1、 Numro de rfrence ISO 15088:2007(F) ISO 2007NORME INTERNATIONALE ISO 15088 Premire dition 2007-10-01 Qualit de leau Dtermination de la toxicit aigu des eaux rsiduaires vis-vis des ufs de poisson-zbre (Danio rerio) Water quality Determination of the acute toxicity of waste water to zebrafish eggs (Da
2、nio rerio) ISO 15088:2007(F) PDF Exonration de responsabilit Le prsent fichier PDF peut contenir des polices de caractres intgres. Conformment aux conditions de licence dAdobe, ce fichier peut tre imprim ou visualis, mais ne doit pas tre modifi moins que lordinateur employ cet effet ne bnficie dune
3、licence autorisant lutilisation de ces polices et que celles-ci y soient installes. Lors du tlchargement de ce fichier, les parties concernes acceptent de fait la responsabilit de ne pas enfreindre les conditions de licence dAdobe. Le Secrtariat central de lISO dcline toute responsabilit en la matir
4、e. Adobe est une marque dpose dAdobe Systems Incorporated. Les dtails relatifs aux produits logiciels utiliss pour la cration du prsent fichier PDF sont disponibles dans la rubrique General Info du fichier; les paramtres de cration PDF ont t optimiss pour limpression. Toutes les mesures ont t prises
5、 pour garantir lexploitation de ce fichier par les comits membres de lISO. Dans le cas peu probable o surviendrait un problme dutilisation, veuillez en informer le Secrtariat central ladresse donne ci-dessous. DOCUMENT PROTG PAR COPYRIGHT ISO 2007 Droits de reproduction rservs. Sauf prescription dif
6、frente, aucune partie de cette publication ne peut tre reproduite ni utilise sous quelque forme que ce soit et par aucun procd, lectronique ou mcanique, y compris la photocopie et les microfilms, sans laccord crit de lISO ladresse ci-aprs ou du comit membre de lISO dans le pays du demandeur. ISO cop
7、yright office Case postale 56 CH-1211 Geneva 20 Tel. + 41 22 749 01 11 Fax. + 41 22 749 09 47 E-mail copyrightiso.org Web www.iso.org Publi en Suisse ii ISO 2007 Tous droits rservsISO 15088:2007(F) ISO 2007 Tous droits rservs iiiSommaire Page Avant-propos .iv Introduction.v 1 Domaine dapplication 1
8、2 Rfrences normatives.1 3 Termes et dfinitions 2 4 Interfrences 3 5 Principe.3 6 Ractifs.3 7 Appareillage .4 8 Mode opratoire.4 9 Dtermination des paramtres toxicologiques 7 10 Critres de validit 9 11 Dtermination de LID egg 9 12 Expression des rsultats9 13 Rapport dessai9 14 Reproductibilit .10 Ann
9、exe A (informative) Schma de reprsentation et de rpartition des ufs sur les microplaques.11 Bibliographie.12 ISO 15088:2007(F) iv ISO 2007 Tous droits rservsAvant-propos LISO (Organisation internationale de normalisation) est une fdration mondiale dorganismes nationaux de normalisation (comits membr
10、es de lISO). Llaboration des Normes internationales est en gnral confie aux comits techniques de lISO. Chaque comit membre intress par une tude a le droit de faire partie du comit technique cr cet effet. Les organisations internationales, gouvernementales et non gouvernementales, en liaison avec lIS
11、O participent galement aux travaux. LISO collabore troitement avec la Commission lectrotechnique internationale (CEI) en ce qui concerne la normalisation lectrotechnique. Les Normes internationales sont rdiges conformment aux rgles donnes dans les Directives ISO/CEI, Partie 2. La tche principale des
12、 comits techniques est dlaborer les Normes internationales. Les projets de Normes internationales adopts par les comits techniques sont soumis aux comits membres pour vote. Leur publication comme Normes internationales requiert lapprobation de 75 % au moins des comits membres votants. Lattention est
