1、NORMEINTERNATIONALE INTERNATIONAL ORGANIZATION FOR STANDARDIZATION 0x11 ih,-4210.H411 OPI 4H1134L1115l rl() CT4APT1134Ull2*ORGANISATION INTERNATIONALE DE NORMALISATION Lgumineuses - Dosage des htrosides cyanogntiques Pulses - De termina tion of glycosidic h ydrocyanic acid Premire dition - 1975-09-1
2、5 CDU 635.6 : 543.8 : 546.267 Rf. no : ISO 2164-1975 (F) Descripteurs : lgumineuse en grain, analyse chimique, dosage, acide cyanhydrique, mthode volumtrique. Prix bas sur 4 pages AVANT-PROPOS LISO (Organisation Internationale de Normalisation) est une fdration mondiale dorganismes nationaux de norm
3、alisation (Comits Membres ISO). Llaboration de Normes Internationales est confie aux Comits Techniques ISO. Chaque Comit Membre intress par une tude a le droit de faire partie du Comit Technique correspondant. Les organisations internationales, gouvernementales et non gouvernementales, en liaison av
4、ec IISO, participent galement aux travaux. Les Projets de Normes Internationales adopts par les Comits Techniques sont soumis aux Comits Membres pour approbation, avant leur acceptation comme Normes Internationales par le Conseil de IISO. La Norme Internationale ISO 2164 a t tablie par le Comit Tech
5、nique lSO/TC 34, Produits agricoles alimentaires, et soumise aux Comits Membres en avril 1974. Elle a t approuve par les Comits Membres des pays suivants : Afrique du Sud, Rp. d Espagne Portugal Allemagne France Roumanie Australie Hongrie Royaume-Uni Au triche Inde Tchcoslovaquie Bulgarie Iran Turqu
6、ie Canada Isral Yougoslavie Chili Pologne Aucun Comit Membre na dsapprouv le document. 0 Organisation Internationale de Normalisation, 1975 l Imprim6 en Suisse - NORME INTERNATIONALE ISO 21644975 (F) Lgumineuses - Dosage des htrosides cyanogntiques 1 OBJET ET DOMAINE DAPPLICATION La prsente Norme In
7、ternationale spcifie une mthode de dosage des htrosides cyanogntiques dans les lgumineuses. La mthode est dapplication gnrale, mais il peut tre ncessaire de la modifier lorsque des sulfures ou certains composs sulfurs sont prsents. En leur absence, il est possible dutiliser un mode opratoire par mer
8、curimtrie; les dtails de ce mode opratoire sont donns en annexe. 2 RFRENCES ISO/R 951, Lgumineuses - chantillonnage. ISO 2 170, Crales et lgumineuses - chantillonnage des produits de mouture. 3 DFINITION htrosides cyanogntiques des lgumineuses : Acide cyanhydrique, dtermin dans les conditions de la
9、mthode dcri te. La teneur en htrosides cyanogntiques sexprime en milligrammes dacide cyanhydrique (HCN) par kilogramme de produit. 4 PRINCIPE Aprs hydrolyse des htrosides, d istil I ation Par entranement la vapeur deau de lacide cyanhydrique libr par cette hydrolyse. Dtermination de la quantit dacid
10、e obtenue : - soit par titrage direct de cet acide dans le distillat, laide dune solution de nitrate dargent en milieu ammoniacal et en prsence diodure de potassium; lacide cyanhydrique donne un complexe soluble Ag(CN)*- et la fin du titrage est caractrise par lapparition dun louche permanent diodur
11、e dargent; - soit par titrage en retour dun excs de solution de nitrate dargent, laide dune solution de thiocyanate dammonium, en milieu dacide nitrique suffisamment dilu et en prsence dions de fer(lll); lacide cyanhydrique est prcipit sous forme de cyanure dargent (AgCN). 5 RACTIFS TOUS les ractifs
