1、 Numro de rfrence ISO 29822:2009(F) ISO 2009NORME INTERNATIONALE ISO 29822 Premire dition 2009-03-15Corps gras dorigine vgtale Diacylglycrols isomriques Dtermination des teneurs relatives en 1,2- et 1,3-diacylglycrols Vegetable fats and oils Isomeric diacylglycerols Determination of relative amounts
2、 of 1,2- and 1,3-diacylglycerols ISO 29822:2009(F) PDF Exonration de responsabilit Le prsent fichier PDF peut contenir des polices de caractres intgres. Conformment aux conditions de licence dAdobe, ce fichier peut tre imprim ou visualis, mais ne doit pas tre modifi moins que lordinateur employ cet
3、effet ne bnficie dune licence autorisant lutilisation de ces polices et que celles-ci y soient installes. Lors du tlchargement de ce fichier, les parties concernes acceptent de fait la responsabilit de ne pas enfreindre les conditions de licence dAdobe. Le Secrtariat central de lISO dcline toute res
4、ponsabilit en la matire. Adobe est une marque dpose dAdobe Systems Incorporated. Les dtails relatifs aux produits logiciels utiliss pour la cration du prsent fichier PDF sont disponibles dans la rubrique General Info du fichier; les paramtres de cration PDF ont t optimiss pour limpression. Toutes le
5、s mesures ont t prises pour garantir lexploitation de ce fichier par les comits membres de lISO. Dans le cas peu probable o surviendrait un problme dutilisation, veuillez en informer le Secrtariat central ladresse donne ci-dessous. DOCUMENT PROTG PAR COPYRIGHT ISO 2009 Droits de reproduction rservs.
6、 Sauf prescription diffrente, aucune partie de cette publication ne peut tre reproduite ni utilise sous quelque forme que ce soit et par aucun procd, lectronique ou mcanique, y compris la photocopie et les microfilms, sans laccord crit de lISO ladresse ci-aprs ou du comit membre de lISO dans le pays
7、 du demandeur. ISO copyright office Case postale 56 CH-1211 Geneva 20 Tel. + 41 22 749 01 11 Fax + 41 22 749 09 47 E-mail copyrightiso.org Web www.iso.org Publi en Suisse ii ISO 2009 Tous droits rservsISO 29822:2009(F) ISO 2009 Tous droits rservs iiiAvant-propos LISO (Organisation internationale de
8、normalisation) est une fdration mondiale dorganismes nationaux de normalisation (comits membres de lISO). Llaboration des Normes internationales est en gnral confie aux comits techniques de lISO. Chaque comit membre intress par une tude a le droit de faire partie du comit technique cr cet effet. Les
9、 organisations internationales, gouvernementales et non gouvernementales, en liaison avec lISO participent galement aux travaux. LISO collabore troitement avec la Commission lectrotechnique internationale (CEI) en ce qui concerne la normalisation lectrotechnique. Les Normes internationales sont rdig
10、es conformment aux rgles donnes dans les Directives ISO/CEI, Partie 2. La tche principale des comits techniques est dlaborer les Normes internationales. Les projets de Normes internationales adopts par les comits techniques sont soumis aux comits membres pour vote. Leur publication comme Normes inte
11、rnationales requiert lapprobation de 75 % au moins des comits membres votants. Lattention est appele sur le fait que certains des lments du prsent document peuvent faire lobjet de droits de proprit intellectuelle ou de droits analogues. LISO ne saurait tre tenue pour responsable de ne pas avoir iden
12、tifi de tels droits de proprit et averti de leur existence. LISO 29822 a t labore par le comit technique ISO/TC 34, Produits alimentaires, sous-comit SC 11, Corps gras dorigines animale et vgtale. NORME INTERNATIONALE ISO 29822:2009(F) ISO 2009 Tous droits rservs 1Corps gras dorigine vgtale Diacylgl
