1、c Y Norme internationale INTERNATIONAL ORGANIZATION FOR STANDARDIZATION.MEYHAPOHAR OPTAHMJAMR Il0 CTAHAPTkl3AWWlRGANISATION INTERNATIONALE DE NORMALISATION Viandes et produits base de viande - Recherche des polyphosphates Meat and meat products - Detection of polyphosphates Premire dition - 1980-09-
2、15 CDU 637.52 : 543.54 : 546.185 Rf. no : ISO 55534980 (FI Descripteurs : viande, produit base de viande, dtection, phosphate, analyse chromatographique, prparation de spcimen dessai. Prix bas sur 3 pages Avant-propos LISO (Organisation internationale de normalisation) est une fdration mondiale dorg
3、anismes nationaux de normalisation (comits membres de IISO). Llaboration des Normes internationales est confie aux comits techniques de IISO. Chaque comit membre intress par une tude a le droit de faire partie du comit technique correspondant. Les organisations internationales, gouvernementales et n
4、on gouverne- mentales, en liaison avec IISO, participent galement aux travaux. Les projets de Normes internationales adopts par les comits techniques sont soumis aux comits membres pour approbation, avant leur acceptation comme Normes inter- nationales par le Conseil de IISO. La Norme internationale
5、 ISO 5553 a t labore par le comit technique ISO/TC 34, Produits agricoles alimentaires, et a t soumise aux comits membres en mars 1979. Les comits membres des pays suivants lont approuve : Afrique du Sud, Rp. d Allemagne, R. F. Australie Autriche Brsil Bulgarie Canada Chypre Core, Rp. de gypte, Rp.
6、arabe d Espagne Pays- Bas thiopie Philippines France Pologne Hongrie Roumanie Inde Royaume-Uni Isral Tchcoslovaquie Jamahiriya arabe libyenne Thailande Kenya Turquie Mexique Yougoslavie Nouvelle-Zlande Aucun comit membre ne la dsapprouve. 0 Organisation internationale de normalisation, 1980 Imprim e
7、n Suisse NORME INTERNATIONALE ISO 5553-1980 (F) Viandes et produits base de viande - Recherche des * polyphosphates 1 Objet La prsente Norme internationale spcifie une mthode de recherche des phosphates linaires condenss dans les viandes et les produits base de viande, aprs sparation par chroma- tog
8、raphie en couche mince. 2 Domaine dapplication tant donn que les phosphates sont progressivement hydroly- ss par les enzymes prsents dans les viandes ou les produits base de viande et au cours du traitement par la chaleur des viandes ou des produits base de viande, la prsente Norme internationale sa
9、pplique uniquement la recherche des poly- phosphates ajouts qui sont encore prsents dans lchantillon au moment de la recherche. 3 Rfrence ISO 3100, Viandes et produits base de viande - chantillon- nage. 4 Principe Extraction des viandes ou des produits base de viande par lacide trichloractique. Dfca
10、tion du srum obtenu au moyen dun mlange thanol/oxyde dithylique. Sparation des phos- phates par chromatographie en couche mince. Recherche des polyphosphates par pulvrisation avec des ractifs pour le dveloppement de la couleur. 5 Ractifs Tous les ractifs doivent tre de qualit analytique reconnue. Le
11、au distille doit tre de leau distille ou de leau de puret au moins quivalente. Avertissement - Observer toutes les prcautions appro- pries la mise en uvre du mode opratoire spcifi dans la prsente Norme internationale. 5.1 Acide trichloractique. 5.2 Oxyde dithylique. 5.3 thanol, 95 % W VI. 5.4 Cellul
12、ose en poudre, de qualit pour chromatographie en couche mince. 5.5 Amidon soluble. 5.6 Mlange de rfrence. Dissoudre, dans 100 ml deau, - 200 mg de dihydrognophosphate de sodium monohy- drat (NaH2P04.H20), - 300 mg de diphosphate ttrasodique dcahydrat (Na4P207JOH20), - 200 mg de triphosphate pentasod
13、ique (Na5P3010), et - 200 mg dhexamtaphosphate de sodium (NaPO$Jx 103. Le mlange de rfrence reste stable 4 OC durant au moins 4 semaines. 5.7 Solvant de dveloppement. Mlanger 140 ml dalcool isopropylique, 40 ml dune solution dacide trichloractique 135 g/l et 0,6 ml de solution dhydroxyde dammonium,
