1、Numro de rfrence ISO 15089:2000(F) ISO 2000 NORME INTERNATIONALE ISO 15089 Premire dition 2000-03-15 Qualit de leau Lignes directrices relatives aux dosages immunologiques slectifs pour la dtermination des agents de traitement des plantes et des pesticides Water quality Guidelines for selective immu
2、noassays for the determination of plant treatment and pesticide agentsISO 15089:2000(F) PDF Exonration de responsabilit Le prsent fichier PDF peut contenir des polices de caractres intgres. Conformment aux conditions de licence dAdobe, ce fichier peut tre imprim ou visualis, mais ne doit pas tre mod
3、ifi moins que lordinateur employ cet effet ne bnficie dune licence autorisant lutilisation de ces polices et que celles-ci y soient installes. Lors du tlchargement de ce fichier, les parties concernes acceptent de fait la responsabilit de ne pas enfreindre les conditions de licence dAdobe. Le Secrta
4、riat central de lISO dcline toute responsabilit en la matire. Adobe est une marque dpose dAdobe Systems Incorporated. Les dtails relatifs aux produits logiciels utiliss pour la cration du prsent fichier PDF sont disponibles dans la rubrique General Info du fichier; les paramtres de cration PDF ont t
5、 optimiss pour limpression. Toutes les mesures ont t prises pour garantir lexploitation de ce fichier par les comits membres de lISO. Dans le cas peu probable o surviendrait un problme dutilisation, veuillez en informer le Secrtariat central ladresse donne ci-dessous. ISO 2000 Droits de reproduction
6、 rservs. Sauf prescription diffrente, aucune partie de cette publication ne peut tre reproduite ni utilise sous quelque forme que ce soit et par aucun procd, lectronique ou mcanique, y compris la photocopie et les microfilms, sans laccord crit de lISO ladresse ci-aprs ou du comit membre de lISO dans
7、 le pays du demandeur. ISO copyright office Case postale 56 CH-1211 Geneva 20 Tel. + 41 22 749 01 11 Fax. + 41 22 734 10 79 E-mail copyrightiso.ch Web www.iso.ch I mpri menSuis se ii ISO 2000 Tous droits rservsISO 15089:2000(F) ISO 2000 Tous droits rservs iii Sommaire Page Avant-proposiv 1 Domaine d
8、application.1 2 Rfrences normatives .1 3 Termes et dfinitions.1 4 Interfrences 4 5 Principe.4 6 Ractifs .4 7 Appareillage .5 8 chantillonnage et prparation des chantillons.5 9 Mode opratoire.6 10 Critres de validit.8 11 valuation et expression des rsultats .8 12 Fidlit 9 13 Rapport dessai 9 Annexe A
9、 (informative) Organigramme et plan de pipettage11 Annexe B (informative) Rsultats dun essai interlaboratoires13 Bibliographie .14ISO 15089:2000(F) iv ISO 2000 Tous droits rservs Avant-propos LISO (Organisation internationale de normalisation) est une fdration mondiale dorganismes nationaux de norma
10、lisation (comits membres de lISO). Llaboration des Normes internationales est en gnral confie aux comits techniques de lISO. Chaque comit membre intress par une tude a le droit de faire partie du comit technique cr cet effet. Les organisations internationales, gouvernementales et non gouvernementale
11、s, en liaison avec lISO participent galement aux travaux. LISO collabore troitement avec la Commission lectrotechnique internationale (CEI) en ce qui concerne la normalisation lectrotechnique. Les Normes internationales sont rdiges conformment aux rgles donnes dans les Directives ISO/CEI, Partie 3.
12、Les projets de Normes internationales adopts par les comits techniques sont soumis aux comits membres pour vote. Leur publication comme Normes internationales requiert lapprobation de 75 % au moins des comits membres votants. Lattention est appele sur le fait que certains des lments de la prsente No
13、rme internationale peuvent faire lobjet de droits de proprit intellectuelle ou de droits analogues. LISO ne saurait tre tenue pour responsable de ne pas avoir identifi de tels droits de proprit et averti de leur existence. La Norme internationale ISO 15089 a t labore par le comit technique ISO/TC 14
14、7, Qualit de leau, sous-comit SC 2, Mthodes physiques, chimiques et biochimiques. Les annexes A et B de la prsente Norme internationale sont donnes uniquement titre dinformation.NORME INTERNATIONALE ISO 15089:2000(F) ISO 2000 Tous droits rservs 1 Qualit de leau Lignes directrices relatives aux dosag
15、es immunologiques slectifs pour la dtermination des agents de traitement des plantes et des pesticides 1 Domaine dapplication La prsente Norme internationale spcifie des lignes directrices pour lanalyse quantitative slective, par des dosages immunologiques, des produits chimiques utiliss dans lenvir
16、onnement, tels que les pesticides (y compris les insecticides) ou leurs mtabolites prsents dans leau potable, leau souterraine et leau de surface. Le prsent mode opratoire pour lanalyse des pesticides dans leau potable est applicable des concentrations en masseW 0,05 g/l. En consquence, il convient
17、que, dans ce cas, la limite de dtermination soitu 0,05 g/l. 2 Rfrences normatives Les documents normatifs suivants contiennent des dispositions qui, par suite de la rfrence qui y est faite, constituent des dispositions valables pour la prsente Norme internationale. Pour les rfrences dates, les amend
18、ements ultrieurs ou les rvisions de ces publications ne sappliquent pas. Toutefois, les parties prenantes aux accords fonds sur la prsente Norme internationale sont invites rechercher la possibilit dappliquer les ditions les plus rcentes des documents normatifs indiqus ci-aprs. Pour les rfrences non
19、 dates, la dernire dition du document normatif en rfrence sapplique. Les membres de lISO et de la CEI possdent le registre des Normes internationales en vigueur. ISO 5667-1:1980, Qualit de leau chantillonnage Partie 1: Guide gnral pour ltablissement des programmes dchantillonnage. ISO 5667-2:1991, Q
20、ualit de leau chantillonnage Partie 2: Guide gnral sur les techniques dchantillonnage. ISO 5667-3:1994, Qualit de leau chantillonnage Partie 3: Guide gnral pour la conservation et la manipulation des chantillons. ISO/TR 13530, Qualit de leau Guide de contrle qualit analytique pour lanalyse de leau.