12、 doivent tre de qualit analytique; leau utilise doit tre de leau distille ou de leau de puret au moins quivalente. 5.1 Dihydrognophosphate de potassium (KH,POJ, solution 20 g/l. 5.2 Actate de sodium, solution 20 g/l, amene pH 5 0 + I 0 f 5 par quelques millilitres dacide actique. 5.3 Hydroxyde de so
13、dium, en pastilles. 5.4 Hydroxyde dammonium, solution environ 6 N (p2c 0,96 g/ml), obtenue en diluant volumes gaux une solution dhydroxyde dammonium, p20 0,92 g/ml, avec de leau. Pour le titrage direct : 5.5 Nitrate dargent, solution titre 0,Ol N. 5.6 Iodure de potassium (KI), solution 50 g/l. Pour
14、le titrage en retour : 5.7 Acide nitrique, p20 1,38 g/ml. 5.8 Nitrate dargent, solution titre 0,02 N. 5.9 Thiocyanate dammonium, solution titre 0,02 N. 5.10 Indicateur, prpar en mlangeant une partie en volume de lacide nitrique (5.7) et une partie en volume de solution sature de sulfate double de fe
15、r( I II) et dammonium. 6 APPAREILLAGE Matriel courant de laboratoire, et notamment 6.1 Broyeur mcanique, dun nettoyage facile, permettant le broyage des chantillons sans chauffement et sans modification sensible de leur teneur en eau. 6.2 Tamis, de 1 mm douverture de maille. lSO2164-1975(F) 6.3 Bala
16、nce. 8.3.1.1 ATTAQUE ENZYMATIQUE Introduire la prise dessai (8.2) dans le ballon de 1 I (6.5). Ajouter 50 ml deau contenant 2 amandes douces piles (masse totale de 1,5 2,0 g). Boucher le ballon hermtiquement et le maintenir durant 2 h dans lincubateur (6.4) rgl 38 “C. NOTE - Vrifier que les amandes
17、utilises ne contiennent pas dacide cyanhydrique librable dans les conditions de lessai. Refroidir le ballon et son contenu dans le bain deau glace (6.6). Ajouter 80 ml deau, 10 ml de la solution dactate de sodium (5.2) et 1 goutte dun agent antimousse. Adapter immdiatement le ballon lappareil distil
18、ler (6.5). 6.4 Incubateur, rgl pour oprer 38 1- 2 “C. 6.5 Appareil de distillation par entranement la vapeur deau, muni dun ballon col rod de 1 1. Ce ballon mobile doit pouvoir tre bouch hermtiquement par un bouchon rod. Lextrmit du rfrigrant doit tre munie dune allonge pointe effile. 6.6 Bain deau
19、glace Pour le titrage direct : 6.7 Fiole jauge, de 250 ml. 6.8 Pipette, de 100 ml. Pour le titrage en retour : 6.9 Fioles jauges, de 250 et 500 ml. 7 CHANTILLONNAGE Prparer un chantillon pour laboratoire de dimensions appropries, en oprant conformment IISO/R 951 ou IISO 2170. 8 MODE OPRATOIRE 8.1 Pr
20、paration de lchantillon pour essai Broyer environ un vingtime de lchantillon pour laboratoire dans le broyeur mcanique (6.1) pralablement bien nettoy, pour parfaire le nettoyage de lappareil. Rejeter cette mouture. Broyer ensuite le reste, pour le rduire ltat . de particules pouvant traverser complt
21、ement le tamis (6.2), le recueillir, le mlanger avec soin et lanalyser sans dlai. Dans le cas des produits de mouture, utiliser lchantillon tel quel. 8.2 Prise dessai Peser, 0,l g prs, 20 g environ de lchantillon pour essai (8.1). 8.3 Dtermination 8.3.1 Mthodes dhydrolyse Lhydrolyse peut tre ralise
