1、 Numro de rfrence ISO 20963:2005(F) ISO 2005NORME INTERNATIONALE ISO 20963 Premire dition 2005-04-01 Qualit du sol Effets des polluants vis-vis des larves dinsectes (Oxythyrea funesta) Dtermination de la toxicit aigu Soil quality Effects of pollutants on insect larvae (Oxythyrea funesta) Determinati
2、on of acute toxicity ISO 20963:2005(F) PDF Exonration de responsabilit Le prsent fichier PDF peut contenir des polices de caractres intgres. Conformment aux conditions de licence dAdobe, ce fichier peut tre imprim ou visualis, mais ne doit pas tre modifi moins que lordinateur employ cet effet ne bnf
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7、postale 56 CH-1211 Geneva 20 Tel. + 41 22 749 01 11 Fax. + 41 22 749 09 47 E-mail copyrightiso.org Web www.iso.org Publi en Suisse ii ISO 2005 Tous droits rservsISO 20963:2005(F) ISO 2005 Tous droits rservs iiiSommaire Page Avant-propos. iv Introduction v 1 Domaine dapplication 1 2 Rfrences normativ
8、es. 1 3 Termes et dfinitions 2 4 Principe 2 5 Environnement de lessai. 3 6 Ractifs 3 7 Appareillage. 4 8 Mode opratoire 4 8.1 Protocole dessai. 4 8.2 Prparation des mlanges dessai 5 8.3 Prparation du rcipient tmoin 6 8.4 Apport de nourriture . 6 8.5 Introduction du matriel biologique 6 8.6 Condition
9、s dessai et mesurages 6 8.7 Substance de rfrence 7 9 Expression des rsultats 7 9.1 Calculs 7 9.2 Expression des rsultats 8 10 Validit de lessai 8 11 Rapport dessai. 8 Annexe A (informative) Exemple de technique dlevage pour Oxythyrea funesta 10 Annexe B (informative) Rsultats de lessai circulaire ra
10、lis en France 12 Bibliographie 13 ISO 20963:2005(F) iv ISO 2005 Tous droits rservsAvant-propos LISO (Organisation internationale de normalisation) est une fdration mondiale dorganismes nationaux de normalisation (comits membres de lISO). Llaboration des Normes internationales est en gnral confie aux
11、 comits techniques de lISO. Chaque comit membre intress par une tude a le droit de faire partie du comit technique cr cet effet. Les organisations internationales, gouvernementales et non gouvernementales, en liaison avec lISO participent galement aux travaux. LISO collabore troitement avec la Commi
12、ssion lectrotechnique internationale (CEI) en ce qui concerne la normalisation lectrotechnique. Les Normes internationales sont rdiges conformment aux rgles donnes dans les Directives ISO/CEI, Partie 2. La tche principale des comits techniques est dlaborer les Normes internationales. Les projets de
13、Normes internationales adopts par les comits techniques sont soumis aux comits membres pour vote. Leur publication comme Normes internationales requiert lapprobation de 75 % au moins des comits membres votants. Lattention est appele sur le fait que certains des lments du prsent document peuvent fair
14、e lobjet de droits de proprit intellectuelle ou de droits analogues. LISO ne saurait tre tenue pour responsable de ne pas avoir identifi de tels droits de proprit et averti de leur existence. LISO 20963 a t labore par le comit technique ISO/TC 190, Qualit du sol, sous-comit SC 4, Mthodes biologiques
15、. ISO 20963:2005(F) ISO 2005 Tous droits rservs vIntroduction La prsente Norme internationale dcrit une mthode de dtermination de la toxicit aigu de sols contamins et de produits chimiques vis-vis des larves de Oxythyrea funesta, un coloptre phytophage (Scarabaeidae, Cetoniinae) ayant une vaste rpar
16、tition gographique (Europe, Afrique du Nord et Moyen- Orient). Oxythyrea funesta possde de nombreuses caractristiques qui permettent de lutiliser pour suivre la qualit du sol ou pour valuer les effets des produits chimiques: une pertinence cologique: ce type dorganisme contribue dun grand nombre de
17、faons la structure du sol en stimulant laration du sol et lcoulement des eaux; les premiers stades de dveloppement (incubation des ufs, cycle larvaire et nymphose) sont souterrains; les larves de Oxythyrea funesta sont tolrantes aux modifications de la granulomtrie du substrat dessai; cette espce pe
18、ut tre leve en conditions contrles. NORME INTERNATIONALE ISO 20963:2005(F) ISO 2005 Tous droits rservs 1Qualit du sol Effets des polluants vis-vis des larves dinsectes (Oxythyrea funesta) Dtermination de la toxicit aigu 1 Domaine dapplication La prsente Norme internationale dcrit une mthode de dterm