13、ycrols isomriques Dtermination des teneurs relatives en 1,2- et 1,3- diacylglycrols 1 Domaine dapplication La prsente Norme internationale spcifie la dtermination du degr disomrisation des diacylglycrols dans les corps gras dorigine vgtale. Les 1,2-diacylglycrols sont convertis en 1,3-isomres plus s
14、tables durant la conservation ou par catalyse acide. La fraction massique de 1,2-diacylglycrols peut constituer un critre de qualit des corps gras dorigine vgtale. 2 Rfrences normatives Les documents de rfrence suivants sont indispensables pour lapplication du prsent document. Pour les rfrences date
15、s, seule ldition cite sapplique. Pour les rfrences non dates, la dernire dition du document de rfrence sapplique (y compris les ventuels amendements). ISO 661, Corps gras dorigines animale et vgtale Prparation de lchantillon pour essai 3 Termes et dfinitions Pour les besoins du prsent document, les
16、termes et dfinitions suivants sappliquent. 3.1 degr disomrisation fraction massique des aires des pics de tous les 1,2-diacylglycrols (C 32 , C 34 , C 36 ), rapportes la somme des aires des pics de tous les diacylglycrols (C 32 , C 34 , C 36 ) NOTE La fraction massique est exprime en pourcentage une
17、 dcimale. 4 Principe Une colonne de chromatographie miniaturise de gel de silice est utilise afin de sparer les isomres diacylglycrols de la plupart des autres lipides, dans la fraction la plus polaire. Les aires des pics des 1,2- et des 1,3-isomres sont dtermines par chromatographie en phase gazeus
18、e aprs silylation. Seuls les C 32 -, C 34 - et C 36 -diacylglycrols sont pris en compte. ISO 29822:2009(F) 2 ISO 2009 Tous droits rservs5 Ractifs AVERTISSEMENT Lattention est appele sur les rglementations qui spcifient la manipulation de matires dangereuses. Des mesures de scurit dordre technique, o
19、rganisationnel et personnel doivent tre suivies. Au cours de lanalyse, sauf indication contraire, utiliser uniquement des ractifs de qualit analytique reconnue et de leau distille ou dminralise ou de puret quivalente. 5.1 Gel de silice 60 1) , pour chromatographie sur colonne (de 0,063 mm 0,100 mm).
20、 5.1.1 Gel de silice 60, teneur en humidit w H 2 O= 5 %, en fraction massique. Activer le gel de silice en le faisant chauffer toute une nuit (160 5) C. Ensuite, le laisser refroidir dans un dessiccateur et le verser dans un rcipient bouchon rod. Ajouter 5 % deau en fraction massique et agiter jusqu
21、 lobtention dun mlange liquide et sans grumeaux (compter 1 h en agitateur automatique). Laisser reposer le gel de silice ainsi conditionn pendant une nuit avant utilisation. 5.2 Coton, dgraiss. 5.3 Substances de rfrence 2) . 5.3.1 Dilaurine (1,3-dilauroyl-sn-glycrol). 5.3.2 Dipalmitine (1,2- et 1,3-
22、dipalmitoyl-sn-glycrol, mlange disomres, fraction massique w 99 %). 5.3.3 Distarine (1,2- et 1,3-distaroyl-sn-glycrol, mlange disomres, fraction massique w 99 %). 5.3.4 Dioline (1,2- et 1,3-dioloyl-sn-glycrol, mlange disomres, fraction massique w 99 %) 5.4 Solutions de rfrence: Prparer une solution
23、dans le tolune (concentration massique = 1 mg/ml) pour les substances de rfrence dipalmitine et distarine. 5.5 Isooctane (2,2,4-trimthylpentane). 5.6 ther dithylique (luant). 5.7 ther diisopropylique. 5.8 Mlange de solvants: isooctane/ther diisopropylique fraction volumique (isooctane) = 85 ml/100 m
24、l et (ther diisopropylique) = 15 ml/100 ml. 5.9. 1-mthylimidazole. 5.10 N-mthyl-N-(trimthylsilyl)-heptafluorobutyramide (MSHFBA). 5.11 Ractif de silylation: 50 l de 1-mthylimidazole dans 1 ml de MSHFBA. 5.12 Tolune. 1) Merck Art.-N 612-1484 ou 613-2623 (www.merck.de) sont des exemples de produits ap