22、selon lun des deux procds suivants (8.3.1.1 ou 8.3.1.2). Si le pouvoir enzymatique de lchantillon ne semble pas suffisant, lattaque enzymatique doit tre utilise de prfrence. 8.3.1.2 AUTRE PROCD DATTAQUE Introduire la prise dessai (8.2) dans le ballon de 1 I !6.5), ajouter 50 ml deau distille et 10 m
23、l de la solution dactate de sodium (5.2) ou de la solution de dihydrognophosphate de potassium (5.1). Boucher hermtiquement, homogniser et maintenir le ballon durant 12 h dans lincubateur (6.4) rgl 38 “C. Refroidir le ballon et son contenu par immersion dans le bain deau glace (6.6), ajouter 80 ml d
24、eau et 1 goutte dun agent antimousse; adapter immdiatement le ballon lappareil de distillation (6.5). 8.3.2 Distillation Distiller en recueillant environ 100 ml de distillat. Si lon se propose demployer la mthode de titrage direct (8.3.3.1) en prsence de liodure de potassium (5.6), recueillir le dis
25、tillat au sein de 20 ml deau distille conte- nant 1 g de lhydroxyde de sodium (5.3). (Solution A.) Si lon utilise la mthode de titrage en retour (8.3.3.2) par la solution de thiocyanate (5.9), recueillir le distillat au sein dun volume de 20 50 ml de la solution de nitrate dargent 0,02 N (5.8) addit
26、ionne de 1 ml de lacide nitrique (5.7). (Solution B.) Le volume de solution de nitrate dargent utiliser dpend de la teneur prsume en acide cyanhydrique. 8.3.3 Titrage 8.3.3.1 TITRAGE DIRECT Transvaser la solution A dans la fiole jauge de 250 ml (6.7), amener au trait repre avec de leau distille et m
27、langer soigneusement. Prlever la pipette 100 ml, les verser dans un bcher. Ajouter 2 ml de la solution diodure de potassium (5.6) et 1 ml de la solution dhydroxyde dammonium (5.4). Effectuer le titrage laide de la solution de nitrate dargent 0,Ol N (5.5) jusqu apparition dun louche persistant. Pour
28、apprcier commodment la fin du titrage, il est recommand de faire lobservation sur un fond noir. Faire un second titrage sur une nouvelle portion de 100 ml du distillat, et prendre la moyenne des deux titrages. 2 ISO2164-1975(F) . 8.3.3.2 TITRAGE EN RETOUR Transvaser la solution B dans une fiole jaug
29、e de 500 ml (6.9) et amener au trait repre avec de leau distille; bien mlanger et filtrer travers un filtre sec, en recevant le filtrat dans un rcipient sec. Ajouter 2 3 ml de lindicateur (5.10) 250 ml de filtrat (mesurs au moyen dune fiole jauge (6.9) et titrer avec la solution de thiocyanate dammo
30、nium (5.9), en agitant, jusqu coloration brun-rouge permanente. 8.3.4 Effectuer deux dterminations sur le mme chantillon pour essai. 8.4 Recherche des sulfures Un prcipit presque noir indique la prsence dune quantit significative de sulfures, alors quun prcipit bruntre indique seulement une trs faib
31、le teneur en sulfures (voir chapitre 10). 8.5 Essai blanc Effectuer un essai blanc dans les mmes conditions que dans le dosage proprement dit, mais en remplacant le distillat par de leau distille. 9 EXPRESSION DES RSULTATS 9.1 Titrage direct La teneur en htrosides cyanogntiques, exprime en milligram
32、mes dacide cyanhydrique (HCN) par kilogramme dchantillon, est donc gale 250 1000 1350 V, est le volume, en millilitres, de la solution de nitrate dargent (5.5) utilis lors du dosage proprement dit; V, est le volume, en millilitres, de la solution de nitrate dargent (5.5) utilis lors de lessai blanc.
