1、NORME INTERNATIONALE INTERNATIONAL ORGANIZATION FOR STANDARDIZATION #MEXfiYHAPOAHAR OPI-AHM3ALWl I-l0 CTAHAAPTM3ALJMI?ORGANISATION INTERNATIONALE DE NORMALISATION Viandes et produits base de viande - Dtermination de la teneur en nitrates (Mthode de rfrence) Meat and meat products - Determination of
2、nitrate content (Reference method) Premire dition - 1975-09-01 CDU 637.5 : 546.175 Rf. no : ISO 3091-1975 (F) Descripteurs : viande, produit base de viande, analyse chimique, dosage, nitrate. Prix bas sur 5 pages AVANT-PROPOS LISO (Organisation Internationale de Normalisation) est une fdration mondi
3、ale dorganismes nationaux de normalisation (Comits Membres KO). Llaboration de Normes Internationales est confie aux Comits Techniques ISO. Chaque Comit Membre intress par une tude a le droit de faire partie du Comit Technique correspondant. Les organisations internationales, gouvernementales et non
4、 gouvernementales, en liaison avec IISO, participent galement aux travaux. Les Projets de Normes Internationales adopts par les Comits Techniques sont soumis aux Comits Membres pour approbation, avant leur acceptation comme Normes Internationales par le Conseil de IISO. La Norme Internationaie ISO 3
5、091 a t tablie par le Comit Technique lSO/TC 34, Produits agricoles alimentaires, et soumise aux Comits Membres en mai 1974. Elle a t approuve par les Comits Membres des pays suivants : Afrique du Sud, Rp. d thiopie Roumanie Allemagne France Royaume-Uni Australie Hongrie Tchcoslovaquie Autriche Inde
6、 Thalande Bulgarie Irlande Turquie Danemark Isral U.R.S.S. gypte, Rp. arabe d Pays-Bas Yougoslavie Espagne Pologne Le Comit Membre du pays suivant a dsapprouv le document pour des raisons techniques : Canada 0 Organisation Internationale de Normalisation, 1975 l Imprim en Suisse NORME INTERNATIONALE
7、 603091-1975(F) Viandes et produits base de viande - Dtermination de la teneur en nitrates (Mthode de rfrence) 1 OBJET ET DOMAINE DAPPLICATION La prsente Norme Internationale spcifie une mthode de rfrence pour la dtermination de la teneur en nitrates des viandes et produits base de viande. 2 RFRENCE
8、S ISO 2918, Viandes et produits base de viande - Dtermination de la teneur en nitrites (Mthode de rfrence). ISO 3 100, Viandes et produits base de viande - chantillonnage. 3 DFINITION teneur en nitrates des viandes et produits base de viande : Teneur en nitrates dtermine suivant le mode opratoire dc
9、rit dans la prsente Norme Internationale et exprime en milligrammes de nitrate de potassium par kilogramme (parties par million). 4 PRINCIPE Extraction leau chaude dune prise dessai, prcipitation des protines et filtration. Rduction des nitrates extraits dans le filtrat en nitrites, par du cadmium m
10、tallique. Obtention dune coloration rouge par addition de chlorure de sulfanilamide et de chlorure de naphtylthylnediamine au filtrat et mesurage photomtrique une longueur donde de 538 nm. 5 RACTIFS Tous les ractifs doivent tre de qualit analytique. Leau utilise doit tre de leau distille ou de puret
11、 au moins quivalente. 5.1 Zinc en baguettes, denviron 15 cm de longueur et 5 7 mm de diamtre. 5.2 Solutions utilises pour la prcipitation des protines 5.2.1 Ractif I Dissoudre 106g dhexacyanoferrate de potassium trihydrat K4Fe(CN)e.3H20 dans de leau et complter 1 000 ml. 5.2.2 Ractif II Dissoudre 22
12、0 g dactate de zinc dihydrat Zn(CHaCOO)2.2H20 et 30 ml dacide actique cristallisable dans de leau et complter 1 000 ml. 5.2.3 Borax, solution sature. Dissoudre 50 g de ttraborate de sodium dcahydrat (Na2B407.10HzO) d ans 1 000 ml deau tide et laisser refroidir la temprature du laboratoire. 5.3 Sulfa
