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    ISO 14637-2004 Milk - Determination of urea content - Enzymatic method using difference in pH (Reference method)《牛奶 脲含量的测定 利用pH值差异的酶催化方法(参照法)》.pdf

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    ISO 14637-2004 Milk - Determination of urea content - Enzymatic method using difference in pH (Reference method)《牛奶 脲含量的测定 利用pH值差异的酶催化方法(参照法)》.pdf

    1、 Numros de rfrence ISO 14637:2004(F) FIL 195:2004(F) ISO et FIL 2004NORME INTERNATIONALE ISO 14637 FIL 195 Premire dition 2004-10-15Lait Dtermination de la teneur en ure Mthode enzymatique par mesurage de pH diffrentiel (Mthode de rfrence) Milk Determination of urea content Enzymatic method using di

    2、fference in pH (Reference method) ISO 14637:2004(F) FIL 195:2004(F) PDF Exonration de responsabilit Le prsent fichier PDF peut contenir des polices de caractres intgres. Conformment aux conditions de licence dAdobe, ce fichier peut tre imprim ou visualis, mais ne doit pas tre modifi moins que lordin

    3、ateur employ cet effet ne bnficie dune licence autorisant lutilisation de ces polices et que celles-ci y soient installes. Lors du tlchargement de ce fichier, les parties concernes acceptent de fait la responsabilit de ne pas enfreindre les conditions de licence dAdobe. Le Secrtariat central de lISO

    4、 et la FIL dclinent toute responsabilit en la matire. Adobe est une marque dpose dAdobe Systems Incorporated. Les dtails relatifs aux produits logiciels utiliss pour la cration du prsent fichier PDF sont disponibles dans la rubrique General Info du fichier; les paramtres de cration PDF ont t optimis

    5、s pour limpression. Toutes les mesures ont t prises pour garantir lexploitation de ce fichier par les comits membres de lISO et les comits nationaux de la FIL. Dans le cas peu probable o surviendrait un problme dutilisation, veuillez en informer le Secrtariat central de lISO ladresse donne ci-dessou

    6、s. ISO et FIL 2004 Droits de reproduction rservs. Sauf prescription diffrente, aucune partie de cette publication ne peut tre reproduite ni utilise sous quelque forme que ce soit et par aucun procd, lectronique ou mcanique, y compris la photocopie et les microfilms, sans laccord crit soit de lISO, s

    7、oit de la FIL, lune ou lautre des adresses ci-aprs. ISO copyright office Fdration Internationale de Laiterie Case postale 56 CH-1211 Geneva 20 Diamant Building Boulevard Auguste Reyers 80 B-1030 Bruxelles Tel. + 41 22 749 01 11 Tel. + 32 2 733 98 88 Fax + 41 22 749 09 47 Fax + 32 2 733 04 13 E-mail

    8、copyrightiso.org E-mail infofil-idf.org Web www.iso.org Web www.fil-idf.org Version franaise parue en 2006 Publi en Suisse ii ISO et FIL 2004 Tous droits rservsISO 14637:2004(F) FIL 195:2004(F) ISO et FIL 2004 Tous droits rservs iii Sommaire Page Avant-propos. iv 1 Domaine dapplication 1 2 Termes et

    9、 dfinitions 1 3 Principe 1 4 Ractifs 1 4.1 Ractifs pour la dtermination de lure 1 4.2 Ractifs pour le nettoyage et lentretien des lectrodes 2 5 Appareillage 3 6 chantillonnage 3 7 Prparation de lchantillon dessai 3 8 Mode opratoire 3 8.1 Gnralits 3 8.2 Dtermination du blanc 3 8.3 Calibrage 4 8.4 Con

    10、trle du calibrage. 5 8.5 Dtermination 5 8.6 Contrle de la stabilit . 5 8.7 Contrle de la contamination de llectrode 5 8.8 Nettoyage. 5 9 Entretien des lectrodes 6 9.1 Rgnration . 6 9.2 Rgnration forte 6 10 Calcul et expression des rsultats 6 10.1 Calcul . 6 10.2 Expression des rsultats . 6 11 Fidlit

    11、 . 6 11.1 Essai interlaboratoires . 6 11.2 Rptabilit 7 11.3 Reproductibilit. 7 12 Rapport dessai . 7 Annexe A (informative) Appareillage de mesure de pHmtrie diffrentielle 8 Annexe B (informative) Rsultat des essais interlaboratoires 9 Bibliographie 11 ISO 14637:2004(F) FIL 195:2004(F) iv ISO et FIL

