1、Lait Dnombrement bactrien Protocole pour lvaluation des mthodes alternatives Milk Bacterial count Protocol for the evaluation of alternative methods NORME INTERNATIONALE Premire dition 2013-06-01 ISO et FIL 2013 ISO 16297 FIL 161 Numros de rfrence ISO 16297:2013(F) FIL 161:2013(F) ISO 16297:2013(F)
2、FIL 161:2013(F) ii ISO et FIL 2013 Tous droits rservs DOCUMENT PROTG PAR COPYRIGHT ISO/FIL 2013 Droits de reproduction rservs. Sauf indication contraire, aucune partie de cette publication ne peut tre reproduite ni utilise sous quelque forme que ce soit et par aucun procd, lectronique ou mcanique, y
3、 compris la photocopie, laffichage sur linternet ou sur un Intranet, sans autorisation crite pralable. Les demandes dautorisation peuvent tre adresses lISO ou la FIL, lune ou lautre des adresses ci-aprs, ou au comit membre de lISO dans le pays du demandeur. ISO copyright office International Dairy F
4、ederation Case postale 56 CH-1211 Geneva 20 Silver Building Bd Auguste Reyers 70/B B-1030 Brussels Tel. + 41 22 749 01 11 Tel. + 32 2 733 98 88 Fax + 41 22 749 09 47 Fax + 32 2 733 04 13 E-mail copyrightiso.org E-mail infofil-idf.org Web www.iso.org Web www.fil-idf.org Publi en Suisse ISO 16297:2013
5、(F) FIL 161:2013(F) ISO et FIL 2013 Tous droits rservs iii Sommaire Page Avant-propos iv Introduction vi 1 Domaine dapplication . 1 2 Rfrences normatives . 1 3 T ermes et dfinitions . 1 4 Transformation des rsultats . 1 5 Caractristiques dune mthode alternative . 2 5.1 Description de la mthode value
6、r . 2 5.2 Plage de mesure . 2 5.3 Contamination dun chantillon sur lautre . 4 5.4 Stabilit 6 5.5 Fidlit . 7 6 Mthode alternative utilise comme estimation de la mthode de rfrence.7 6.1 valuation des facteurs affectant lestimation . 8 6.2 Protocole dessai 8 6.3 Calculs . 8 6.4 Caractristiques de la mt
7、hode alternative exprimes dans les units de la mthode de rfrence 11 7 valuation des caractristiques obtenues 12 Annexe A (informative) Expr ession des par amtr es de fidlit .13 Bibliographie .15 ISO 16297:2013(F) Avant-propos LISO (Organisation internationale de normalisation) est une fdration mondi
8、ale dorganismes nationaux de normalisation (comits membres de lISO). Llaboration des Normes internationales est en gnral confie aux comits techniques de lISO. Chaque comit membre intress par une tude a le droit de faire partie du comit technique cr cet effet. Les organisations internationales, gouve
9、rnementales et non gouvernementales, en liaison avec lISO participent galement aux travaux. L ISO collabore troitement avec la Commission lectrotechnique internationale (CEI) en ce qui concerne la normalisation lectrotechnique. Les Normes internationales sont rdiges conformment aux rgles donnes dans
10、 les Directives ISO/CEI, Partie 2. La tche principale des comits techniques est dlaborer les Normes internationales. Les projets de Normes internationales adopts par les comits techniques sont soumis aux comits membres pour vote. Leur publication comme Normes internationales requiert lapprobation de
11、 75 % au moins des comits membres votants. Lattention est appele sur le fait que certains des lments du prsent document peuvent faire lobjet de droits de proprit intellectuelle ou de droits analogues. LISO ne saurait tre tenue pour responsable de ne pas avoir identifi de tels droits de proprit et av
12、erti de leur existence. LISO 16297|FIL 161 a t labore par le comit technique ISO/TC 34, Produits alimentaires, sous-comit SC 5, Lait et produits laitiers et par la Fdration internationale du lait (FIL). Elle est publie conjointement par lISO et la FIL. FIL 161:2013(F) iv ISO et FIL 2013 Tous droits
13、rservs ISO 16297:2013(F) Avant-propos La FIL (Fdration internationale du lait) est une organisation sans but lucratif reprsentant le secteur laitier mondial. Les membres de la FIL se composent des comits nationaux dans chaque pays membre et des associations laitires rgionales avec lesquelles la FIL
14、a sign des accords de coopration. Tout membre de la FIL a le droit de faire partie des comits permanents de la FIL auxquels sont confis les travaux techniques. La FIL collabore avec lISO pour llaboration de mthodes normalises danalyse et dchantillonnage du lait et des produits laitiers. La tche prin
15、cipale des comits permanents est dlaborer des Normes internationales. Les projets de Normes internationales adopts par les comits permanents sont soumis aux comits nationaux pour approbation avant publication en tant que Norme internationale. La publication comme Norme internationale requiert lappro
16、bation de 50 % au moins des comits nationaux de la FIL votants. Lattention est appele sur le fait que certains des lments du prsent document peuvent faire lobjet de droits de proprit intellectuelle ou de droits analogues. La FIL ne saurait tre tenue pour responsable de ne pas avoir identifi de tels