14、,020 = 090 g/ml, environ 25 % bnlm). Conserver le solvant dans un flacon hermtiquement clos. 5.8 Ractif de pulvrisation 1. Mlanger des volumes gaux dune solution de molybdate dammonium ttrahydrat NH4)6M0702.4H201 75 g/l et dacide nitrique concentr, ,020 = 1,4O g/ml. Dissoudre 10 g dacide tartrique d
15、ans 100 ml de ce mlange. Prparer le ractif le jour de son utilisation. 5.9 Ractif de pulvrisation II. Dissoudre 0,5 g dacide amino-l naphtol-2 sulfonique-4 dans un mlange form de 195 ml dune solution de disulfite de sodium (mtabisulfite de sodium; Na2S205) 150 g/l et 5 ml dune solution .de sulfite d
16、e sodium (Na2S03) 200 g/l. Dissou- dre 40 g dactate de sodium trihydrat (NaOOCCHz.3H20) dans ce mlange. Conserver le ractif au rfrigrateur dans un flacon brun herm- tiquement clos. Rejeter cette solution aprs 1 semaine. 1 ISO 55534980 (FI 6 Appareillage Matriel courant de laboratoire non notamment :
17、 spcifi par ailleurs, et Conserver les plaques dans le dessiccateur (6.4). 6.1 Plaques 10cm x 20cm. verre, soigneusement dgraisses, II est galement possible dutiliser tion en couche mince (voir 6.2). des plaques prtes 1 utilisa- 6.2 Dispositif de pulvrisation, pour la prparation de cou- ches de 0,25
18、 mm dpaisseur. Si un tel dispositif nest pas dis- ponible, des plaques prtes lutilisation en couche mince de 0,25 mm dpaisseur peuvent tre utilises condition que lamidon soit utilis comme liant. Des plaques contenant du gypse (sulfate de calcium) ne conviennent pas. 8.2 Prbparation de lchantillon po
19、ur essai Rendre lchantillon homogne par au moins deux passages dans le hachoir viande (6.5) et par mlange. Garder Ichantil- Ion dans un flacon ferm, tanche et rempli compltement, et le conserver, si ncessaire, au rfrigrateur. Analyser Ichantil- Ion ds que possible aprs lhomognisation, mais toujours
20、dans les 5 h. 6.3 Mlangeur de laboratoire. 8.3 Prparation du srum 6.4 Dessiccateur. 8.3.1 Ptrir 50 g de lchantillon pour essai (8.2) avec 15 ml deau entre 40 et 60 OC dans un bcher, au moyen dune spa- tule ou dun agitateur aplati, jusqu lobtention dune masse homogne, mais en tout cas en moins de 5 m
21、in. 6.5 Hachoir mcanique viande, type de laboratoire, muni dune plaque perfore dont les trous ont un diamtre ne dpassant pas 4 mm. 6.6 Papier filtre pliss, de 15 cm de diamtre. 8.3.2 Ajouter 10 g dacide mlanger soigneusement. trichloractique (5.1) et ensuite 6.7 Micropipette, de 1 1.11, ou microseri
22、ngue micromtrique et bout courbe en verre. avec vis 6.8 Cuve de dveloppement, de dimensions appropries, avec couvercle fermant bien, en vue du dveloppement du chromatogramme en couche mince. 8.3.4 Si le filtrat est trouble, agiter une fois avec un gal volume doxyde dithylique (5.2). liminer la couch
23、e thre au moyen dune pipette troite et ajouter, la phase aqueuse, un gal volume dthanol (5.3). Agiter durant 1 min. Laisser repo- ser le mlange durant quelques minutes et filtrer sur papier filtre pliss (6.6). 69 la Sche-cheveux, pouvan temprature ambiante, soit t produire soit un courant un courant
24、 dair tide. dair 6.10 Pulvrisateur. 84 . Sparation par chromatographie 6.11 tuve, rglable 60 OC. 8.4.1 Verser le solvant de dveloppement (5.7) dans la cuve de dveloppement (6.8) jusqu une hauteur de 5 10 mm au- dessus du fond et fermer la cuve avec son couvercle. Laisser reposer durant au moins 30 m
25、in la temprature ambiante, labri de la lumire solaire et des courants dair. 7 chantillon 7.1 Oprer sur un chantillon reprsentatif dau moins 200 g. Voir ISO 3100. 8.4.2 Appliquer 3 PI du srum, ou 6 1 si le mode opratoire de 8.3.4 a t utilis pour obtenir un mlange limpide, la cou- che de cellulose (8.