21、3 Termes et dfinitions Pour les besoins de la prsente Norme internationale, les termes et dfinitions suivants sappliquent. 3.1 affinit degr de liaison de lanticorps lanalyte NOTE Le degr est dfini par la constante dquilibre (K) de la raction Ab + H = AbH, o Ab est le site rcepteur de lanticorps et H
22、 = haptne; K est donn par lquation de laction massique K = c AbH /(c Ab c H ).ISO 15089:2000(F) 2 ISO 2000 Tous droits rservs 3.2 analyte substance dterminer 3.3 anticorps protines de srum scrtes par les vertbrs aprs introduction dun antigne dans lorganisme ragissant lagression et qui fixent lantign
23、e ou lhaptne, respectivement, de faon slective NOTE 1 Les anticorps monoclonaux (mAb) sont des populations uniformes danticorps issues du clone dune cellule unique de cellules hybridomes. NOTE 2 Les anticorps polyclonaux (pAb) sont une population mixte danticorps scrte par plusieurs clones de cellul
24、es de plasma. NOTE 3 Les anticorps recombins (rAb) sont produits grce aux techniques de recombinaison en vigueur dans le gnie gntique. 3.4 anticorps conjugu anticorps li par covalence un marqueur tel quune enzyme ou un fluorochrome 3.5 antigne substance qui stimule la production danticorps et qui ra
25、git leur contact 3.6 immunosrum srum sanguin de vertbrs immuniss, obtenu aprs limination des composs cellulaires et des facteurs de coagulation NOTE Il contient gnralement un certain nombre danticorps diffrents qui peuvent prsenter diverses affinits par rapport lantigne/haptne. 3.7 conjugu sur suppo
26、rt sensibilis macromolcule lie lhaptne (galement appele conjugu support dhaptne) et immobilise sur une phase solide NOTE Il est utilis pour lier les sites anticorps non occups par lanalyte. 3.8 dosage immunologique par comptition essai qui permet de dtecter la proportion de sites anticorps ayant t o
27、ccups par lanalyte de lchantillon NOTE Pour cela, un traceur est ajout qui va occuper les sites disponibles de lanticorps, et aprs une nouvelle raction gnrera le signal mesurer. 3.9 raction croise raction dun anticorps ou dun immunosrum avec une substance dont la structure diffre de lanalyte NOTE 1
28、La raction croise dun anticorps ou dun immunosrum avec cette substance est dtermine en comparant les courbes dtalonnage. La courbe de rfrence obtenue avec lanalyte est utilise comme grandeur de rfrence (= raction croise 100 %). La raction croise est gnralement dtermine une concentration inhibitrice
29、CI 50 . La slectivit dun anticorps ou dun immunosrum est inversement proportionnelle aux ractions croises. Un anticorps ou un immunosrum peut respectivement prsenter diverses affinits avec diffrentes substances. Avec une substance donne, la raction croise dun immunosrum peut galement varier au sein
30、de ltendue de mesure. Gnralement, la slectivit dun immunosrum (appele spcificit) est principalement dtermine par la structure de limmunogne. Lorsque les ractions croises sont dues une population mixte danticorps, ce qui est frquent pour un immunosrum, il est admis dliminer les anticorps indsirables
31、par absorbance croise.ISO 15089:2000(F) ISO 2000 Tous droits rservs 3 NOTE 2 Tous les composs (prsents des concentrations importantes) qui prsentent une raction croise donneront lieu des rsultats faux positifs. 3.10 dosage immunoenzymatique EIA analyse immunochimique qui dtecte, laide dun traceur (u
32、n haptne marqueur enzymatique ou un anticorps marqueur enzymatique), loccupation de sites anticorps par lanalyte et qui peut par consquent tre utilise pour dtecter la concentration de lanalyte dans le milieu NOTE La procdure de dtection est fonde sur la mesure de lactivit enzymatique du traceur par
33、conversion du substrat. 3.11 substrat enzymatique substance transforme par lenzyme en produit dtectable par un systme de mesure 3.12 talon par excs talon caractris par une valeur limite de concentration de lanalyte, au-del de laquelle il ne se produit plus de rduction du signal mesur au cours du dos
34、age immunologique 3.13 dosage immunologique par fluorescence procdure de dtection immunochimique applique soit en tant que dosage immunologique avec des substrats ou des produits fluorescents, ou en tant que dosage immunologique avec des traceurs ou des anticorps marqueur fluorescent 3.14 haptne sub
