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    ISO 2913-1975 Wool Colorimetric determination of cystine plus cysteine in hydrolysates《羊毛 在水解产物中胱氨酸加半胱氨酸含量的比色法测定》.pdf

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    ISO 2913-1975 Wool Colorimetric determination of cystine plus cysteine in hydrolysates《羊毛 在水解产物中胱氨酸加半胱氨酸含量的比色法测定》.pdf

    1、NORME INTERNATIONALE INTERNATIONAL ORGANIZATION FOR STANDARDIZATION 4vlEXYHAPOAHAR OPI-AHM3AI-0454 l-I0 CTAHAAPTM3ALW4 *ORGANISATION INTERNATIONALE DE NORMALISATION Laine - Dtermination calorimtrique de la cystine et de la cystine dans les hydrolysats Wool - Colorime trie de termina tion of cystine

    2、plus c ys teine in h ydrolysa tes Premire dition - 1975-05-15 c - c- c4 In I m Fi % Rf. no : ISO 2913-1975 (F) CDU 677.31 : 677.01 Descripteurs : textile, laine, analyse chimique, dosage, acide amin, cystine, mthode calorimtrique, cystine Prix bas sur 4 pages AVANT-PROPOS LISO (Organisation Internat

    3、ionale de Normalisation) est une fdration mondiale dorganismes nationaux de normalisation (Comits Membres 60). Llaboration de Normes Internationales est confie aux Comits Techniques ISO. Chaque Comit Membre intress par une tude a le droit de faire partie du Comit Technique correspondant. Les organis

    4、ations internationales, gouvernementales et non gouvernementales, en liaison avec IISO, participent galement aux travaux. Les Projets de Normes Internationales adopts par les Comits Techniques sont soumis aux Comits Membres pour approbation, avant leur acceptation comme Normes Internationales par le

    5、 Conseil de IISO. La Norme Internationale ISO 2913 a t tablie par le Comit Technique ISO/TC 38, Textjles, et soumise aux Comits Membres en novembre 1972. Elle a t approuve par les Comits Membres des pays suivants : Afrique du Sud, Rp. d Allemagne Australie Belgique Brsil Bulgarie Canada Danemark gyp

    6、te, Rp. arabe d Finlande Hongrie Inde Iran Isral Japon Norvge Pays-Bas Pologne Portugal Roumanie Royaume-Uni Sude Suisse Tchcoslovaquie Thalande Turquie U.S.A. Le Comit Membre du pays suivant a dsapprouv le document pour des raisons techniques : France 0 Organisation Internationale de Normalisation,

    7、 1975 l Imprim en Suisse NORME INTERNATIONALE KO 2913-1975 (F) Laine - Dtermination calorimtrique de la cystine et de la cystine dans les hydrolysats 0 INTRODUCTION La cystine est lacide amin le plus important de la laine. tant trs ractif, son groupe disulfure est attaqu par de nombreux agents utili

    8、ss dans le processus industriel lainier. Tandis que les traitements acides naffectent que trs lgrement la cystine, les agents alcalins, oxydants et rducteurs, la vapeur deau, la lumire et la chaleur, la dtruisent plus ou moins. Laltration de la fibre tant souvent accompagne dune diminution de la ten

    9、eur en cystine, une mthode analytique pour sa dtermination sest avre ncessaire afin de contrler et de diagnostiquer la dgradation provoque par certains agents. La prsente mthode est fonde sur celle de Folin-Shinohara pour lestimation de la cystine dans les hydrolysats acides de protines, mais il est

    10、 noter que la teneur en cystine de la laine initiale nest pas ncessairement la mme que celle de son hydrolysat acide. La mthode est dutilisation simple, demande peu dappareillage spcial et convient bien pour un emploi dans des laboratoires industriels. La mthode consiste rduire la liaison disulfure

    11、de la cystine par du disulfite de sodium et estimer par calorimtrie la cystine forme au moyen dacide dodcatungstophosphorique. La laine vierge contient une faible quantit de cystine, laquelle est incluse dans la teneur cystine plus cystinek 1 OBJET ET DOl.!lAINE DAPPLICATION La prsente Norme Interna