13、te de cadmium, solution 30 g/l= Dissoudre 37 g de sulfate de cadmium (3CdS04.8H20) dans de leau et complter 1 000 ml. 5.4 Acide chlorhydrique, solution environ 0,l N. Diluer 8 ml dacide chlorhydrique concentr (p2c III9 g/ml) dans de leau et complter 1 000 ml. 5.5 Solution tampon ammoniacale, pH 9,6
14、9,7. Diluer 20 ml dacide chlorhydrique concentr (P *c 1 ,19 g/ml) avec 500 ml deau. Mlanger, ajouter 10 g de sel disodique de lacide thylne diamine ttractique CH2N(CH2COOH)CH2COONa12.2H# et 55 ml dhydroxyde dammonium concentr (pso 0,88 g/ml). Complter 1 000 ml avec de leau et mlanger. Contrler le pH
15、. 5.6 Nitrite de sodium, solutions talons. Dissoudre 1,000 g de nitrite de sodium (NaNO*) dans de leau et complter 100 ml dans une fiole jauge. Transfrer, la pipette, 5 ml de cette solution dans une fiole jauge de 1 000 ml. Ajuster au trait repre. Prparer une srie de solutions talons en transfrant,
16、la pipette, 5 ml, 10 ml et 20 ml de cette solution dans des fioles jauges de 100 ml et en compltant au trait repre avec de leau. Ces solutions talons contiennent respectivement 2,5 pg, 5,0 pg, et 10,O rc(g de nitrite de sodium par millilitre. Les solutions talons, ainsi que la solution de nitrite de
17、 sodium ( 0,05 g/l) dont elles proviennent, doivent tre prpares le jour de leur utilisation. 1 ISO3091-1975(F) 5.7 Solutions pour le dveloppement de la coloration 6.8 Colorimtre photolectrique ou spectrophotomtre avec des cellules de 1 cm de parcours optique. 5.7.1 Solution I 6.9 Fiole conique, de 3
18、00 ml. Dissoudre par chauffage au bain deau 2 g de sulfanilamide (NH,CGH,SO,NH,) dans 800 ml deau. Refroidir, filtrer, si ncessaire,. et, ajouter, en agitant, 100 ml dacide chlorhydrique concentr (p2c 1,19 g/ml). Complter 1 000 ml avec de leau. 7 CHANTILLON 7.1 Oprer sur un chantillon reprsentatif d
19、au moins 200 g. Voir ISO 3100. 5.72 Solution II 7.2 Prparer immdiatement lchantillon pour essai (8.1) ou, si cela nest pas possible, conserver lchantillon, une temprature comprise entre 0 et 5 OC, durant 4 jours au maximum. Dissoudre, dans leau, 0,25 g de chlorure de N naphtyl-l-thylnediamine (C, cH
20、,NHCH$H,NH,.2HCI.) Complter 250 ml avec de leau. Garder et la co la solution dans un flacon brun fonc, bien ferm semaine au max imum. nservek au rfrigrateur, une 8 MODE OPRATOIRE 5.7.3 Solution Ill 8.1 Prparation de lchantillon pour essai Diluer 1 000 ml, avec de leau, 445 ml dacide chlorhydrique co
21、ncentr (pZO III9 g/mI). Rendre lchantillon homogne par au moins deux passages dans le hachoir viande (6.1), et mlanger. Le conserver au froid dans un flacon tanche rempli compltement. 5.8 Nitrate de potassium, solution talon. Analyse lchantillon pour essai ans les 24 h. le plus rapidement Dissoudre
22、1,465 g de nitrate de potassium (KNOS) dans de leau et complter 100 ml dans une fiole jauge. Transfrer, la pipette, 5 ml de la solution dans une autre fiole jauge de 1 000 ml et ajuster au trait repre. mais toujours d NOTE - Dans le cas des produits non cuits, analyser lchantillon immd iatement aprs
23、 hom ognisat ion. Cette solution contient 73,25 pg/mI de nitrate de potassium. 8.2 Prparation de la colonne de cadmium Cette son u solution til isation. talon doit tre prpare le jour mme de 8.2.1 Placer 3 5 baguettes de zinc (5.1) dans la solution de sulfate de cadmium (5.3) contenue dans un bcher (
24、1 I de solution de sulfate de cadmium suffit pour prparer une colonne de cadmium). 6 APPAREILLAGE 8.2.2 Enlever, toutes les 1 ou 2 h, le cadmium mtallique spongieux dpos sur les baguettes de zinc, en remuant celles-ci dans la solution ou en les frottant lune contre I autre. Matriel courant de labora