25、propris disponibles sur le march. Cette information est donne lintention des utilisateurs de la prsente Norme internationale et ne signifie nullement que lISO approuve ou recommande lemploi exclusif des produits ainsi dsigns. Des produits quivalents peuvent tre utiliss sil est dmontr quils conduisen
26、t aux mme rsultats. 2) Sigma-Aldrich () est un exemple de fournisseur appropri. Cette information est donne lintention des utilisateurs de la prsente Norme internationale et ne signifie nullement que lISO approuve ou recommande ce fournisseur. ISO 29822:2009(F) ISO 2009 Tous droits rservs 36 Apparei
27、llage Matriel de laboratoire courant et, en particulier, ce qui suit. 6.1 Balance analytique, pouvant peser 0,001 g prs et pouvant afficher jusqu 0,000 1 g. 6.2 Dessiccateur, servant conserver les adsorbants aprs chauffage. 6.3 Cne de pipette 3) , dune capacit de 5 ml et dune longueur denviron 150 m
28、m. 6.4 Flacon conique, col rod et fond rond, dune capacit de 10 ml. 6.5 Bcher, dune capacit de 10 ml. 6.6 vaporateur rotatif. 6.7 Chromatographe en phase gazeuse colonne capillaire, injecteur diviseur, dtecteur ionisation de flammes (FID) et systme dintgration adapt. Ne pas utiliser de systmes dinje
29、ction en-tte de colonne ou sans division car cela produit lisomrisation des 1,2-diacylglycrols. 6.8 Colonne capillaire de silice fondue, pour chromatographie en phase gazeuse (dun diamtre interne de 0,25 mm ou 0,32 m, dune longueur de 12 m, 15 m, 30 m ou 60 m) revtue dun film dune paisseur de 0,1 m,
30、 constitu de 5 % de diphnyl- et de 95 % de dimthylpolysiloxane. Il est possible dutiliser dautres colonnes de polarit et de slectivit similaires. 7 chantillon 7.1 chantillonnage Lchantillonnage ne fait pas partie de la mthode spcifie dans la prsente Norme internationale. Une mthode dchantillonnage r
31、ecommande est donne dans lISO 5555 1 . Il est important que le laboratoire reoive un chantillon rellement reprsentatif, qui na pas t endommag ou modifi au cours du transport ou du stockage. 7.2 Prparation de lchantillon pour essai Prparer lchantillon pour essai conformment lISO 661. 8 Mode opratoire
32、 8.1 Prparation de la colonne de chromatographie de gel de silice Dans la partie infrieure dun cne de pipette (6.3), introduire un petit bouchon de coton (5.2) denviron 5 mm de haut puis 1 g de gel de silice 60 (5.1). Recouvrir la couche de silice par un bouchon de coton de 5 mm de haut. Comprimer l
33、e remplissage en exerant une lgre pression avec une tige bout plat. 3) VWR/Merck Art.-N 1.15101.1000 (www.merck.de) est un exemple de produit appropri disponible sur le march. Cette information est donne lintention des utilisateurs de la prsente Norme internationale et ne signifie nullement que lISO
34、 approuve ou recommande lemploi exclusif du produit ainsi dsign. Des produits quivalents peuvent tre utiliss sil est dmontr quils conduisent aux mme rsultats. ISO 29822:2009(F) 4 ISO 2009 Tous droits rservs8.2 Sparation de la fraction des lipides non polaires 8.2.1 Dans un bcher (6.5), peser, 0,1 mg
35、 prs, environ 100,0 mg de lchantillon pour essai et ajouter 1 ml de tolune (5.12). 8.2.2 Transvaser la prise dessai dans la colonne en rinant soigneusement le rcipient avec 1 ml de mlange de solvants (5.8). Rincer la colonne avec deux volumes de 3,5 ml du mlange de solvants (5.8). Rincer lextrmit du
36、 cne de pipette avec le mlange de solvants (5.8) puis jeter le solvant. 8.2.3 luer les diacylglycrols avec deux volumes de 3,5 ml dther dithylique (5.6) et recueillir lluat dans un flacon fond conique (6.4). 8.2.4 Dans un vaporateur rotatif (6.6) rgl 20 C, liminer le solvant de lluat jusqu obtenir e
