1、 Numro de rfrence ISO 20665:2008(F) ISO 2008NORME INTERNATIONALE ISO 20665 Premire dition 2008-12-15Qualit de leau Dtermination de la toxicit chronique vis-vis de Ceriodaphnia dubia Water quality Determination of chronic toxicity to Ceriodaphnia dubiaISO 20665:2008(F) PDF Exonration de responsabilit
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5、mbres de lISO. Dans le cas peu probable o surviendrait un problme dutilisation, veuillez en informer le Secrtariat central ladresse donne ci-dessous. DOCUMENT PROTG PAR COPYRIGHT ISO 2008 Droits de reproduction rservs. Sauf prescription diffrente, aucune partie de cette publication ne peut tre repro
6、duite ni utilise sous quelque forme que ce soit et par aucun procd, lectronique ou mcanique, y compris la photocopie et les microfilms, sans laccord crit de lISO ladresse ci-aprs ou du comit membre de lISO dans le pays du demandeur. ISO copyright office Case postale 56 CH-1211 Geneva 20 Tel. + 41 22
7、 749 01 11 Fax + 41 22 749 09 47 E-mail copyrightiso.org Web www.iso.org Publi en Suisse ii ISO 2008 Tous droits rservsISO 20665:2008(F) ISO 2008 Tous droits rservs iii Sommaire Page Avant-propos. iv Introduction v 1 Domaine dapplication 1 2 Rfrences normatives 1 3 Termes et dfinitions 2 4 Principe
8、2 5 Environnement de lessai. 3 6 Ractifs 3 7 Appareillage 6 8 chantillonnage et chantillons 6 9 Mode opratoire 7 10 Expression des rsultats . 10 11 Critres de validit 11 12 Fidlit . 12 13 Rapport dessai . 12 Annexe A (normative) Prparation du milieu ELENDT M4. 14 Annexe B (normative) Prparation du m
9、ilieu eau de duret moyenne. 16 Annexe C (informative) Prparation du milieu de LC OLIGO. 17 Annexe D (normative) Mode opratoire pour la prparation base de levures/Cerophyll/granuls pour truite 19 Annexe E (informative) Feuille de collecte de donnes . 21 Bibliographie 22 ISO 20665:2008(F) iv ISO 2008
10、Tous droits rservsAvant-propos LISO (Organisation internationale de normalisation) est une fdration mondiale dorganismes nationaux de normalisation (comits membres de lISO). Llaboration des Normes internationales est en gnral confie aux comits techniques de lISO. Chaque comit membre intress par une
11、tude a le droit de faire partie du comit technique cr cet effet. Les organisations internationales, gouvernementales et non gouvernementales, en liaison avec lISO participent galement aux travaux. LISO collabore troitement avec la Commission lectrotechnique internationale (CEI) en ce qui concerne la
12、 normalisation lectrotechnique. Les Normes internationales sont rdiges conformment aux rgles donnes dans les Directives ISO/CEI, Partie 2. La tche principale des comits techniques est dlaborer les Normes internationales. Les projets de Normes internationales adopts par les comits techniques sont sou
13、mis aux comits membres pour vote. Leur publication comme Normes internationales requiert lapprobation de 75 % au moins des comits membres votants. Lattention est appele sur le fait que certains des lments du prsent document peuvent faire lobjet de droits de proprit intellectuelle ou de droits analog
14、ues. LISO ne saurait tre tenue pour responsable de ne pas avoir identifi de tels droits de proprit et averti de leur existence. LISO 20665 a t labore par le comit technique ISO/TC 147, Qualit de leau, sous-comit SC 5, Mthodes biologiques. ISO 20665:2008(F) ISO 2008 Tous droits rservs v Introduction
15、La mise en vidence deffets nfastes pour la qualit de leau passe, depuis plusieurs annes, par la ralisation dessais biologiques. Les cladocres, Ceriodaphnia dubia, sont reconnus comme tant reprsentatifs du zooplancton largement utilis lors des essais de toxicit aquatique. La brivet de lessai de toxic
16、it chronique, (7 1) jours, et les faibles volumes utiliss sont des atouts majeurs pour lobtention de rsultats appropris sur des chantillons qui sont susceptibles de subir des modifications pendant la priode de conservation. Il convient que lutilisateur soit conscient du fait que des problmes particu
17、liers peuvent ncessiter la spcification de conditions marginales supplmentaires. NORME INTERNATIONALE ISO 20665:2008(F) ISO 2008 Tous droits rservs 1 Qualit de leau Dtermination de la toxicit chronique vis- vis de Ceriodaphnia dubia AVERTISSEMENT Il convient que lutilisateur de la prsente Norme inte
18、rnationale connaisse bien les pratiques courantes de laboratoire. La prsente Norme internationale na pas pour but de traiter tous les problmes de scurit qui sont, le cas chant, lis son utilisation. Il incombe lutilisateur dtablir des pratiques appropries en matire dhygine et de scurit et de sassurer
19、 de la conformit la rglementation nationale en vigueur. IMPORTANT Il est absolument essentiel que les essais conduits conformment la prsente Norme internationale soient effectus par du personnel ayant reu une formation adquate. 1 Domaine dapplication La prsente Norme internationale spcifie une mthod
20、e de dtermination de la toxicit chronique vis-vis de Ceriodaphnia dubia (Cladocera, Crustacea), base sur une inhibition de la reproduction aprs (7 1) jours. Cette mthode est applicable: a) aux substances chimiques solubles ou pouvant tre maintenues en suspension ou en dispersion stables dans les con
21、ditions de lessai; b) aux effluents industriels ou aux eaux uses, le cas chant, aprs dcantation, filtration ou centrifugation; c) aux eaux douces; d) aux extraits aqueux. La prsente Norme internationale nest pas applicable la ralisation dessais sur des chantillons aqueux provenant dun milieu marin o
22、u estuarien. 2 Rfrences normatives Les documents de rfrence suivants sont indispensables pour lapplication du prsent document. Pour les rfrences dates, seule ldition cite sapplique. Pour les rfrences non dates, la dernire dition du document de rfrence sapplique (y compris les ventuels amendements).
