1、 Numro de rfrence ISO 17372:2008(F) ISO 2008NORME INTERNATIONALE ISO 17372 Premire dition 2008-02-01Aliments des animaux Dosage de la zaralnone par chromatographie colonne immunoaffinit et par chromatographie liquide haute performance Animal feeding stuffs Determination of zearalenone by immunoaffin
2、ity column chromatography and high performance liquid chromatography ISO 17372:2008(F) PDF Exonration de responsabilit Le prsent fichier PDF peut contenir des polices de caractres intgres. Conformment aux conditions de licence dAdobe, ce fichier peut tre imprim ou visualis, mais ne doit pas tre modi
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6、 2008 Droits de reproduction rservs. Sauf prescription diffrente, aucune partie de cette publication ne peut tre reproduite ni utilise sous quelque forme que ce soit et par aucun procd, lectronique ou mcanique, y compris la photocopie et les microfilms, sans laccord crit de lISO ladresse ci-aprs ou
7、du comit membre de lISO dans le pays du demandeur. ISO copyright office Case postale 56 CH-1211 Geneva 20 Tel. + 41 22 749 01 11 Fax. + 41 22 749 09 47 E-mail copyrightiso.org Web www.iso.org Publi en Suisse ii ISO 2008 Tous droits rservsISO 17372:2008(F) ISO 2008 Tous droits rservs iii Sommaire Pag
8、e Avant-propos. iv 1 Domaine dapplication 1 2 Rfrences normatives 1 3 Principe 1 4 Ractifs 2 5 Appareillage 4 6 chantillonnage 5 7 Prparation de lchantillon pour essai 5 8 Mode opratoire 5 9 Calcul des rsultats 9 10 Fidlit . 10 11 Rapport dessai . 11 Annexe A (normative) Confirmation par chromatogra
9、phie en phase normale 12 Annexe B (informative) Rsultats dun essai interlaboratoires. 14 Bibliographie 16 ISO 17372:2008(F) iv ISO 2008 Tous droits rservsAvant-propos LISO (Organisation internationale de normalisation) est une fdration mondiale dorganismes nationaux de normalisation (comits membres
10、de lISO). Llaboration des Normes internationales est en gnral confie aux comits techniques de lISO. Chaque comit membre intress par une tude a le droit de faire partie du comit technique cr cet effet. Les organisations internationales, gouvernementales et non gouvernementales, en liaison avec lISO p
11、articipent galement aux travaux. LISO collabore troitement avec la Commission lectrotechnique internationale (CEI) en ce qui concerne la normalisation lectrotechnique. Les Normes internationales sont rdiges conformment aux rgles donnes dans les Directives ISO/CEI, Partie 2. La tche principale des co
12、mits techniques est dlaborer les Normes internationales. Les projets de Normes internationales adopts par les comits techniques sont soumis aux comits membres pour vote. Leur publication comme Normes internationales requiert lapprobation de 75 % au moins des comits membres votants. Lattention est ap
13、pele sur le fait que certains des lments du prsent document peuvent faire lobjet de droits de proprit intellectuelle ou de droits analogues. LISO ne saurait tre tenue pour responsable de ne pas avoir identifi de tels droits de proprit et averti de leur existence. LISO 17372 a t labore par le comit t
14、echnique ISO/TC 34, Produits alimentaires, sous-comit SC 10, Aliments des animaux. NORME INTERNATIONALE ISO 17372:2008(F) ISO 2008 Tous droits rservs 1 Aliments des animaux Dosage de la zaralnone par chromatographie colonne immunoaffinit et par chromatographie liquide haute performance 1 Domaine dap
