1、 Numro de rfrence ISO 23611-3:2007(F) ISO 2007NORME INTERNATIONALE ISO 23611-3 Premire dition 2007-05-01 Qualit du sol Prlvement des invertbrs du sol Partie 3: Prlvement et extraction des enchytrides Soil quality Sampling of soil invertebrates Part 3: Sampling and soil extraction of enchytraeids ISO
2、 23611-3:2007(F) PDF Exonration de responsabilit Le prsent fichier PDF peut contenir des polices de caractres intgres. Conformment aux conditions de licence dAdobe, ce fichier peut tre imprim ou visualis, mais ne doit pas tre modifi moins que lordinateur employ cet effet ne bnficie dune licence auto
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7、e Case postale 56 CH-1211 Geneva 20 Tel. + 41 22 749 01 11 Fax. + 41 22 749 09 47 E-mail copyrightiso.org Web www.iso.org Publi en Suisse ii ISO 2007 Tous droits rservsISO 23611-3:2007(F) ISO 2007 Tous droits rservs iii Sommaire Page Avant-propos. iv Introduction v 1 Domaine dapplication 1 2 Termes
8、et dfinitions 1 3 Principe 2 4 Ractifs 2 5 Appareillage 2 6 Mode opratoire 3 6.1 chantillonnage du sol. 3 6.2 Extraction des enchytrides 3 6.3 Identification au microscope . 4 6.4 Conservation des Enchytraeidae 5 6.5 Validit du procd dextraction . 5 6.6 Dtermination de la biomasse. 5 7 valuation des
9、 donnes. 5 8 Rapport dessai . 6 Annexe A (informative) Identification des espces chez les enchytrides 7 Annexe B (informative) Extraction rapide des enchytrides . 8 Bibliographie 10 ISO 23611-3:2007(F) iv ISO 2007 Tous droits rservsAvant-propos LISO (Organisation internationale de normalisation) est
10、 une fdration mondiale dorganismes nationaux de normalisation (comits membres de lISO). Llaboration des Normes internationales est en gnral confie aux comits techniques de lISO. Chaque comit membre intress par une tude a le droit de faire partie du comit technique cr cet effet. Les organisations int
11、ernationales, gouvernementales et non gouvernementales, en liaison avec lISO participent galement aux travaux. LISO collabore troitement avec la Commission lectrotechnique internationale (CEI) en ce qui concerne la normalisation lectrotechnique. Les Normes internationales sont rdiges conformment aux
12、 rgles donnes dans les Directives ISO/CEI, Partie 2. La tche principale des comits techniques est dlaborer les Normes internationales. Les projets de Normes internationales adopts par les comits techniques sont soumis aux comits membres pour vote. Leur publication comme Normes internationales requie
13、rt lapprobation de 75 % au moins des comits membres votants. Lattention est appele sur le fait que certains des lments du prsent document peuvent faire lobjet de droits de proprit intellectuelle ou de droits analogues. LISO ne saurait tre tenue pour responsable de ne pas avoir identifi de tels droit
14、s de proprit et averti de leur existence. LISO 23611-3 a t labore par le comit technique ISO/TC 190, Qualit du sol, sous-comit SC 4, Mthodes biologiques. LISO 23611 comprend les parties suivantes, prsentes sous le titre gnral Qualit du sol Prlvement des invertbrs du sol: Partie 1: Tri manuel et extr
15、action au formol des vers de terre Partie 2: Prlvement et extraction des micro-arthropodes (Collembola et Acarina) Partie 3: Prlvement et extraction des enchytrides Partie 4: Collection, extraction et identification des nmatodes du sol ISO 23611-3:2007(F) ISO 2007 Tous droits rservs v Introduction L
16、a prsente partie de lISO 23611 a t rdige pour rpondre un besoin grandissant en matire de normalisation des mthodes danalyse sur le terrain de la zoologie. De telles mthodes, traitant principalement du prlvement, de lextraction et de la manipulation des invertbrs du sol, sont ncessaires pour les diff
17、rentes applications suivantes: la classification biologique des sols, y compris lvaluation de la qualit des sols (par exemple Rfrences 21, 25, 27); la bio-indication terrestre et la surveillance long terme (par exemple Rfrences 13, 26); lvaluation des effets des substances chimiques vis-vis des anim
18、aux du sol (Rfrences 15, 22). tant donn quelles peuvent tre la base de dcisions importantes (par exemple, entreprendre ou non la dpollution dun site particulier), les donnes pour ces applications devront tre obtenues laide de mthodes normalises. En fait, labsence de telles mthodes normalises est lun