23、ISO 5667-16:1998, Qualit de leau chantillonnage Partie 16: Lignes directrices pour les essais biologiques des chantillons ISO 5814, Qualit de leau Dosage de loxygne dissous Mthode lectrochimique la sonde ISO 6059, Qualit de leau Dosage de la somme du calcium et du magnsium Mthode titrimtrique lEDTA
24、ISO 10523, Qualit de leau Dtermination du pH ISO/TS 20281, Qualit de leau Lignes directrices relatives linterprtation statistique de donnes cotoxicologiques ISO 20665:2008(F) 2 ISO 2008 Tous droits rservs3 Termes et dfinitions Pour les besoins du prsent document, les termes et dfinitions suivants sa
25、ppliquent. 3.1 porte groupe ou cohorte de nouveau-ns, compos de deux nouveau-ns (ou plus) dans un rcipient dessai pendant un jour donn de la priode dessai engendrs par la femelle adulte entre deux priodes de mue (cest-dire avant que la carapace ne soit rejete par ladite femelle pendant la mue) 3.2 o
26、rganisme mature daphnie femelle adulte, saine qui produit et engendre de multiples portes de nouveau-ns vivants 3.3 lot tmoin srie de rpliques contenant la solution tmoin (3.4) NOTE Dans la prsente Norme internationale, 10 rpliques constituent le lot tmoin. 3.4 solution tmoin mlange de milieu dessai
27、 et de nourriture sans lchantillon soumis essai 3.5 concentration effective produisant x % dinhibition de la reproduction CE xconcentration estime dun chantillon pour essai produisant x % dinhibition de la reproduction (3.7) par rapport au lot tmoin (3.3), ce qui reprsente un point de la concentrati
28、on de lchantillon pour essai qui selon les estimations provoque un pourcentage donn de rduction dune fonction biologique de caractre quantitatif 3.6 nouveau-n nouveau-n ou individu rcemment clos NOTE Dans la prsente Norme internationale, un nouveau-n est une daphnie de premier stade, ge de moins de
29、24 h. 3.7 inhibition de la reproduction comparaison portant sur le nombre de jeunes vivants engendrs par lensemble des adultes la fin de lessai entre le lot dessai (3.8) et le lot tmoin (3.3) 3.8 lot dessai srie de rpliques contenant la mme solution dessai (3.9) NOTE Dans la prsente Norme internatio
30、nale, 10 rpliques constituent un lot dessai. 3.9 solution dessai mlange constitu du milieu dessai, de nourriture et de lchantillon soumis essai 4 Principe De jeunes Ceriodaphnia dubia, ges de moins de 24 h au dbut de lessai sont exposes individuellement, une gamme de concentrations de lchantillon so
31、umis essai pendant une priode de (7 1) jours. En gnral, lessai se termine aprs 7 jours une fois que 60 % des organismes tmoins ont engendr leur ISO 20665:2008(F) ISO 2008 Tous droits rservs 3 troisime porte. La mortalit des femelles adultes et leur reproduction sont contrles pendant toute la dure de
32、xposition. Tout autre paramtre biologique pertinent peut galement tre tudi. Les donnes obtenues permettent, en utilisant un modle appropri, de calculer la concentration qui provoque x % dinhibition de la reproduction (CE x ), par exemple CE 10 , CE 20ou CE 50 . 5 Environnement de lessai Raliser less
33、ai dans une enceinte ou un local thermostat permettant dobtenir (25 2) C dans les rcipients dessai. Sassurer quau cours dun mme essai la temprature ne varie pas plus de 2 C. Rgler le cycle jour/nuit (photopriode) sur 16 h de jour et 8 h dobscurit. Il est recommand davoir un clairage (7.8) dune inten
34、sit comprise dans une gamme de 100 lx 600 lx au niveau de linterface air/eau dans les rcipients dessai (7.2). Ne pas agiter ni arer les rcipients dessai. Maintenir latmosphre exempte de vapeurs ou poussires toxiques. Lemploi de solutions tmoins permet de confirmer que lessai se droule bien dans une
35、atmosphre exempte de vapeurs ou poussires toxiques. 6 Ractifs Utiliser uniquement des ractifs de qualit analytique reconnue, sauf spcification contraire. 6.1 Organismes pour essai Les Ceriodaphnia dubia nouveau-nes sont obtenues par parthnogense partir de femelles adultes, sur au moins trois gnratio