35、stance qui, du fait de son faible poids molculaire, ne peut susciter la formation danticorps moins dtre lie par covalence un immunogne NOTE Les pesticides sont un exemple dhaptnes. 3.15 dosage immunologique htrogne essai ncessitant la sparation des traceurs lis et non lis la phase solide afin de dte
36、cter les sites de lanticorps occups par lanalyte et par voie de consquence la concentration de lanalyte dans lchantillon 3.16 dosage immunologique dosage quantitatif fond sur lattraction de lanalyte/anticorps et qui utilise des traceurs pour la dtection des sites de lanticorps, respectivement libres
37、 ou occups 3.17 immunogne substance qui, aprs injection, dclenche chez un vertbr une raction immunitaire 3.18 concentration inhibitrice CI concentration de lanalyte qui rduit le signal de mesure de ltalon zro (= 100 %) dans le cas de CI 50 5 0%d e sa valeur 3.19 dosage immunologique par luminescence
38、 LIA dosage immunochimique ralis soit en tant que dosage immunologique dtecteur de substrats ou de produits luminescents, soit en tant que dosage immunologique de traceurs marqueur luminescentISO 15089:2000(F) 4 ISO 2000 Tous droits rservs 3.20 immunoessai en phase solide dosage immunologique htrogn
39、e qui utilise (selon le type dessai) des anticorps ou des conjugus sur support sensibiliss immobiliss sur une phase solide NOTE Les deux types dessai, lorsquils utilisent des traceurs marqueur enzymatique, sont plus gnralement connus sous le nom de technique ELISA (enzyme-linked immunosorbent assay)
40、. 3.21 traceur haptne (ou antigne) marqu ou anticorps marqu qui, dans le cas de dosage immunologique par comptition, est utilis pour dtecter le pourcentage de sites anticorps non occups par lanalyte 3.22 talon zro talon sans analyte (blanc de mthode) utilis pour ltalonnage 4 Interfrences Les interfr
41、ences ont pour origine un chantillonnage incorrect, d par exemple au choix des quipements ou des matriaux qui adsorbent ou librent les substances analyser. Les conditions de dosage, par exemple le pH ou les composs de lchantillon tels que les ions mtalliques, les acides humiques, la salinit et les s
42、olvants, qui provoquent des interfrences avec les composs de lessai (par exemple des effets de matrice), peuvent affecter lanalyse. Linfluence des effets de matrice peut tre value en dopant lchantillon avec des quantits connues de lanalyte. 5P r i n c i p e Les dosages immunologiques sont des mthode
43、s qui utilisent des anticorps produits par rapport des analytes donns ou des groupes danalytes dfinis comme des sondes biochimiques pour la quantification des concentrations danalytes. Ces dosages sont particulirement utiles comme essai de screening. Tous les dosages immunologiques pour la dtection
44、des haptnes sont fonds sur le principe du dosage immunologique par comptition. Les dosages concernant les pesticides ont fait lobjet de rapports (voir les rfrences 1 4 dans la bibliographie). Une procdure type, titre dexemple dEIA, est dcrite ci-aprs. La variante en phase solide requiert soit des an
45、ticorps immobiliss et des traceurs haptnes dissous variante a), dosage immunologique direct, soit un conjugu sur support sensibilis et des traceurs anticorps dissous variante b), dosage immunologique indirect en rapport constant. Les anticorps sont appliqus en quantit limite. Par consquent, les comp
46、osants non lis la phase solide sensibilise peuvent tre limins par lavage avant la dtection finale. Ceci comprend galement la plupart des effets de matrice interfrents. Plus les molcules traceurs sont lies, plus la concentration de lanalyte dans lchantillon est faible. Limmobilisation peut tre obtenu
47、e par adsorption passive ou par fixation par liaison covalente aux groupes fonctionnels de la phase solide. Ltalonnage est ralis avec des solutions de concentrations danalyte connues. 6 Ractifs 6.1 Gnralits Utiliser des ractifs et de leau de haute puret (par exemple pour analyse des rsidus). Des informations relatives, respectivement, au type et lorigine des anticorps ou des immunosrums, ainsi quaux ractions croises doivent t