13、 appele sur le fait que certains des lments du prsent document peuvent faire lobjet de droits de proprit intellectuelle ou de droits analogues. LISO ne saurait tre tenue pour responsable de ne pas avoir identifi de tels droits de proprit et averti de leur existence. LISO 15088 a t labore par le comi
14、t technique ISO/TC 147, Qualit de leau, sous-comit SC 5, Mthodes biologiques. ISO 15088:2007(F) ISO 2007 Tous droits rservs vIntroduction Les poissons jouent un rle majeur dans la chane alimentaire aquatique et sont des consommateurs de premier ordre (souvent situs en bout de chane) qui remplissent
15、dimportantes fonctions de rgulation des cosystmes aquatiques. Les poissons sont des organismes reconnus dans les stratgies dessais concernant les diffrents niveaux trophiques. Les ufs de poisson-zbre (Danio rerio Hamilton-Buchanan) sont utiliss comme matriau dessai. Les poissons-zbres appartiennent
16、la famille des cyprinids (carpes) dans le groupe des ostichtyens (tlostens). Ils sont faciles lever et produisent tout au long de lanne des ufs transparents et non collants (ayant un diamtre denviron 1 mm). Leur dveloppement embryonnaire est parfaitement connu. Le poissons-zbre constitue lun des mod
17、les de recherche les plus importants dans le domaine de la biologie du dveloppement des vertbrs et fait partie des espces recommandes dans les Lignes directrices 203, 204 et 210 de lOCDE. Les constituants de leau et les effluents peuvent avoir un impact sur le dveloppement des ufs de poissons fconds
18、. La mort des embryons et certaines anomalies dfinies du dveloppement embryonnaire qui aboutissent finalement la mort sont considrs comme des effets. NORME INTERNATIONALE ISO 15088:2007(F) ISO 2007 Tous droits rservs 1Qualit de leau Dtermination de la toxicit aigu des eaux rsiduaires vis-vis des ufs
19、 de poisson-zbre (Danio rerio) AVERTISSEMENT Les personnes qui utilisent la prsente Norme internationale doivent parfaitement connatre les pratiques de travail habituelles des laboratoires. La prsente Norme internationale na pas pour but de traiter tous les problmes de scurit ventuellement lis son u
20、tilisation. Lutilisateur est tenu dtablir des pratiques de scurit et dhygine adaptes et de sassurer que les conditions rglementaires nationales sont respectes. IMPORTANT Les essais entrant dans le cadre de la prsente Norme internationale doivent imprativement tre raliss par des personnes ayant une q
21、ualification approprie. Lors de lapplication de la prsente Norme internationale, il est ncessaire de dterminer systmatiquement sil convient dtablir des conditions dessai supplmentaires, ainsi que leur tendue. 1 Domaine dapplication La prsente Norme internationale spcifie une mthode pour dterminer le
22、s degrs de dilution ou les concentrations deaux rsiduaires produisant un effet toxique aigu vis-vis des ufs de poisson en lespace de 48 h. La prsente Norme internationale est galement applicable aux eaux rsiduaires municipales traites et aux effluents industriels. NOTE La prsente Norme international
23、e a t labore dans le but de remplacer lessai de toxicit aigu vis-vis des poissons. Applique aux eaux rsiduaires, elle donne des rsultats identiques ou similaires ceux obtenus avec lessai de toxicit aigu sur poisson (par exemple lISO 7346-1 et lISO 7346-2). Si elle est utilise pour des substances ind
24、ividuelles, il convient de tenir compte des ventuelles diffrences de sensibilit entre les deux systmes dessai. 2 Rfrences normatives Les documents de rfrence suivants sont indispensables pour lapplication du prsent document. Pour les rfrences dates, seule ldition cite sapplique. Pour les rfrences no