33、 9.2 Titrage en retour La teneur en htrosides cyanogntiques, exprime en milligrammes dacide cyanhydrique (HCN) par kilogramme dchantillon, est gale 500 1 000 1 080 (Vs - 0,54 (v, V,) V,) - x-x -= 250 m m m est la masse, en grammes, de la prise dessai; V, est le volume, en millilitres, de la solution
34、 de thiocyanate dammonium (5.9) utilis lors du dosage proprement dit; V, est le volume, en millilitres, de la solution de thio- cyanate dammonium (5.9) utilis lors de lessai blanc. NOTE (pour 9.1 et 9.2) - Si la solution titre utilise na pas exactement le titre indiqu dans la liste des ractifs, un f
35、acteur de correction appropri doit tre utilis pour le-calcul des rsultats. 9.3 Prendre comme rsultat la moyenne arithmtique des deux dterminations. Exprimer le rsultat avec une seule dcimale. NOTE - Si le rsultat obtenu est infrieur 10 mg dacide cyanhydrique par kilogramme dchantillon, considrer que
36、 lchantillon est pratiquement exempt dhtrosides cyano- gntiques. 10 NOTE SUR LE MODE OPRATOIRE Si le distillat contient des sulfures ou des composs sulfurs, on observe un prcipit noir plus ou moins abondant par action sur lion argent. Dans ce cas, il convient de recommencer lopration en utilisant se
37、ulement la mthode de titrage direct (8.3.3.1) modifie en remplacant le , premier alina par : Transvaser le distillat dans la fiole jauge de 250 ml (6.7), amener au trait repre avec de leau distille et mlanger soigneusement. Prlever la pipette 100 ml et les verser dans un bcher. Ajouter 5 ml de solut
38、ion de nitrate de plomb 5 g/l et mlanger. Aprs 15 min de repos, filtrer, en lavant trois reprises le bcher, le prcipit et le filtre avec 10 ml deau chaque fois. Ajouter au filtrat et aux liquides de lavage 2 ml de la solution diodure de potassium (5.6) et 1 ml de la solution dhydroxyde dammonium (5.
39、4). 11 PROCS-VERBAL DESSAI Le procs-verbal doit indiquer la mthode utilise, le mode dattaque, ainsi que le mode de titrage utilis et le rsultat obtenu. II doit, en outre, mentionner tous les dtails opratoires non prvus dans la prsente Norme Internationale, ou facultatifs, ainsi que les incidents ven
40、tuels susceptibles davoir agi sur le rsultat. Le procs-verbal dessai doit donner tous les renseignements ncessaires lidentification complte de lchantillon. 3 ISO 21644975 (F) ANNEXE DOSAGE DES HTROSIDES CYANOGNTIQUES PAR LA MTHODE MERCURIMTRIQUE A.0 INTRODUCTION Si le distillat ne contient pas de su
41、lfures ou de composs sulfurs, la teneur en htrosides cyanogntiques dans les lgumineuses peut galement tre dtermine par titrage en retour au moyen dune solution de nitrate mercurique. II convient, dans ce cas, dappliquer la mthode dcrite dans la prsente Norme Internationale, en y apportant les modifi
42、cations suivantes aux chapitres et paragraphes mentionns ci-aprs. A.1 PRINCIPE Modification de la mthode par titrage en retour, en remplacant la solution de nitrate dargent par une solution de nitrate de mercure( II). A.2 RACTIFS Remplacer le ractif 5.8, Nitrage dargent, solution titre 0,02 N, par :
43、 Nitrate de mercure( solution titre 0,02 N. A.3 MODE OPRATOIRE A.3.1 Distillation Remplacer les deux derniers alinas de 8.3.2 par : Recueillir le distillat au sein dun volume de 20 50 ml de la solution de nitrate de mercure(H) 0,02 N (A.2), . additionn de 1 ml de lacide nitrique (5.7). (Solution B.)
44、 Le volume de solution de nitrate de mercure utiliser dpend de la teneur prsume en acide cyanhydrique. A.3.2 Titrage en retour Remplacer 8.3.3.2 par : (Ajouter, la solution B, 1 2 ml de lindicateur (5.10), refroidir jusqu une temprature infrieure 15 OC, et titrer avec la solution de thiocyanate damm
45、onium (5.9, en agitant, jusqu coloration brun-rouge permanente. Maintenir la temprature au-dessous de 15 “C jusqu la fin du titrage. ) A.4 EXPRESSION DES RSULTATS Titrage en retour Remplacer le premier alina de 9.2 par : (La teneur en htrosides cyanogntiques, exprime en milligrammes dacide cyanhydrique (HCN) par kilogramme dchantillon, est gale 1 000 0,54 (Vs- V,) x -= 540 w, - V,) ) m m Page blanche Page blanche
