable 103 + 2
27、OC. Dissoudre le rsidu dans 2 ml de mthanol (3.2) et verser la solution dans un petit flacon. Si le rsidu nest pas complte- ment dissous, filtrer la solution. 4.7 tuve lectrique, de prfrence bien ventile, rglable 60 $r 2 OC. 4.8 Fiole conique, de capacit 250 ml, bouchon en verre rod. NOTE - Si lon p
28、rvoit une teneur en antioxygnes infrieure 100 mg/kg (ppm), il est recommand de ne dissoudre le rsidu que dans 1 ml de mthanol. 4.9 Fioles jauges, col rod, de munies de bouchons en verre rod. capacit 100 ml, et 53 . Chromatographie et recherche Enrober les parois papier filtre. de la cuve de dveloppe
29、ment (4.1) avec du 4.10 Bcher, forme haute, de capacit 150 ml. 4.11 Ballon, fond rond, de capacit 250 ml, adaptable lvaporateur rotatif (4.4). Verser le mlange de solvants de dveloppement (3.8) dans la cuve de dveloppement une profondeur de 1 cm environ et poser le couvercle. Laisser reposer lobscur
30、it 1 2 h afin de saturer latmosphre lintrieur de la cuve avec les vapeurs des solvants. 4.12 Seringue, de capacit 20 1, gradue en microlitres. 4.13 Dessiccateur. A laide de la seringue (4.121, dposer des portions 10 1.11 et 20 1.11 de la solution mthanolique des antioxygnes extraits pr- pare comme d
31、crite en 5.2 en deux points distincts distants de 20 mm et 20 mm du bord de la plaque (4.31, pralablement 4.14 ques. Appareil pour pulvriser le rvlateur sur les pla- 2 ISO 5558-1982 (FI active pendant 1 h une temprature de 60 OC dans ltuve (4.7). Dposer 4 1.11 de chacune des solutions talons danti-
32、oxygnes (3.9) en des points distincts distants de 20 mm et 20 mm du mme bord de la plaque. Reprer une ligne parallle au bord de la plaque et 150 mm des points dapplication. Introduire la plaque dans la cuve de dveloppement. Laisser lobscurit jusqu ce que le front du solvant atteigne la ligne repre.
33、Sortir la plaque de la cuve et la laisser scher sous hotte venti- le. Pulvriser, laide de lappareil (4.141, le rvlateur (3.7) sur la plaque et placer celle-ci dans ltuve (4.6) rgle 103 + 2 OC, pendant 10 15 min. Sortir la plaque de ltuve et comparer les valeurs des Rf des taches obtenues provenant d
34、es solutions talons avec celles des antioxygnes extraits. Des informations complmentaires relatives lidentification des antioxygnes peuvent tre obtenues en introduisant la pla- que, ramene la temprature du laboratoire, dans une cuve de dveloppement sature de vapeur dammoniac pendant envi- ron 30 s e
35、t en comparant les couleurs obtenues pour les divers antioxygnes. 6 Procs-verbal dessai Le procs-verbal dessai doit indiquer la mthode utilise et les rsultats obtenus. II doit, en outre, mentionner tous les dtails opratoires non prvus dans la prsente Norme internationale, ou facultatifs, ainsi que les incidents ventuels susceptibles davoir agi sur les rsultats. Le pro&-verbal dessai doit donner tous les renseignements ncessaires lidentification complte de 1 chantillon. Page blanche Page bl Page blanche