15、plication La prsente Norme internationale sapplique lanalyse de la zaralnone dans les aliments pour animaux et leurs ingrdients, comprenant lorge, le mas, lavoine, le seigle, le bl, la farine de soja, la farine de canola (colza), le gluten de mas, la drche, les lentilles et la pulpe de betterave suc
16、re. La limite de quantification est de 0,05 mg/kg (50 g/kg). Une limite de quantification infrieure cette valeur peut tre atteinte, condition que le laboratoire utilisateur la valide. 2 Rfrences normatives Les documents de rfrence suivants sont indispensables pour lapplication du prsent document. Po
17、ur les rfrences dates, seule ldition cite sapplique. Pour les rfrences non dates, la dernire dition du document de rfrence sapplique (y compris les ventuels amendements). ISO 565, Tamis de contrle Tissus mtalliques, tles mtalliques perfores et feuilles lectroformes Dimensions nominales des ouverture
18、s ISO 648, Verrerie de laboratoire Pipettes un volume ISO 1042, Verrerie de laboratoire Fioles jauges un trait ISO 3696, Eau pour laboratoire usage analytique Spcification et mthodes dessai ISO 4788, Verrerie de laboratoire prouvettes gradues cylindriques ISO 6498, Aliments des animaux Prparation de
19、s chantillons pour essai 3 Principe Les chantillons sont extraits avec de lactonitrile dilu, puis clarifis par filtration. Une aliquote du filtrat est ensuite dilue avec de leau ou avec un tampon phosphate (PBS), avant dtre purifie par chromatographie colonne dimmunoaffinit. Les extraits ainsi purif
20、is sont analyss par chromatographie liquide haute performance (CLHP) en phase inverse avec dtection par fluorescence. La prsence de zaralnone dans les chantillons potentiellement positifs peut tre confirme en calculant les rapports de la rponse obtenue plusieurs longueurs dondes, en procdant une ana
21、lyse par CLHP en phase normale ou en utilisant un dtecteur barrette de diodes. ISO 17372:2008(F) 2 ISO 2008 Tous droits rservs4 Ractifs Sauf indication contraire, utiliser uniquement des ractifs de qualit analytique reconnue. AVERTISSEMENT Utiliser tous les solvants et les solutions sous une hotte a
22、spirante. Porter des lunettes et des vtements de protection et viter tout contact avec la peau. 4.1 Eau, de qualit 1 telle que dfinie dans lISO 3696. 4.2 Actonitrile (CH 3 CN), de qualit CLHP. 4.3 Mthanol (CH 3 OH), de qualit CLHP. 4.4 Chlorure de sodium (NaCl), dune puret dau moins 99 % (fraction m
23、assique). 4.5 Solvant dextraction, de fraction volumique, (CH 3 CN) = 90 %. Mlanger 900 ml dactonitrile (4.2) avec 100 ml deau (4.1). Bien mlanger. 4.6 Actonitrile dilu, de fraction volumique (CH 3 CN) = 50 %. Mlanger 1 volume dactonitrile (4.2) avec 1 volume deau (4.1). Bien mlanger. Le cas chant,
24、cette solution est utilise pour la seringue de lchantillonneur automatique. 4.7 Mthanol dilu, de fraction volumique (CH 3 OH) = 30 %. Mlanger 75 ml de mthanol (4.3) avec 175 ml deau (4.1). Bien mlanger. 4.8 Hydrognophosphate de disodium (Na 2 HPO 4 ), dune puret dau moins 99 % (fraction massique). 4
25、.9 Dihydrognophosphate de potassium (KH 2 PO 4 ), dune puret dau moins 99 % (fraction massique). 4.10 Chlorure de potassium (KCl), dune puret dau moins 99 % (fraction massique). 4.11 Hydroxyde de sodium (NaOH), dune puret dau moins 99 % (fraction massique). 4.12 Solution tampon phosphate (PBS). Diss