25、toire, et notamment : 6.1 Hachoir mcanique viande, type de laboratoire, muni dune plaque dont les trous ont un diamtre ne dpassant pas4mm. * 8.2.3 Finalement, aprs 6 8 h, dcanter la solution et laver le dpt deux fois avec 1 I deau distille, en prenant soin que le cadmium soit continuellement recouve
26、rt dune couche de liquide. 6.2 Balance analytique. 6.3 Fioles jauges, de 100 ml, 200 ml et 1 000 ml, conformes llSO/R 1042, classe B. 8.2.4 Transvaser le dpt de cadmium au moyen de 400 ml de la solution dacide chlorhydrique (5.4) dans un appareil mlangeur pour laboratoire et mlanger durant 10 s. 6.4
27、 Pipettes un trait, de 20 ml et 10 ml et, si ncessaire, dune autre capacit, selon le prlvement aliquote (8.8.1) conformes IISO/R 648, classe A. Remettre le contenu du mlangeur dans le bcher. 8.2.5 Agiter de temps en temps le dpt de cadmium . laide dune baguette de verre. Laisser reposer durant une n
28、uit dans la solution dacide chlorhydrique, puis remuer encore une fois, afin dliminer toutes les bulles dair du cadmium. 6.5 Bain deau bouillante. 6.6 Papier filtre plis, de 15 cm de diamtre environ, exempt de nitrites et de nitrates. 8.2.6 Dcanter la solution et laver la bouillie de cadmium deux fo
29、is avec 1 I deau chaque fois. 6.7 Appareil en verre, destin la rduction des nitrates (voir figure). 2 ISO3091-1975(F) 8.2.7 Adapter un tampon en fibre de verre au fond de la colonne en verre destine contenir le cadmium (voir figure). 8.2.8 Transvaser et laver le cadmium dans la colonne en verre en u
30、tilisant de leau jusqu ce que la hauteur de cadmium atteigne environ 17 cm. Vider la colonne de temps en temps pendant le remplissage, mais en prenant soin que le niveau du liquide ne tombe pas au-dessous du sommet du lit de cadmium. liminer les inclusions de gaz (par exemple laide dune aiguille tri
31、coter). Le liquide doit scouler avec une vitesse maximale de 3 ml/min. 8.3 Prise dessai Peser, 0,001 g prs, 10 g de lchantillon pour essai. 8.4 Dprotination 8.4.1 Transvaser quantitativement la prise dessai dans la fiole conique (6.9) et ajouter, successivement, 5 ml de la solution sature de borax (
32、5.2.3) et 100 ml deau une temprature minimale de 70 “C. 8.4.2 Chauffer la fiole durant 15 min au bain deau bouillante (6.5) et agiter plusieurs reprises. 8.4.3 Laisser refroidir la temprature ambiante la fiole et son contenu et ajouter successivement 2 ml du ractif I (5.2.1) et 2 ml du ractif II (5.
33、2.2). Mlanger soigneusement aprs Chaq#ue addition. 8.4.4 Transvaser dans une fiole jauge de 200 ml (6.3). Complter jusquau trait repre avec de leau et mlanger. Laisser reposer durant 30 min la temprature ambiante. 8.4.5 Laisser dcanter soigneusement le liquide sur- nageant et filtrer sur un papier f
34、iltre plis (6.6) afin dobtenir une solution limpide. NOTE - Dans le cas o il est demand de dterminer teneur en nitrites et en nitrates, sur le mme chantillon filtrat dprotin peut tre utilis pour les deux dosages. 8.5 Pr-traitement de la colonne de cadmium Laver la colonne de cadmium successivement a
35、vec 25 la fois la le mme ml de la solution dacide chlorhydrique (5.4), 50 ml deau et 25 ml de la solution tampon ammoniacale (5.5) dilue 1 -t- 9. viter que le niveau du liquide dans lentonnoir ne tombe au-dessous du sommet du tube adducteur capillaire de la colonne. 8.6 Contrle cadmium du pouvoir rd
36、ucteur de la colonne de 8.6.1 Prlever 20 ml de la solution talon de nitrate de potassium (5.8) avec une pipette, les verser dans le rservoir au sommet de la colonne, et ajouter, en mme temps, 5 ml de la solution tampon ammoniacale (5.5). Recueillir Ieffluent dans une fiole jauge de 100 ml (6.3). 8.6