19、ination des effets des sols contamins et des substances sur la survie des larves de Oxythyrea funesta. Les larves sont exposes aux polluants par absorption cuticulaire et ingestion. Pour les sols contamins, les effets sur la survie sont dtermins dans le sol soumis essai et dans un sol tmoin. Selon l
20、objectif de ltude, le substrat utilis pour le tmoin et les dilutions (srie de dilutions du sol contamin) sont soit un sol non contamin comparable lchantillon de sol soumettre essai, soit un substrat de sol artificiel. Les effets des substances sont valus en utilisant un substrat de sol artificiel df
21、ini. La prsente Norme internationale nest pas applicable aux substances volatiles, cest-dire des substances pour lesquelles la constante de Henry ou le coefficient de partition air/eau est suprieur 1, ou des substances pour lesquelles la pression de vapeur excde 0,001 33 Pa 25 C. NOTE Cette mthode n
22、e prend pas en compte la dgradation possible des substances ou des polluants au cours de lessai. 2 Rfrences normatives Les documents de rfrence suivants sont indispensables pour lapplication du prsent document. Pour les rfrences dates, seule ldition cite sapplique. Pour les rfrences non dates, la de
23、rnire dition du document de rfrence sapplique (y compris les ventuels amendements). ISO 10381-6, Qualit du sol chantillonnage Partie 6: Lignes directrices pour la collecte, la manipulation et la conservation de sols destins une tude en laboratoire des processus microbiens arobies ISO 10390, Qualit d
24、u sol Dtermination du pH ISO 11268-1, Qualit du sol Effets des polluants vis-vis des vers de terre (Eisenia fetida) Partie 1: Dtermination de la toxicit aigu en utilisant des substrats de sol artificiel ISO 11269-2: 1)Qualit du sol Dtermination des effets des polluants sur la flore du sol Partie 2:
25、Effets des substances chimiques sur lmergence et la croissance des vgtaux suprieurs 1) publier. (Rvision de lISO 11269-2:1995) ISO 20963:2005(F) 2 ISO 2005 Tous droits rservs3 Termes et dfinitions Pour les besoins du prsent document, les termes et dfinitions suivants sappliquent. 3.1 concentration l
26、tale 50 CL 50 concentration ltale mdiane de la substance exprimente ou pourcentage de dilution du sol contamin qui provoque la mort de 50 % des organismes dessai pendant la priode dexprimentation 3.2 concentration ltale x CLx concentration de la substance exprimente ou pourcentage de dilution du sol
27、 contamin qui provoque la mort de x % des organismes dessai pendant la priode dexprimentation NOTE x correspond au pourcentage (10, 20, 25) de cet effet. 3.3 concentration minimale avec effet observ CMEO plus faible concentration soumise essai de la substance exprimente ou du sol contamin laquelle e
28、st observ un effet statistiquement significatif par rapport au tmoin NOTE Toutes les concentrations dessai suprieures la CMEO ont un effet nocif suprieur ou gal celui observ la CMEO. 3.4 concentration sans effet observable CSEO plus forte concentration soumise essai de la substance exprimente ou du
29、sol contamin pour laquelle aucun effet statistiquement significatif nest observ par rapport au tmoin NOTE La CSEO est la concentration dessai immdiatement infrieure la CMEO. 3.5 mlange dessai mlange de la substance exprimente avec le substrat dessai, mlange de sol contamin avec le substrat dessai ou
30、 mlange de sol contamin avec un sol non contamin comparable lchantillon de sol soumis essai 3.6 diapause interruption du mtabolisme durant le dveloppement de luf, de la larve, de la nymphe ou de limago 4 Principe Des larves de Cetoniinae (espce Oxythyrea funesta) sont exposes une gamme de dilutions
31、dun sol contamin ou une gamme de concentrations de la substance soumise essai. La mortalit des larves est dtermine aprs 10 jours. Les mlanges dessai sont prpars au dbut de lessai et ne sont pas renouvels pendant la priode dexprimentation. Les rsultats obtenus lissue de lessai sont compars un tmoin e
32、t sont utiliss pour dterminer la concentration qui provoque 50 % de mortalit chez les larves (CL 50 10jours ). Lessai est conduit en deux tapes: un essai prliminaire qui dtermine la gamme approprie de dilution/concentration lors de lessai final; ISO 20963:2005(F) ISO 2005 Tous droits rservs 3 un ess
33、ai dfinitif qui permet de dterminer les dilutions/concentrations provoquant entre 10 % et 90 % de mortalit, ceci constituant le rsultat de lessai. Il est galement possible de dterminer les effets des sols contamins ou des substances sur la croissance des larves (en option). Le gain de poids au cours