26、oudre 8 g de chlorure de sodium (4.4), 1,16 g dhydrognophosphate de disodium (4.8), 0,2 g de dihydrognophosphate de potassium (4.9) et 0,2 g de chlorure de potassium (4.10) dans 1 l deau (4.1). Ajuster le pH 7,4 laide de la solution dhydroxyde de sodium (4.13). Il est galement possible de se procure
27、r dans le commerce une solution PBS concentre prte lemploi et de la diluer comme ncessaire. 4.13 Solution dhydroxyde de sodium, c(NaOH) = 0,2 mol/l. Dissoudre 8 g dhydroxyde de sodium (4.11) dans 1 l deau (4.1). 4.14 Phase mobile CLHP. Ajouter 460 ml dactonitrile (4.2) dans une fiole de 1 l, ajouter
28、 460 ml deau (4.1) et 80 ml de mthanol (4.3). Bien mlanger et filtrer sur un filtre dune porosit de 0,45 m (5.14). 4.15 Solution talon mre de zaralnone, (C 18 H 22 O 5 ) 50 g/ml. AVERTISSEMENT La zaralnone est un strogne. manipuler avec prcaution en raison de son activit biologique. ISO 17372:2008(F
29、) ISO 2008 Tous droits rservs 3 Peser 5,0 mg de zaralnone 0,1 mg prs. Les transvaser dans une fiole jauge un trait de 100 ml (5.1.2). Dissoudre dans de lactonitrile (4.2) et complter au trait avec le mme solvant. Dterminer la concentration de la solution talon comme suit. Verser la pipette (5.1.3) 4
30、,0 ml de solution talon mre dans une fiole jauge un trait de 25 ml (5.1.2) et complter au trait avec de lactonitrile (environ 8 g de zaralnone par millilitre). Mesurer labsorption ultraviolette (UV) laide dune cuve en quartz de 10 mm. Dterminer la concentration, (C 18 H 22 O 5 ), en milligrammes par
31、 millilitre, par lquation (1): r 18 22 5 1000 25 (C H O ) 4 MA = (1) o M rest la masse molculaire relative, 318,4, de la zaralnone; A est labsorption UV; est lmissivit, 12 623 111, 274 nm. Consigner le rsultat trois chiffres significatifs. La solution talon, ferme hermtiquement et conserve au rfrigr
32、ateur, est stable pendant au moins un an. Rtalonner chaque prparation de nouvelles solutions talons dilues (4.16 et 4.17). 4.16 Solution talon de dopage, (C 18 H 22 O 5 ) = 5,0 g/ml. Diluer 10,0 ml de solution talon mre (4.15) dans 100 ml avec le solvant dextraction (4.5). Stocker au rfrigrateur. Re
33、nouveler la solution tous les 6 mois. 4.17 Solutions talons pour CLHP. Prparer cinq solutions talons de zaralnone des concentrations indiques dans le Tableau 1 en diluant la solution talon de dopage (4.16) ou la solution talon pour CLHP (4.17.1) avec la phase mobile CLHP (4.14). Tableau 1 Prparation
34、 des solutions talons pour CLHP Solution talon pour CLHP Solution talon diluer Volume diluer Volume final Concentration de zaralnone ml ml g/ml 4.17.1 4.16 2,0 50 0,20 4.17.2 4.16 1,5 50 0,15 4.17.3 4.16 1,0 50 0,10 4.17.4 4.16 1,0 100 0,050 4.17.5 4.17.1 5,0 50 0,020 Stocker au rfrigrateur toutes l
35、es solutions talons pour CLHP. Les renouveler tous les 6 mois. ISO 17372:2008(F) 4 ISO 2008 Tous droits rservs5 Appareillage Matriel courant de laboratoire et, en particulier, ce qui suit. 5.1 Verrerie de laboratoire usuelle. 5.1.1 prouvettes gradues, conformes lISO 4788, classe A. 5.1.2 Fioles jaug
36、es un trait, conformes lISO 1042, classe A. 5.1.3 Pipettes, conformes lISO 648, classe A. 5.2 Spectrophotomtre UV. 5.3 Support de filtration sous vide, compatible avec les colonnes dimmunoaffinit. 5.4 Erlenmeyer, de 125 ml et 500 ml de capacits. 5.5 Papier-filtre, dun diamtre de 185 mm, par exemple