37、.2 Lorsque le rservoir est presque vide, laver les parois avec environ 15 ml deau et rpter la mme opration avec une autre fraction de 15 ml deau. Lorsque cette fraction sest coule dans le rservoir compltement avec de leau. la colonne, remplir 8.6.3 Aprs avoir recueilli presque 100 ml de liquide, enl
38、ever la fiole de la colonne. Ajuster au trait repre avec de leau. 8.6.4 Introduire, la pipette, 10 ml dluat dans une fiole jauge de 100 ml (6.3) et poursuivre selon les indications de 8.8.2 8.8.4. 8.6.5 Si la concentration de Iluat en nitrites, dtermine partir de la courbe dtalonnage (voir 8.10), es
39、t infrieure 0,9 ,ug de nitrite de sodium par millilitre (cest-dire 90 % de la valeur thorique), la colonne de cadmium doit tre rejete. 8.7 Rduction des nitrates en nitrites 8.7.1 Introduire, la pipette, dans le rservoir situ au sommet de la colonne, 20 ml du filtrat (8.4.5) et, en mme temps, 5 ml de
40、 la solution tampon ammoniacale (5.5). Recueillir Ieffluent de la colonne dans une fiole jauge de 100 ml (6.3). 8.7.2 Procder comme spcifi en 8.6.2 et 8.6.3. 8.8 Colorimtrie 8.8.1 Introduire, la pipette, dans une fiole jauge de 100 ml (6.3), une partie aliquote de Iluat (V ml) ne dpassant pas 25 ml
41、et ajouter de leau de facon obtenir , un volume de 60 ml environ. 8.8.2 Ajouter 10 ml de la solution I (5.7.1) puis 6 ml de la solution III (5.7.3), mlanger et laisser la solution durant 5 min la temprature ambiante, lobscurit. 8.8.3 Ajouter 2 ml de la solution II (5.7.2), mlanger et laisser la solu
42、tion durant 3 10 min la temprature ambiante, lobscurit. Complter au trait repre avec de leau. 8.8.4 Mesurer Iabsorbance de la solution au colorimtre photolectrique ou au spectrophotomtre (6.8) dans une cellule de 1 cm de parcours optique une longueur donde denviron 538 nm. NOTE - Si Iabsorbance de l
43、a solution colore obtenue partir de la prise dessai est suprieure celle de la solution talon la plus concentre, recommencer les oprations dcrites en 8.8 en diminuant la quantit dluat prleve la pipette en 8.8.1. 8.9 Nombre de dterminations Effectuer deux dterminations indpendantes partir diffrentes p
44、ortions prleves sur lchantillon pour essai. de 3 ISO3091-1975 (F) 8.10 Courbe dtalonnage 8.10.1 Transfrer, la pipette, respectivement dans quatre fioles jauges de 100 ml (6.3), 10 ml deau et 10 ml de chacune des trois solutions talons de nitrite de sodium (5.6), reprsentant 2,5 pg, 5,0 ,ug et 10,O E
45、-19 de nitrite par millilitre. 8.10.2 Dans chaque fiole, ajouter de leau pour obtenir un volume de 60 ml environ, et procder comme dcrit de 8.8.2 8.8.4. 8.10.3 Tracer la courbe dtalonnage en portant les absorbantes mesures en fonction des concentrations, en microgrammes par millilitre, de solution t
46、alon de nitrite de sodium. 9 EXPRESSION DES RSULTATS 9.1 Mode de calcul et formule Calculer la teneur en nitrate de lchantillon, exprime en milligrammes de nitrate de potassium par kilogramme, laide de la formule o 10 000 KN03 = 1,465 cx- - NaNO* mxV m est la masse, en grammes, de la prise dessai; V
47、 est le volume, en millilitres, de la partie aliquote Le procs-Ve rbal dessai doit donner tous les rensei gneme dluat (voir 8.8.1); ncessaires I identification complte de Ichantil Ion. c est la concentration de nitrite de sodium, en microgrammes Par millilitre, lue sur la courbe dtalonnage, correspondant Iabsorbance de la solution prpare partir de la prise dessai (voir 8.8.4); NaNO est la teneur en nitrite de lchantillon, exprime en milligrammes de nitrite de sodium et dtermine par kilogramme, conformment aux prescriptions de IISO 2918. Prendre comme rsultat la moyenne arit