17、droits de proprit et averti de leur existence. LISO 16297|FIL 161 a t labore par la Fdration internationale du lait (FIL) et le comit technique ISO/TC 34, Produits alimentaires, sous-comit SC 5, Lait et produits laitiers. Elle est publie conjointement par la FIL et lISO. Lensemble des travaux a t co
18、nfi lquipe daction mixte ISO-FIL (S07) du comit permanent charg des Statistiques et lautomatisation, sous la conduite de son chef de projet, Mme. I. Andersson (SE). Cette premire dition de lISO 16297|FIL 161 annule et remplace la FIL 161A:1995, qui a fait lobjet dune rvision technique. FIL 161:2013(
19、F) ISO et FIL 2013 Tous droits rservs v ISO 16297:2013(F) Introduction En microbiologie, il convient que tout mesurage quantitatif tienne compte du fait que ltat microbiologique dans un chantillon exige dtre considr comme un point parmi les coordonnes dun systme multidimensionnel, qui doit tre proje
20、t sur lchelle unidimensionnelle de la mthode applique, cest- dire le dnombrement sur bote, la cytomtrie de flux. Les aspects tels que la flore (types et nombres de micro-organismes ainsi que leur distribution), la phase de croissance, les dommages subltaux, lactivit et lhistoire mtaboliques, influen
21、cent un degr plus ou moins lev tout paramtre mesur. Il est vident que toute projection dune situation n-dimensionnelle sur une chelle unidimensionnelle est une reprsentation plutt limite de la situation relle. cet gard, il faut sincliner devant linvitable, quelle que soit la mthode de mesure prfre.
22、Dans la prsente Norme internationale, la mthode de rfrence (ou officielle ou dancrage) dsigne une mthode internationalement reconnue par les experts, utilise dans la lgislation ou dans le cadre dun accord entre les parties. Il est exig que lvaluation dune mthode alternative se rfre la mthode de rfre
23、nce et repose sur lexamen dchantillons appropris lusage prvu. FIL 161:2013(F) vi ISO et FIL 2013 Tous droits rservs NORME INTERNATIONALE ISO 16297:2013(F) FIL 161:2013(F) Lait Dnombrement bactrien Protocole pour lvaluation des mthodes alternatives 1 Domaine dapplication La prsente Norme internationa
24、le donne des lignes directrices pour lvaluation de mthodes instrumentales alternatives pour le dnombrement de la flore totale dans le lait cru provenant danimaux de diffrentes espces. NOTE La prsente Norme internationale est considre comme complmentaire lISO 16140 et lISO 8196|FIL 128 (voir lArticle
25、 2 et la Rfrence 1). 2 Rfrences normatives Les documents de rfrence ci-aprs sont indispensables lapplication du prsent document. Pour les rfrences dates, seule ldition cite sapplique. Pour les rfrences non dates, la dernire dition du document de rfrence sapplique (y compris les ventuels amendements)
26、. ISO 5725-1, Exactitude (justesse et fidlit) des rsultats et mthodes de mesure Partie 1: Principes gnraux et dfinitions ISO 5725-2, Exactitude (justesse et fidlit) des rsultats et mthodes de mesure Partie 2: Mthode de base pour la dtermination de la rptabilit et de la reproductibilit dune mthode de
27、 mesure normalise ISO 8196-1|FIL 128-1, Lait Dfinition et valuation de la prcision globale des mthodes alternatives danalyse du lait Partie 1: Attributs analytiques des mthodes alternatives ISO 8196-2|FIL 128-2, Lait Dfinition et valuation de la prcision globale des mthodes alternatives danalyse du
28、lait Partie 2: Calibrage et contrle qualit dans les laboratoires laitiers ISO 16140-1, Microbiologie des aliments - Validation des mthodes Partie 1: Vocabulaire ISO 16140-2, Microbiologie des aliments Validation des mthodes Partie 2: Protocole pour la validation de mthodes alternatives (brevetes) pa
29、r rapport une mthode de rfrence ISO 21187|FIL 196:2004, Lait Mesure quantitative de la qualit bactriologique Lignes directrices pour tablir et vrifier une relation de conversion entre les rsultats de la mthode de routine et les rsultats de la mthode dancrage 3 T ermes et dfinitio ns Pour les besoins
30、 du prsent document, les termes et dfinitions donns dans lISO 8196-1|FIL 128-1 et dans lISO 8196-2|FIL 128-2 sappliquent. Pour les dfinitions de la fidlit, de la rptabilit et de la reproductibilit, voir lISO 5725-1, lISO 5725-2, lISO 8196-1|FIL 128-1 et lISO 16140-1. 4 Transformation des rsultats Un
31、 pralable aux traitements statistiques le plus couramment utilis en valuation de mthodes de mesure est que la distribution des donnes soit assimilable une loi normale. La multiplication exponentielle des micro-organismes entrane gnralement une distribution dissymtrique vers la droite des paramtres m
32、icrobiologiques quantitatifs. Ainsi, une transformation des donnes brutes est en gnral ncessaire pour lobtention dune population normale. Il sagit habituellement dune transformation logarithmique ISO et FIL 2013 Tous droits rservs 1 ISO 16297:2013(F) dcimale ou dune transformation racine carre pour