25、n dates, la dernire dition du document de rfrence sapplique (y compris les ventuels amendements). ISO 5667-16, Qualit de leau chantillonnage Partie 16: Lignes directrices pour les essais biologiques des chantillons ISO 5814, Qualit de leau Dosage de loxygne dissous Mthode lectrochimique la sonde ISO
26、 7346-1, Qualit de leau Dtermination de la toxicit aigu ltale de substances vis-vis dun poisson deau douce Brachydanio rerio Hamilton-Buchanan (Tlostei, Cyprinidae) Partie 1: Mthode statique ISO 7346-2, Qualit de leau Dtermination de la toxicit aigu ltale de substances vis-vis dun poisson deau douce
27、 Brachydanio rerio Hamilton-Buchanan (Tlostei, Cyprinidae) Partie 2: Mthode semi-statique ISO 15088:2007(F) 2 ISO 2007 Tous droits rservs3 Termes et dfinitions Pour les besoins du prsent document, les termes et dfinitions suivants sappliquent. 3.1 lot tmoin eau de dilution contenant des ufs de poiss
28、on fconds 3.2 niveau de dilution D inverse de la valeur de la fraction volumique des eaux rsiduaires dans leau de dilution dans laquelle lessai est ralis EXEMPLE 250 ml deaux rsiduaires dans un volume total de 1 000 ml (fraction volumique de 25 %) reprsentent un niveau de dilution D = 4. NOTE Voir l
29、ISO 5667-16. 3.3 CE 50concentration laquelle un effet conforme au critre dessai est observ sur 50 % des organismes NOTE Dans la prsente Norme internationale, CL 50est la concentration lthale laquelle 50 % des organismes sont morts. 3.4 uf de poisson terme gnrique dsignant tous les stades de dveloppe
30、ment dune cellule duf ( lintrieur du chorion) dans la prsente Norme internationale NOTE Si ncessaire, on utilise pour ce terme les qualificatifs suivants: non fcond, immdiatement aprs la ponte; frachement fcond, stade de dveloppement compris entre 4 et 128 cellules; embryon, si lembryon en cours de
31、dveloppement est visible lintrieur de luf avant lclosion. 3.5 plus faible dilution sans effet facteur de dilution LID niveau de dilution D (3.2) pour lequel aucune inhibition nest observe ou bien uniquement des effets ne dpassant pas la variabilit spcifique lessai 3.6 LID eggniveau de dilution pour
32、lequel aucune inhibition nest observe dans un lot dessai dans lequel au moins 90 % des ufs de poissons ne prsentent aucun effet dcrit dans la prsente Norme internationale NOTE Voir Articles 11 et 12 et Figure 2. 3.7 lot dessai dilutions dfinies contenant des ufs de poisson fconds ISO 15088:2007(F) I
33、SO 2007 Tous droits rservs 34 Interfrences Dans le cas deaux rsiduaires fortement colores et/ou troubles, la diffrenciation des ufs peut savrer difficile. Lordre de prparation est alors modifi de la manire suivante avant de dbuter lexposition: ponte; diffrenciation des ufs fconds et non fconds (8.2.
34、2); transfert dans leau de dilution (7.10, cristallisoirs); transfert dans des microplaques sans exposition pralable. Lors du transfert dans les microplaques, il convient de minimiser lerreur de dilution due leau adhrente. 5 Principe Dans une srie de dilutions, les eaux rsiduaires sont mlanges leau
35、de dilution pour obtenir des niveaux de dilution, D, dfinis. Aprs lexposition des ufs de poisson fconds aux lots dessai pendant 48 h dans des microplaques, on dtermine la limite de dilution (LID) laquelle aucun effet toxique aigu napparat. 26 C, les embryons closent aprs une priode comprise entre 72
36、 h et 96 h. La dure de lessai est de 48 h. En tant que lot tmoin positif, une solution de 3,7 mg/l de substance de rfrence de 3,4- dichloroaniline est soumise lessai avec 10 ufs fconds (8.3). La prsente Norme internationale peut galement tre utilise pour calculer des valeurs de CE 50bases sur des re