37、Whatman no. 41 1) . 5.6 Tube en verre, fond rond de 5 ml (13 mm 100 mm), ou quivalent. 5.7 Tubes centrifuger, dune capacit de 50 ml, en polypropylne ou quivalent. 5.8 Entonnoirs en verre, dun diamtre intrieur de 60 mm et de 90 mm. 5.9 Papier-filtre en microfibres de verre, dun diamtre de 125 mm, par
38、 exemple Whatman 934AH 1) . 5.10 Colonnes dimmunoaffinit, dune capacit de chargement W 2 g de zaralnone et prsentant une rcupration W 85 %. ZearalaTest 1)format standard ou WB (wide bore; recommand pour limiter les risques de colmatage)et EASI-EXTRACT 1) . 5.11 Agitateur, orbital ou manuel, ou quiva
39、lent. 5.12 Seringues en plastique, dune capacit de 5 ml. 5.13 Filtres pour seringue jetables, en difluorure de polyvinyle (PVDF), de porosit 0,45 m et de diamtre 13 mm. 5.14 Systme de filtration des solvants: tout matriel de filtration en verre compatible avec un filtre de 47 mm de diamtre ainsi quu
40、n filtre en nylon (polyamide) ou en polyttrafluorothylne (PTFE) de 47 mm de diamtre et dune porosit de 0,45 m. 5.15 Systme CLHP, se composant des lments suivants: 5.15.1 Pompe, exempte dimpulsions, dune capacit de dbit allant de 0,5 ml/min 1,5 ml/min. 5.15.2 Systme dinjection, manuel ou via un chant
41、illonneur automatique, muni dune boucle permettant de raliser des injections de 100 l. 5.15.3 Colonne analytique, C 184 m ou 5 m, 150 mm 4 mm; par exemple: Waters Nova-Pak C 181) , Inertsil ODS-3 1) , Lichrospher 100-RP-18 1) , ACE 3 C 181) , Waters Symmetry Shield RP18 1)et Hypersil ODS/BDS 1) . 1)
42、 Cest un exemple de produit appropri disponible dans le commerce. Cette information est donne pour la commodit des utilisateurs de la prsente Norme internationale et ne signifie nullement que lISO approuve ou recommande lemploi exclusif du produit ainsi dsign. Des produits quivalents peuvent tre uti
43、liss sil est dmontr quils conduisent aux mmes rsultats. ISO 17372:2008(F) ISO 2008 Tous droits rservs 5 5.15.4 Dtecteur fluorimtrique, permettant deffectuer des mesures avec des longueurs donde dexcitation de 236 nm et de 274 nm, et une mission 440 nm (dtecteur longueur donde variable) ou 418 nm (dt
44、ecteur quip dun filtre dmission). 5.15.5 Intgrateur ou logiciel PC. 5.15.6 Dtecteur barrette de diodes, facultatif. 5.16 Filtres en microfibres de verre, dun diamtre de 21 mm, par exemple Whatman GF/D 1) . 5.17 Rservoirs, en polypropylne, pouvant tre fixs sur la partie suprieure des colonnes dimmuno
45、affinit, dune capacit de 20 ml et de diamtre intrieur 20 mm. Un adaptateur peut savrer ncessaire. 5.18 Fritts, pour les rservoirs (5.17), dun diamtre de 20 mm et dune porosit de 20 m. 5.19 Tamis, conforme aux prescriptions de lISO 565. 5.20 vaporateur azote, avec bain pouvant tre maintenu une tempra
46、ture de 50 C 5 C. 5.21 Mlangeur vortex. 6 chantillonnage Il convient que le laboratoire reoive un chantillon rellement reprsentatif, qui nait t ni endommag ni modifi lors du transport ou du stockage. Lchantillonnage ne fait pas partie de la mthode spcifie dans la prsente Norme internationale. Une mt
47、hode dchantillonnage recommande est indique dans lISO 6497 1 . Il est recommand de conserver les chantillons ltat congel, de manire viter que les concentrations en mycotoxines ne varient avec la croissance des champignons producteurs. 7 Prparation de lchantillon pour essai Prparer lchantillon pour essai conformment lISO 6498. Broyer lintgralit de lchantillon de laboratoire, de sorte quil passe en totalit trave