    12、tionale spcifie une mthode de dtermination calorimtrique de la cystine et de la cystine dans les hydrolysats de laine. La mthode est applicable la laine, sous toutes ses formes, cest-dire laine en bourre, ruban, mche, fil ou toffe. Lorsquil sagit de matire teinte, les colorants peuvent interfrer dan

    13、s le mesurage calorimtrique. La mthode nest pas applicable la laine oxyde ou la laine rduite, car les nouvelles fonctions engendres dans ces laines peuvent produire des ractions secondaires lors de lhydrolyse, et conduire ainsi des rsultats errons. Cest la raison pour laquelle la prsente mthode est

    14、principalement applicable la dtermination de la somme cystine plus cystine dans les hydrolysats de laine lave, de ruban peign, de mche peigne, de fil ou dtoffe qui nont pas subi de traitement doxydation ou de rduction. Les composs qui forment des complexes mtalliques, tels que IEDTA et Ianion cyanur

    15、e, ne doivent pas tre prsents dans la laine, la raction tant catalyse par le cuivre. 2 PRINCIPE Hydrolyse de la laine par de lacide sulfurique dilu. Raction de Ihydrolysat tamponn avec lacide dodcatungstophosphorique, en prsence de disulfite de sodium avec dveloppement dune coloration bleue dont lin

    16、tensit est proportionnelle la concentration en cystine et en cystine de Ihydrolysat. Mesurage calorimtrique de la densit optique de la solution bleue et calcul de la somme wystine plus cystinek NITE - Lessai qualitatif suivant, applicable la laine non teinte ou un hydrolysat de laine (dans le cas du

    17、ne laine teinte, Ihydrolysat seul doit tre utilis), peut tre employ pour se rendre compte si la laine essayer a une teneur en cystine significativement suprieure la normale. a) Laine (non teinte) : Immerger lchantillon dans une solution 1 % de pentacyanonitrosylferrate de sodium jusqu mouillage comp

    18、let, le retirer, le scher entre des feuilles de papier filtre, et lexposer des vapeurs dammoniac. Une coloration rouge-violet indique la prsence de cystine. b) Hydrolysat : Ajouter, 2 OU 3 ml dhydrolysat plac dans un tube essais, 2 ou 3 gouttes dune solution de pentacyanonitrosylferrate de sodium, e

    19、t rendre la solution alcaline par de lammoniaque concentre. Lapparition immdiate dune coloration rouge-violet indique la prsence de cysti ne. 3 RACTIFS Au cours de lanalyse, nutiliser que des ractifs de qualit analytique reconnue, et que de leau distille ou de leau de puret quivalente. 3.1 Acide sul

    20、furique, solution 6 N environ. Ajouter 150 ml dacide sulfurique concentr, p 1,84 g/ml, solution 95 98 % (mlm), 850 ml deau. 3.2 Tampon actate, solution pH 5,6. Dissoudre 300 g dactate de sodium (dihydrat), 24 ml dacide actique cristallisable et 1 mg de sulfate de cuivre(ll) (pentahydrat) dans de lea

    21、u, et diluer 1 1. 1 KO 2913-1975 (F) 3.3 Ractif acide tungstophosphorique Dissoudre 200 g de tungstate de sodium (dihydrat et exempt de molybdne) dans 400 ml deau, puis ajouter 100 ml dacide phosphorique 85 % et faire bouillir modrment, sous rfrigrant reflux, durant 1 h. Enlever le rfrigrant, ajoute

    22、r du brome ou de leau de brome, goutte goutte, jusqu ce quune coloration jaune brun soit obtenue. liminer lexcs de brome par bullition (15 min environ). Refroidir, filtrer dans une fiole jauge de 1 1, et complter au volume par de leau. Conserver le filtrat jaune-brun dans un flacon en verre brun. 3.