37、lations dose-rponse exprimes en pourcentage deaux rsiduaires, sans modifier la conception de lessai. 6 Ractifs Dans la mesure du possible, utiliser uniquement des produits chimiques de qualit analytique reconnue. 6.1 Eau, dminralise ou de puret quivalente (conductivit 10 S/cm). 6.2 Acide chlorhydriq
38、ue, par exemple c(HCl) = 0,1 mol/l. 6.3 Solution dhydroxyde de sodium, par exemple c(NaOH) = 0,1 mol/l. 6.4 Substance de rfrence 3,4-dichloroaniline, solution mre, (C 6 H 5 Cl 2 N) = 100 mg/l. Verser 0,05 g de dichloroaniline dans 500 ml deau de dilution (6.5) et agiter pendant 24 h. Ajuster le pH 7
39、,0. Conserver cette solution mre au rfrigrateur, labri de la lumire, pendant une dure maximale de 6 mois. Une concentration de 3,7 mg/l est utilise comme lot tmoin positif (8.3). 6.5 Eau de dilution Utiliser de leau de dilution normalise, tel que spcifi dans lISO 7346-1 et lISO 7346-2. 294,0 mg/l de
40、 chlorure de calcium dihydrat, CaCl 2 ,2 H 2 O; 123,3 mg/l de sulfate de magnsium heptahydrat, MgSO 4 ,7 H 2 O; 63,0 mg/l dhydrognocarbonate de sodium, NaHCO 3 ; 5,5 mg/l de chlorure de potassium, KCl. ISO 15088:2007(F) 4 ISO 2007 Tous droits rservsAvant dajouter la substance de rfrence (6.4) ou les
41、 chantillons deaux rsiduaires soumettre essai, quilibrer leau de dilution avec de lair jusqu 100 % de saturation en oxygne 26 C 1 C. 7 Appareillage 7.1 Microscope invers et/ou binoculaire, ayant un facteur de grossissement minimal de 30. 7.2 Rcipients dexposition, ayant un volume de 2,5 ml 5 ml, fon
42、d plat, par exemple des microplaques usage unique en polystyrne (24 puits). 7.3 Film adhsif, pour recouvrir les microplaques. 7.4 Incubateur rgul en temprature ou climatisation de la pice 26 C 1 C, clairage contrl pendant la conservation des poissons parents et lexposition des ufs. 7.5 pH-mtre. 7.6
43、Sonde oxygne, voir ISO 5814. 7.7 Bacs de ponte en matire plastique inerte ou en verre pour recueillir les ufs pendant la ponte. 7.8 Plantes artificielles en verre ou en matire plastique. 7.9 Pipette, pour transfrer les ufs. 7.10 Cristallisoirs. 7.11 Verrerie pour prparer les niveaux de concentration
44、 et leau de dilution. 7.11.1 Fioles jauges. 7.11.2 prouvettes gradues. 7.11.3 Pipettes gradues. 7.11.4 Botes de Petri. 7.11.5 Bcher, par exemple de 150 ml. 7.12 Aquariums pour conserver les poissons adultes. 7.13 Thermomtre de laboratoire. 8 Mode opratoire 8.1 Conservation des poissons et production
45、 des ufs 8.1.1 Gnralits Pour la production des ufs, utiliser uniquement des reproducteurs apparemment en bonne sant, ne prsentant aucune maladie extrieurement visible et gs de 6 mois 24 mois. Ne donner aux poissons parents utiliss pour lessai aucun mdicament ( caractre aigu ou prophylactique) pendan
46、t les 6 mois qui prcdent immdiatement la ponte. ISO 15088:2007(F) ISO 2007 Tous droits rservs 58.1.2 Aquariums Conserver les reproducteurs dans des aquariums offrant un espace de nage suffisant (cest-dire 1 l par poisson). 8.1.3 Eau pour la conservation et llevage des poissons Utiliser leau de dilut
47、ion normalise (6.5). Il convient dobtenir une saturation en oxygne au moins gale 80 % et de maintenir une temprature de 26 C 1 C. Pour la conservation et llevage des poissons, de leau potable adapte (ne contenant par exemple aucun agent dsinfectant) peut tre utilise en remplacement. 8.1.4 Alimentation Il convient de nourrir les poissons en leur distribuant de la nourriture sche pour poissons daqua