26、1) sur une ligne trace au crayon environ 2 cm de lextrmit. Obtenir des taches troites en appliquant 1 PI la fois. 7.2 Prparer lchantillon pour essai le jour de son arrive au laboratoire. 8 Mode opratoire Utiliser, pour le sche-cheveux scha (6.9). ge, un courant dair tide produit par le 81 . Prparati
27、on des plaques couche mince NOTE - phates. viter lair chaud en raison du risque dhydrolyse des phos- Dissoudre 0,3 g damidon (5.5) dans 90 ml deau bouillante. Refroidir, ajouter 15 g de poudre de cellulose (5.4) et homog- niser dans le mlangeur de laboratoire (6.3) durant 1 min. 8.4.3 Dans les mmes
28、conditions, appliquer 3 1-11 du mlange de rfrence (5.6) sur la plaque, une distance de 1 1,5 cm partir de la tache de lchantillon, mais exactement la mme distance de lextrmit. Appliquer ce mlange sur des plaques de verre (6.1) au moyen du dispositif de pulvrisation (6.2) et ajuster afin dobtenir une
29、 couche de 0,25 mm. 2 ISO 55534980 (FI 8.4.4 Retirer le couvercle de la cuve et, rapidement mais avec prcaution, placer la plaque de cellulose dans la cuve. Remettre immdiatement le couvercle. Dvelopper la plaque la temp- rature ambiante, labri de la lumire solaire et des courants dair. 8.4.5 Poursu
30、ivre le dveloppement jusqu ce que le solvant ait effectu une ascension denviron 10 cm partir du trait de crayon. Retirer la plaque de la cuve et laisser scher soit durant 10 min ltuve (6.11) rgle 60 OC, soit durant 30 min la temprature ambiante, soit au moyen dun courant dair. 8.5 Recherche des phos
31、phates 8.5.1 Placer la plaque verticalement sous une hotte et pulvri- ser la plaque lgrement, mais de facon uniforme, au moyen du ractif de pulvrisation I (5.8). 8.5.2 Scher la plaque au moyen dun courant dair tide pro- duit par le sche-cheveux. Chauffer ensuite durant au moins 1 h dans une tuve rgl
32、e 100 OC en vue dliminer les derni- res traces dacide nitrique. Retirer la plaque de ltuve et vrifier labsence de lodeur piquante de lacide nitrique. 8.5.3 Laisser refroidir la plaque la temprature ambiante et la replacer ensuite sous la hotte. Pulvriser la plaque lgrement, mais de facon uniforme, a
33、u moyen du ractif de pulvrisation Il (5.9). Des taches bleues apparaissent immdiatement. NOTE - La pulvrisation avec le ractif II nest pas absolument nces- saire. Cependant, les taches bleu intense produites par ce ractif am- liorent considrablement la dtection. 9 Interprtation Comparer les distance
34、s de migration des taches de phosphate obtenues partir de lchantillon mlange de rfrence. des phosphates du Une tache dortophosphate est toujours prsente. Si Ichantil- Ion contient des phosphates condenss, une tache de diphos- phate et/ou des taches de phosphates plus haut degr de polymrisation sont
35、visibles. Les valeurs du RF des phosphates dans le mlange de rfrence sont orthophosphate de 080 090 diphosphate ( pyrophosphatd triphosphate hexamtapolyphosphate (sel de Graham) de 050 0,60 de 025 035 00 En gnral, les valeurs du RF des polyphosphates dans les extraits de viandes et de produits base
36、de viande sont quelque peu infrieures. NOTE - Les corrections pour les diffrences dans les valeurs du RF des phosphates dans lchantillon extrait et dans le mlange de rf- rence peuvent tre obtenues en plaant, sur la mme plaque, un extrait de lchantillon de viande frache. tant donn que la viande frach
37、e contient uniquement des monophosphates, le pourcentage de correc- tion peut tre obtenu en comparant les distances de migration de cette tache talon avec la tache correspondante du mlange de rfrence. 10 Procs-verbal dessai Le procs-verbal dessai doit indiquer la mthode utilise et le rsultat obtenu.
38、 II doit, en outre, mentionner tous les dtails opratoires non prvus dans la prsente Norme internationale, ou facultatifs, ainsi que les incidents ventuels susceptibles davoir agi sur le rsultat. Le procs-verbal dessai doit donner tous les renseig ncessaires lidentification complte de lchantillon nements Page blanche Page blanche Page blanche