    23、4 Disulfite de sodium, solution Dissoudre 10 g de disulfite de sodium dans de leau, diluer 100 ml, et conserver lobscurit. Ne pas conserver le ractif plus de 20 jours. 3.5 Cystine, solution talon. Dissoudre 100 mg de cystine dans 20 ml dacide sulfurique (3.1) dans une fiole jauge de 250 ml, et compl

    24、ter au volume par de leau. NOTE - La cystine doit tre sche dans un dessiccateur sur du chlorure de calcium, le dessiccateur tant conserv lobscurit. 4 APPAREILLAGE 4.1 Balance analytique, prcise 0,2 mg. 4.2 Vases peser, avec couvercles rods en verre. 4.3 tuve ventile, pour le schage et lhydrolyse des

    25、 prises dessai, 105 + 2 “C. 4.4 Dessiccateur. 4.5 Fioles jauges, de capacits 100 ml et 25 ml, de grande prcision (conformes, par exemple, IISO/R 1042, classe A ou B). 4.6 Pipettes, de capacits 15 ml, 10 ml, 5 ml, 2 ml et 1 ml. Les pipettes de 1 ml et de 5 ml, utilises pour les prises dessai de Ihydr

    26、olysat et de la solution talon de cystine, doivent tre de la plus haute prcision possible (conformes, par exemple, IISO/R 648, classe A). 4.7 Fioles coniques, de capacit approprie, et agitateurs en verre. 4.8 Bchers, filtre en verre fritt ou entonnoirs avec papier filtre, pour analyse quantitative.

    27、4.9 Spectrophotomtre, ou photomtre filtres muni dun filtre dabsorption maximale 720 nm ou plus. (Nimporte quel appareil convient, condition que la densit optique, dans lintervalle 0 0,7, puisse tre lue O,Ol, et estime la dcimale la plus proche.) 5 CHANTILLONNAGE ET PRPARATION DES PRISES DESSAI Prlev

    28、er un chantillon reprsentatif de lensemble, et suffisant pour fournir les prises dessai suivantes : - deux prises dessai, chacune de masse 1 g environ, pour la dtermination de la masse dshydrate; - deux prises dessai, chacune de masse 0,3 g environ, pour la prparation des hydrolysats. liminer toutes

    29、 les impurets vgtales et autres substances trangres de la laine en bourre. Rduire ltat de fil de courte longueur (1 cm environ) les chantillons de fil ou dtoffe. Les matires feutres, qui ne peuvent tre rduites ltat de fil, doivent tre coupes en petits morceaux. Extraire lchantillon, par du dichlorom

    30、thane, durant 1 h, dans un extracteur de Soxhlet, la vitesse minimale de 6 cycles lheure, et laisser vaporer le dichloromthane de lchantillon. 6 MODE OPRATOIRE 6.1 Pesage des prises dessai Peser successivement, avec une prcision de 0,000 2 g, chacune des prises dessai prvues au chapitre 5. Utiliser

    31、les deux prises dessai (chacune de masse 1 g) pour la dtermination de la masse dshydrate (voir 6.2) et les deux prises dessai (chacune de masse 0,3 g) pour la prparation des hydrolysats pour essai en double (voir 6.3). 6.2 Dtermination de la masse dshydrate Placer chaque prise dessai dans un vase pe

    32、ser (4.2), et la scher dans ltuve (4.3) 105 + 2 “C. Fermer le vase peser, le laisser refroidir dans le dessiccateur (4.4), le retirer et le peser. Rpter ces oprations de schage et de pesage jusqu masse constante -I 1. Enlever les prises dessai, peser les vases peser et dterminer alors la masse dshyd

    33、rate des prises dessai. Calculer proportionnellement la masse dshydrate des prises dessai destines la prparation des hydrolysats. 6.3 Hydrolyse Transfrer une prise dessai de 0,3 g dans une fiole conique (4.7) de 100 ml, ajouter 8 ml dacide sulfurique (3.1), et placer la fiole Erlenmeyer dans ltuve 1

    34、05 + 2 “C. Agiter la fiole aprs 0,5 - 1 - 1,5 - 2 et 2,5 h. Aprs 10 h, retirer la fiole de ltuve, la laisser refroidir la temprature 1) La masse constante est atteinte quand la masse dune prise dessai, aprs un nouveau schage en tuve durant 30 min au moins, ne varie pas de plus de 0,000 2 g. 2 ISO 29