19、e des principales raisons pour lesquelles les concepts de classification biologique ont t relativement rarement utiliss, jusqu prsent, dans des habitats terrestres (comme le sol) par rapport aux sites aquatiques. lorigine, les mthodes dcrites ici ont t dveloppes pour des tudes taxonomiques ou cologi
20、ques, visant lucider le rle des enchytrides dans diffrents cosystmes terrestres. Ces animaux font indubitablement partie des invertbrs du sol les plus importants dans les rgions tempres (principalement dans les sols acides 5 ). Leur influence sur les fonctions du sol, comme la dcomposition de la lit
21、ire et le cycle des lments nutritifs, est bien connue 14, 19 . En raison de leur nombre qui est souvent trs lev (et de la biomasse de leur population) ils jouent galement un rle majeur dans un grand nombre de rseaux trophiques terrestres 4 . Certaines espces ont t involontairement dissmines par lhom
22、me dans les sols du monde entier. tant donn quil nest ni possible, ni utile de normaliser des mthodes pour tous les organismes du sol, seuls les plus importants ont t slectionns Les paramtres microbiologiques ont dj t traits dans des guides ISO existants (par exemple, lISO 10381-6 29 , lISO 14240-1
23、37et lISO 14240-2 38 ). NORME INTERNATIONALE ISO 23611-3:2007(F) ISO 2007 Tous droits rservs 1 Qualit du sol Prlvement des invertbrs du sol Partie 3: Prlvement et extraction des enchytrides 1 Domaine dapplication La prsente partie de lISO 23611 spcifie une mthode pour le prlvement, la manipulation e
24、t lextraction des enchytrides du sol prlevs sur le terrain comme pr-requis lutilisation de ces animaux en tant que bio-indicateurs (par exemple, pour valuer la qualit dun sol en tant quhabitat pour ces organismes). Il est possible de trouver des informations de base sur lcologie des enchytrides et l
25、eur utilisation en tant que bio-indicateurs dans lenvironnement terrestre dans la bibliographie. La prsente partie de lISO 23611 sapplique tous les biotopes terrestres dans lesquels il est possible de trouver des enchytrides. La stratgie dchantillonnage gnrique pour les tudes de terrain est spcifie
26、dans lISO 10381-1. Ces dtails peuvent varier en fonction des conditions climatiques/rgionales du site sur lequel lchantillon doit tre prlev et un aperu de la dtermination des effets des polluants sur les enchytrides in situ est fourni la Rfrence 6. Les mthodes pour quelques autres groupes dorganisme
27、s du sol comme les vers de terre ou les microarthropodes sont spcifies dans lISO 23611-1 et lISO 23611-2. La prsente partie de lISO 23611 nest pas applicable des sols semi-terrestres (habitat aquatique ou proximit) et peut tre dutilisation difficile dans des conditions climatiques ou gographiques ex
28、trmes (en haute montagne, par exemple). Il est vivement recommandable de caractriser le site en cas dchantillonnage des invertbrs du sol (par exemple du point de vue du climat et de lusage du sol). Cependant, cette caractrisation nest pas traite dans la prsente partie de lISO 23611. LISO 10390, lISO
29、 10694, lISO 11272, lISO 11274, lISO 11277, lISO 11461 et lISO 11465 sont plus appropris pour le mesurage du pH, de la distribution granulomtrique, du rapport C/N, de la teneur en carbone organique et de la capacit de rtention deau. 2 Termes et dfinitions Pour les besoins du prsent document, les ter
30、mes et dfinitions suivants sappliquent. 3.1 enchytrides petits vers vivant dans le sol (de quelques millimtres plusieurs centimtres de longueur) appartenant la famille des Enchytraeidae, ordre des Oligochaeta (classe Clitellata, phylum Annelida) EXEMPLE Les espces des genres Enchytraeus, Fridericia
31、ou Cognettia. ISO 23611-3:2007(F) 2 ISO 2007 Tous droits rservs3 Principe Sur un site donn, les enchytrides sont prlevs dans le sol au moyen dun carottier stratifi (de diamtre gnralement compris entre 3 cm et 6 cm). Aprs le prlvement, les chantillons de sol contenant les enchytrides sont transports
32、au laboratoire. Ensuite, les enchytrides sont extraits du sol par une mthode dextraction humide. Ce protocole est connu de longue date 11, 17, 20 . Aprs lextraction les enchytrides sont identifis vivants et, si ncessaire, conservs de manire a pouvoir tre stocks indfiniment dans une collection (par e
33、xemple, des fins taxonomiques). La dtermination de la biomasse des enchytrides est galement dcrite dans la prsente partie de lISO 23611. Les valeurs dabondance et de biomasse sont recalcules et rapportes la surface du carottier ou, plus rarement, des paramtres lis au volume. NOTE 1 Le prlvement denc