33、les faibles taux de bactries. La transformation la plus adapte peut tre contrle en comparant les histogrammes. Sauf indication contraire, toutes les statistiques sont ensuite calcules partir des donnes transformes et seuls les rsultats finaux sont retransforms pour donner une ide plus raliste de la
34、situation lutilisateur (voir galement lAnnexe A). 5 Caractristiques dune mthode alternative NOTE Les paramtres indiqus dans le prsent article nont pas besoin dtre valus intgralement pour chaque mthode alternative. Par exemple, la plage de mesure (voir 5.2) de la mthode de lanse calibre est dtermine
35、par lanse ou (les anses) utilise(s). 5.1 Description de la mthode valuer 5.1.1 Description La description de la mthode ltude doit tre conforme la liste de contrle donne en 5.1.2. La majorit des informations figure dans la spcification de la mthode donne par le fournisseur responsable ou par toute au
36、tre source (auteur) de la technique spcifie. 5.1.2 Liste de contrle a) Principe de la mthode. b) Paramtre ou unit. c) Conception technique du mode opratoire de mesure. d) Domaine dapplication: 1) objectif: par exemple recherche, criblage, classement du lait; 2) matrice: par exemple lait cru de vache
37、s. e) Fournisseur(s) de lappareil, des ractifs, des talons. f) Spcification de la mthode donne par le producteur ou lauteur: 1) pralables lchantillonnage (souvent compars au cas de lanalyse de la matire grasse); 2) possibilits de conservation de lchantillon ractif(s), condition(s) de stockage; 3) as
38、pect quantitatif (units: mthode ltude ou mthode de rfrence) et qualitatif (type de micro-organismes concerns) de la mthode; 4) fidlit (dans les units de la mthode ltude ou mthode de rfrence); 5) prcision de lestimation (dans les units de la mthode de rfrence); 6) chantillons par heure; 7) liste des
39、rfrences. 5.2 Plage de mesure 5.2.1 Limit e infrieur e de quantification La limite infrieure de quantification est dfinie comme tant la moyenne du lait sans bactrie plus n-fois son cart-type; en gnral, n = 10. Voir galement lISO 16140-2. FIL 161:2013(F) 2 ISO et FIL 2013 Tous droits rservs ISO 16297
40、:2013(F) Analyser le lait sans bactrie ou ayant une trs faible concentration en bactries. Transformer les donnes en calculant la racine carre partir de chaque rsultat. Calculer la moyenne, x , et lcart- type, s, des rsultats transforms. Calculer la limite infrieure de quantification sous la forme .
41、5.2.2 Limit e suprieur e de quantification La limite suprieure de quantification est dtermine par le rsultat de mesure le plus lev permis par la mthode ou par des limites mthodologiques, par exemple les effets de concidence, limprcision dans la partie suprieure de la plage, le colmatage des filtres.
42、 La concidence a lieu lorsque deux lments ou plus du mesurande sont dtects simultanment et identifis comme tant une seule unit. Par exemple, avec la cytomtrie de flux, si deux cellules bactriennes traversent en mme temps le dtecteur, elles sont dtectes comme tant une seule unit. Leffet de concidence
43、 est suprieur avec des concentrations plus leves dun mesurande. La limite suprieure de quantification est dtermine comme tant la concentration maximale laquelle linstrument reste linaire, conformment 5.2.3. 5.2.3 Linarit du signal de lappareil La relation entre les lectures de linstrument et les val
44、eurs attendues doit tre linaire dans la gamme de dnombrements bactriens concerne. Tout cart la linarit peut provenir de signaux non spcifiques et deffets de concidence. Un contrle de la linarit est dabord effectu visuellement en utilisant des graphiques appropris pour avoir une premire impression du
45、 caractre de la relation. Ds quun cart la linarit apparat de faon vidente, un paramtre quantitatif est calcul pour indiquer si la tendance observe est acceptable ou non. Pour cela, utiliser un lait ayant des dnombrements bactriens levs et dilu en srie avec du lait faible dnombrement bactrien, ce qui
46、 permet dobtenir un jeu dau moins 10 chantillons reprsentant la gamme de concentration concerne. Mesurer tous les chantillons au moins quatre fois et calculer le rsultat moyen pour chaque chantillon. Cela donne la valeur mesure par chantillon. Utiliser les valeurs mesures pour le lait dnombrement le
47、v et le lait faible dnombrement pour calculer les valeurs pour les chantillons intermdiaires partir des rapports de mlange appliqus. Cela donne une valeur attendue pour chaque chantillon. Appliquer ensuite la rgression linaire avec les valeurs attendues pour chaque chantillon, C e , sur laxe des abscisses et avec les valeurs mesures pour chaque chantillon, C meas,sur laxe des ordonnes. Calculer