    35、13-1975 (F) ambiante, transfrer quantitativement dans une fiole jauge (4.5) de 100 ml, complter 100 ml par de leau distille, et agiter nergiquement. Filtrer 50 ml au moins de Ihydrolysat ainsi prpar au travers dun filtre en verre fritt sec ou au travers dun papier filtre sec (4.8). 6.4 Mesurage des

    36、densits optiques 6.4.1 Gnralits Tous les mesurages de densit optique doivent tre effectus une longueur donde comprise entre 720 et 890 nm, en utilisant, de prfrence, des cuves de 10 mm de parcours optique. Si lon emploie une cuve de parcours optique diffrent, les rsultats des mesurages doivent tre c

    37、orrigs en consquence car, dans les instructions et calculs qui suivent, il a t tenu compte dune cuve de 10 mm de parcours optique. La valeur de la densit optique doit tre infrieure 0,70. Dans le cas contraire, il faut employer une cuve de parcours optique infrieur ou une quantit plus faible dhydroly

    38、sat. 6.4.2 Solution de rfrence Pour tous les mesurages de densit optique, employer de leau distille comme solution de rfrence. 6.4.3 Cystine et rducteurs trangers Transfrer 5 ml dhydrolysat (6.3) dans une fiole jauge (4.5) de 25 ml, ajouter 15 ml de solution tampon (3.2), puis 2 ml de ractif acide t

    39、ungstophosphorique (3.3). Homogniser et laisser reposer durant 20 30 min. Complter au volume par de leau distille, homogniser et mesurer la densit optique. Diviser la valeur obtenue par 5, et la dsigner par A. 6.4.4 Cystine, cystine (2 fois) et rducteurs trangers Transfrer 1 ml dhydrolysat (6.3) dan

    40、s une fiole jauge (4.5) de 25 ml ajouter 5 ml de solution tampon (3.2), puis 1 ml de solution de disulfite de sodium (3.4) et 2 ml de ractif acide tungstophosphorique (3.3). Homogniser et laisser reposer durant 20 30 min. Complter au volume par de leau distille, homogniser et mesurer la densit optiq

    41、ue. Effectuer deux dterminations, et dsigner la valeur moyenne par B. 6.4.5 talonnage Pour ltalonnage du colorimtre, prparer une solution, comme il est spcifi en 6.4.4, mais en utilisant 1 ml de la solution talon de cystine (3.5) la place de Ihydrolysat. Effectuer deux dterminations, et dsigner la v

    42、aleur moyenne de la densit optique par C. Cette valeur C doit tre comprise entre 0,56 et 0,70. 7 EXPRESSION DES RSULTATS Calculer le pourcentage, S, cystine plus cystine, daprs la formule S= 100 (B-A) 25xCxm o m est la masse dshydrate de la prise dessai. 8 CONTRLE II est recommand que chaque srie de

    43、ssais soit contrle au moyen dun chantillon tmoin, dont la teneur en (cystine plus cystine est connue. Un chantillon de fil de laine peigne non teint est conseill cet effet. 9 PROCS-VERBAL DESSAI indiquer, dans le procs-verbal dessai a) le rsultat obtenu; b) les rsultats individuels; c) la rfrence de

    44、 la prsente Norme Internationale; d) toutes modifications apportes au mode opratoire, notamment lorsquil na pas t possible de le respecter, par insuffisance dchantillon par exemple; e) tous dtails opratoires non prvus dans la prsente Norme Internationale, mais susceptibles davoir eu une influence su

    45、r les rsultats. 3 ISO 29134975 (F) BIBLIOGRAPHIE Il PI PI 141 FI FI FI PI PI 101 Ill 121 FI WI 151 FOLIN AND LOONEY, J. B;ol. Chemistry, 1922,51,421. FOLIN AND MARENZI, J. Biol. Chemistry, 1929,83, 103. FO L I N, J. Biol. Chemistry, 1934, 106,311. LUGG, Biochem. J., 1932,26, 2144, 2160. LU G G, Bioc

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