34、hytrides est souvent inclus dans des programmes de surveillance plus vastes visant couvrir la totalit ou une partie de la faune du sol (par exemple, la msofaune). La conception de tels programmes nest pas comprise dans la prsente partie de lISO 23611 (mais voir, par exemple, la Rfrence 3). NOTE 2 Qu
35、elques indications sur la taxinomie des enchytrides sont fournies dans lAnnexe A. 4 Ractifs 4.1 Eau du robinet (dpourvue de proprits toxiques, par exemple, en raison dune contamination par le cuivre). 4.2 thanol, 70 % (fraction volumique). 4.3 Rose de Bengale, 4,5,6,7-ttrachloro-2,4,5,7-ttraiodofluo
36、rescine formule comme un colorant. 4.4 Fixateur de Bouin, solution tamponne de formaldhyde, dacide actique et dacide picrique. 4.5 Paracarmin, colorant prpar sous forme de mlange dacide carminique, de chlorure daluminium et de chlorure de calcium dissous dans lthanol. 4.6 Baume du Canada, fluide nat
37、urel visqueux et jauntre contenant de 13 % 14 % (fraction volumique) de Canadine acide (C 20 H 38 O 2 ), de 48 % 50 % (fraction volumique) de - et -Canadinol acide (C 19 H 30 O 2 ) et 5 % (fraction volumique) de Canadsen (C 21 H 40 O). 5 Appareillage 5.1 Carottier stratifi pour prlvement de sol (aya
38、nt un diamtre compris entre 3 cm et 6 cm, par exemple; longueur de carotte extraite: de 10 cm 30 cm); de longueur totale variable (selon quil est muni dune poigne ou non). 5.2 Sachets en plastique (par exemple, sachets pour conglation de 1 l); du commerce. 5.3 Enregistreur de temprature ou thermomtr
39、e minimum/maximum. 5.4 Bols en plastique, diamtre: 20 cm environ, hauteur: 10 cm environ; du commerce. 5.5 Tamis en plastique, diamtre: 15 cm environ, ouverture de mailles: 0,5 mm approximativement; du commerce. 5.6 Ampoules de 60 W, en tant qulment chauffant; du commerce. 5.7 Verrerie, botes de Pet
40、ri, par exemple (de format carr) de 8 cm 8 cm ou petits rcipients en verre (de 50 ml, par exemple). ISO 23611-3:2007(F) ISO 2007 Tous droits rservs 3 5.8 Couteau, afft et de grande taille. 5.9 Rfrigrateur. 5.10 Microscope dissection, faible grossissement (de 10 40 fois). 5.11 Microscope, grossisseme
41、nt lev (de 60 400 fois). 5.12 Pinces ressort en acier (plates). 5.13 Pipette Eppendorf, pince en acier doux ou aiguille crochet. 6 Mode opratoire 6.1 chantillonnage du sol Les chantillons de sol utiliser pour tudier la communaut des enchytrides sont prlevs de manire destructive au moyen dun carottie
42、r pour sol (5.1). On presse le carottier avec soin contre le sol pour ly faire pntrer. La profondeur de pntration est fonction du type de sol mais, en rgle gnrale, elle est comprise entre 10 cm (par exemple, en fort) et 30 cm (dans les zones cultives, par exemple), ce qui correspond aux couches dans
43、 lesquelles vit la majorit des enchytrides. Dans de rares cas, par exemple si le sol comporte de grosses racines, il est possible dutiliser un marteau en plastique ou en bois pour prlever les chantillons. Aprs le retrait du carottier hors du sol, celui-ci est ouvert et lon recueille la main la carot
44、te de sol avec prcaution. Ensuite, laide dun couteau (5.8), on divise la carotte en deux cylindres (par exemple, de 3 cm 4 cm de hauteur). Ces deux cylindres de sol peuvent tre conservs au rfrigrateur (5.9) dans de petits sachets en plastique (5.2), une temprature comprise entre 4 C et 6 C approxima
45、tivement, pendant une priode ne dpassant pas une deux semaines, de prfrence (dans tous les cas, il convient que la dure de stockage nexcde pas un mois 7 ). Pour finir, le carottier est lav leau. 6.2 Extraction des enchytrides En principe, lextraction des vers hors du sol est engendre par les mouveme
46、nts actifs de ceux-ci dans lchantillon satur en eau. Il convient de commencer lextraction ds que possible aprs lchantillonnage (voir 6.1). Les bols (5.4) sont remplis deau du robinet (4.1) avec prcaution jusqu ce que les tamis vides (5.5) soient compltement recouverts deau. Les chantillons (cest-dir
47、e les cylindres de sol) sont dposs dans les tamis et sont, si ncessaire (par exemple, dans le cas de sols argileux) casss la main avec soin (voir Figure 1). Il convient que le fond des tamis natteigne pas le fond des bols. Pour garantir une efficacit dextraction des Enchytraeidae hors des chantillons de plus de 90 %, il convient que lextraction du sol se prolonge pendant une dure de 4 d 7 d et que lextraction de la liti