36、ns dans les conditions de temprature, de photopriode et de nourriture identiques celles de lessai. Les Ceriodaphnia dubia utilises pour lessai doivent tre ges de moins de 24 h et doivent tre issues dune porte comprenant au moins huit animaux nouvellement ns. La veille de lessai, isoler partir de lle
37、vage une douzaine dadultes (ou plus) gs de plus de 6 jours et de moins de 14 jours. Isoler chacun dans un rcipient distinct contenant de la nourriture (6.4.1 ou 6.4.2) et du milieu dessai (6.3.2 ou 6.3.3). Avant lessai, retirer les adultes des rcipients et dnombrer la progniture. liminer tous les rc
38、ipients contenant moins de huit jeunes vivants. Les Ceriodaphnia dubia peuvent aussi provenir de lclosion dphippies achetes auprs dune socit spcialise 1) . Ces organismes peuvent tre utiliss directement comme organismes pour essai. 6.2 Eau pure, eau de conductivit infrieure 10 S/cm 2) . 6.3 Milieu d
39、essai 6.3.1 Gnralits Deux milieux dessai sont recommands: ELENDT M4 (6.3.2) ou une eau de duret moyenne (6.3.3). Il est possible dutiliser dautres milieux dessai condition que les critres de validit (Article 11) soient satisfaits. 1) Les phippies fournies par MicroBiotests, Mariakerke (Gent), Belgiq
40、ue sont un exemple de produit appropri disponible sur le march. Cette information est donne lintention des utilisateurs de la prsente Norme internationale et ne signifie nullement que lISO approuve ou recommande lemploi exclusif des produits de ce fournisseur. 2) 1 mS/m. ISO 20665:2008(F) 4 ISO 2008
41、 Tous droits rservsDans ce dernier cas, fournir la rfrence dune publication ou, pour des eaux naturelles (dans le cas dessai sur effluents), la date de prlvement, le type de conservation, le mode de manipulation, les ajouts effectus et les caractristiques physico-chimiques concernant les principaux
42、ions Na(I), K(I), Ca(II), Mg(II), carbonates, chlorure, sulfate) ainsi que le pH et le carbone organique dissous (COD). 6.3.2 Option: Milieu ELENDT M4 Prparer le milieu dessai ELENDT M4 conformment lAnnexe A. Le milieu dessai, ainsi prpar, doit avoir un pH de 8,0 0,3 (mesur comme spcifi dans lISO 10
43、523) et une duret totale de (250 20) mg/l (exprime en CaCO 3et mesure comme spcifi dans lISO 6059). Arer le milieu dessai jusqu ce que la concentration en oxygne dissous ait atteint la valeur de saturation dans lair et jusqu stabilisation du pH. Si ncessaire, ajuster le pH 8,0 0,3 laide dune solutio
44、n dilue dhydroxyde de sodium ou dacide chlorhydrique. NOTE tant donn la valeur leve de la duret du milieu dessai et la prsence dEDTA dans ce milieu, la biodisponibilit des ions mtalliques bivalents peut tre rduite, entranant de ce fait une diminution de la toxicit apparente de ces ions. 6.3.3 Option
45、: Milieu eau de duret moyenne Prparer leau de duret moyenne conformment lAnnexe B. Le milieu dessai, ainsi prpar, doit avoir un pH compris entre 7,4 et 7,8 (mesur comme spcifi dans lISO 10523) et une duret totale de (90 10) mg/l (exprime en CaCO 3et mesure comme spcifi dans lISO 6059). 6.4 Nourritur
46、e 6.4.1 Option 1: Alimentation base de nourriture pour poissons et de deux espces dalgues La nourriture est compose de nourriture pour poissons et des algues Chlorella vulgaris et Pseudo- kirchneriella subcapitata 3)(dnommes auparavant Selenastrum capricornutum et Raphidocelis subcapitata) (voir NF
47、T90-376 1et Rfrence 2). Prparer une suspension de nourriture pour poissons 4) 5 g/l dans le milieu dessai (6.3.2), homognise au broyeur ou avec tout autre moyen permettant lobtention de particules de quelques micromtres. Prparer cette suspension chaque jour pour nourrir les levages, ou durant les essais. Cultiver les algues sparment dans tout milieu appropri (par exemple LC OLIGO, Annexe C). Les utiliser lorsque la cultur