34、 de la priode dexprimentation permet en effet de considrer ce critre comme complmentaire de la mortalit pour lvaluation des effets des sols contamins ou des substances. 5 Environnement de lessai Les essais doivent tre raliss une temprature de (26 1) C dans lobscurit complte. 6 Ractifs 6.1 Matriel bi
35、ologique Lespce utilise est Oxythyrea funesta (Scarabaeidae, Cetoniinae). Des larves de troisime stade, dont le poids frais est compris entre 100 mg et 200 mg, sont requises pour raliser lessai. Les larves doivent tre saines et exemptes de morsures ou dautres blessures apparentes. NOTE Selon les con
36、ditions dlevage dcrites lAnnexe A, des larves ges approximativement de deux semaines conviennent pour lessai. Des larves de taille similaire doivent tre slectionnes. La diffrence de masse entre la plus petite et la plus grosse des larves ne doit pas dpasser 50 mg dans un rcipient dessai donn. limine
37、r les particules de substrat dlevage colles au tgument en utilisant, par exemple, un pinceau doux avant de peser les larves. Il est galement possible de laisser les animaux se dplacer sur un papier lgrement humide pour liminer le substrat dlevage coll au tgument. Il est ncessaire de synchroniser lle
38、vage. Un exemple de technique dlevage de Oxythyrea funesta est donn lAnnexe A. 6.2 Substrat dessai La quantit de substrat utilis par rcipient en verre (7.1) doit tre quivalente 300 g (poids sec). Le substrat, appel sol artificiel, doit avoir la composition suivante (conformment lISO 11268-1): tourbe
39、 de sphaigne sche lair, finement moulue et exempte de tout rsidu de vgtaux visible: 10 % (exprim en quivalent sec); argile kaolinite contenant au moins 30 % de kaolinite: 20 % (exprim en quivalent sec); sable de quartz industriel (principalement du sable fin dont plus de 50 % des particules ont une
40、taille comprise entre 0,05 mm et 0,20 mm): 70 % (exprim en quivalent sec). Ajouter du carbonate de calcium (CaCO 3 ), pulvris et de qualit analytique reconnue, jusqu amener le pH du substrat humidifi 6,0 0,5 (communment entre 0,5 % et 1 % du poids des ingrdients secs). Prparer le sol artificiel en m
41、langeant soigneusement les composants secs numrs ci-dessus dans un mlangeur de laboratoire de grande dimension. La quantit de carbonate de calcium requise peut varier selon les proprits du lot individuel de tourbe de sphaigne et il convient de la dterminer en mesurant des sous- chantillons immdiatem
42、ent avant lessai. ISO 20963:2005(F) 4 ISO 2005 Tous droits rservsConserver le sol artificiel mlang temprature ambiante. Pour dterminer le pH et la capacit maximale de rtention deau, prhumidifier le sol artificiel sec au moins deux jours avant le dbut de lessai en ajoutant de leau dionise de faon obt
43、enir la moiti de la teneur en eau finale requise, savoir 50 % de la capacit maximale de rtention deau. Dterminer la capacit de rtention deau selon lAnnexe A de lISO 11269-2: et dterminer le pH selon lISO 10390. Si le pH mesur nest pas dans la gamme requise, ajouter une quantit suffisante de CaCO 3ou
44、 prparer un nouveau lot de sol artificiel. 6.3 Nourriture pour larves, cest-dire de la bouse de vache sche et finement moulue, aucune particule de plus de 1 mm. La bouse de vache doit provenir danimaux sains qui nont reu aucun traitement (antibiotiques, stimulateur ou activateur de croissance) duran
45、t les deux semaines prcdant la date de prlvement. Il convient de vrifier tout particulirement que les animaux nont pas t traits rcemment contre les vers intestinaux. 6.4 Substance de rfrence, cest-dire du 2,4,5-trichlorophnol de qualit analytique reconnue. 7 Appareillage Utiliser le matriel courant
46、de laboratoire et les matriels suivants. 7.1 Rcipients en verre, dune capacit de 0,5 l 1 l environ, recouverts dune membrane en polythylne (7.5) permettant les changes entre le milieu et latmosphre. 7.2 Broyeur, ou tout autre appareil utilisable pour prparer la nourriture comme dcrit en 6.3. 7.3 Mla
47、ngeur de laboratoire de grande dimension, pour la prparation du substrat dessai (6.2). 7.4 Balance, avec une prcision dau moins 1 mg. 7.5 Membrane en polythylne, perfore de petits trous pour permettre les changes entre le milieu et latmosphre. 8 Mode opratoire 8.1 Protocole dessai 8.1.1 Essai prliminaire Raliser le prsent essai dans une gamme tendue de dilutions/concentrations (par exemple pour les sols contamins: 0 %,