37、nviron 1 ml de liquide. Transvaser la solution restante dans un flacon de raction. vaporer le solvant du flacon sous courant dazote. 8.3 Prparation des thers trimthyl-silyl (silylation) 8.3.1 Verser 200 l du ractif de silylation (5.11) dans le flacon de raction renfermant les diacylglycrols, fermer
38、hermtiquement et laisser reposer le mlange pendant 20 min temprature ambiante. 8.3.2 Aprs la silylation, ajouter 1 ml dactone au mlange et utiliser 1 l 2 l de la solution ainsi obtenue pour la chromatographie en phase gazeuse. 8.4 Chromatographie en phase gazeuse Les conditions indiques dans le Tabl
39、eau 1 pour le chromatographe en phase gazeuse ont conduit lobtention de chromatogrammes satisfaisants. Tableau 1 Conditions pour la chromatographie en phase gazeuse Fonction Condition Colonne capillaire GC Restek RTX5 4) , 60 m, diamtre interne de 0,25 mm, paisseur de film de 0,1 m Volume dinjection
40、 1 l (division 1:50) Gaz vecteur Hydrogne avec un dbit constant 2 ml/min Gaz pour FID Hydrogne 33 ml/min et air 420 ml/min Temprature de linjecteur 340 C Temprature du dtecteur 340 C Temprature du four 240 C, isotherme pendant 1 min, puis 10 C/min jusqu 320 C, isotherme pendant 10 min Optimiser la p
41、rogrammation de la temprature et la vitesse de dbit du gaz vecteur afin dobtenir des chromatogrammes similaires celui prsent la Figure A.1. Effectuer un essai de sparation avec des fractions silyles de diacylglycrols. 4) Exemple de produit appropri disponible sur le march. Cette information est donn
42、e lintention des utilisateurs de la prsente Norme internationale et ne signifie nullement que lISO approuve ou recommande lemploi exclusif du produit ainsi dsign. Des produits quivalents peuvent tre utiliss sil est dmontr quils conduisent aux mmes rsultats. ISO 29822:2009(F) ISO 2009 Tous droits rse
43、rvs 58.5 Identification des isomres diacylglycrols Prparer une solution de dipalmitine (1,2-C 32 ,1,3-C 32 ) (5.3.2), de distarine (1,2-C 36 , 1,3-C 36 ) (5.3.3) et de dioline (1,2-C 36 , 1,3-C 36 ) (5.3.4) dans du tolune, chacune une concentration massique = 1 mg/ml. Verser 100 l de cette solution
44、dans un flacon de drivatisation. vaporer le solvant prsent dans le flacon de raction avec un courant dazote et procder la silylation. Ne pas ajouter dactone dans les solutions de rfrence. 9 Rsultat de la dtermination 9.1 Identification des diacylglycrols Pour identifier les 1,2- et les 1,3-diacylgly
45、crols dans la prise dessai, dterminer les temps de rtention des produits de rfrence. NOTE Les temps de rtention des diacylglycrols peuvent lgrement varier si les acides gras quils contiennent sont saturs ou insaturs. Dans le cadre de cette mthode, il est admis que les coefficients de rponse de tous
46、les diacylglycrols sont identiques. 9.2 Dtermination des aires des pics des 1,2- et 1,3-diacylglycrols contenus dans lhuile Calculer la fraction massique en pourcentage, w 1,2 , des 1,2-diacylglycrols de la faon suivante: 1, 2 1, 2 100 A w A = o A 1,2est laire de pic de lensemble des 1,2-diacylglycr
47、ols (C 32 , C 34 , C 36 ) contenus dans la prise dessai; A est la somme des aires des pics de chacun des 1,2- et 1,3-diacylglycrols (C 32 , C 34 , C 36 ). Exprimer le rsultat une dcimale prs. 10 Fidlit de la mthode 10.1 Essai interlaboratoires Les dtails relatifs lessai et la fidlit de la mthode sont rsums dans lAnnexe B. Les valeurs obtenues lors de cet essai interlaboratoires peuvent ne pas tre applicables des plage