    12、 2004 Tous droits rservsAvant-propos LISO (Organisation internationale de normalisation) est une fdration mondiale dorganismes nationaux de normalisation (comits membres de lISO). Llaboration des Normes internationales est en gnral confie aux comits techniques de lISO. Chaque comit membre intress pa

    13、r une tude a le droit de faire partie du comit technique cr cet effet. Les organisations internationales, gouvernementales et non gouvernementales, en liaison avec lISO participent galement aux travaux. LISO collabore troitement avec la Commission lectrotechnique internationale (CEI) en ce qui conce

    14、rne la normalisation lectrotechnique. Les Normes internationales sont rdiges conformment aux rgles donnes dans les Directives ISO/CEI, Partie 2. La tche principale des comits techniques est dlaborer les Normes internationales. Les projets de Normes internationales adopts par les comits techniques so

    15、nt soumis aux comits membres pour vote. Leur publication comme Normes internationales requiert lapprobation de 75 % au moins des comits membres votants. Lattention est appele sur le fait que certains des lments du prsent document peuvent faire lobjet de droits de proprit intellectuelle ou de droits

    16、analogues. LISO ne saurait tre tenue pour responsable de ne pas avoir identifi de tels droits de proprit et averti de leur existence. LISO 14637FIL 195 a t labore par le comit technique ISO/TC 34, Produits alimentaires, sous-comit SC 5, Lait et produits laitiers, et la Fdration internationale de lai

    17、terie (FIL). Elle est publie conjointement par lISO et la FIL. ISO 14637:2004(F) FIL 195:2004(F) ISO et FIL 2004 Tous droits rservs v Avant-propos La FIL (Fdration internationale de laiterie) est une fdration mondiale du secteur laitier avec un Comit National dans chacun de ses pays membres. Chaque

    18、Comit National a le droit de faire partie des Comits permanents de la FIL auxquels sont confis les travaux techniques. La FIL collabore avec lISO pour llaboration de mthodes normalises danalyse et dchantillonnage pour le lait et les produits laitiers. Les projets de Normes internationales adopts par

    19、 les quipes dAction et les Comits permanents sont soumis aux Comits Nationaux pour vote. Leur publication comme Normes internationales requiert lapprobation de 50 % au moins des Comits Nationaux de la FIL votants. Lattention est appele sur le fait que certains des lments du prsent document peuvent f

    20、aire lobjet de droits de proprit intellectuelle ou de droits analogues. La FIL ne saurait tre tenue pour responsable de ne pas avoir identifi de tels droits de proprit et averti de leur existence. LISO 14637FIL 195 a t labore par la Fdration internationale de laiterie (FIL) et le comit technique ISO

    21、/TC 34, Produits alimentaires, sous-comit SC 5, Lait et produits laitiers. Elle est publie conjointement par la FIL et lISO. Lensemble des travaux a t confi lquipe dAction mixte ISO/FIL/AOAC, Composants azots dans le lait et les produits laitiers, sous la conduite de son chef de projet, Monsieur Ph.

    22、 Trossat (FR). NORME INTERNATIONALE ISO 14637:2004(F) FIL 195:2004(F) ISO et FIL 2004 Tous droits rservs 1 Lait Dtermination de la teneur en ure Mthode enzymatique par mesurage de pH diffrentiel (Mthode de rfrence) 1 Domaine dapplication La prsente Norme internationale spcifie une mthode enzymatique

    23、 de dtermination de la teneur en ure dans le lait par pHmtrie diffrentielle. 2 Termes et dfinitions Pour les besoins du prsent document, les termes et dfinitions suivants sappliquent. 2.1 teneur en ure fraction massique de substances dtermine selon le mode opratoire spcifi dans la prsente Norme inte

    24、rnationale NOTE La teneur en ure est exprime en milligrammes par litre. 3 Principe De lurase est ajoute lchantillon dessai, afin dhydrolyser lure en ammoniac et en dioxyde de carbone. pH 6,7, lammoniac shydrolyse immdiatement en dgageant des ions hydroxyle et le dioxyde de carbone libre des protons

    25、qui neutralisent partiellement ces ions hydroxyle. Lquilibre entre lhydrolyse de lammoniac et celle du dioxyde de carbone, et la neutralisation qui en rsulte, entrane une variation du pH. Le pH varie en fonction de la teneur en ure de lchantillon et la variation est mesure laide dun analyseur pHmtri

    26、e diffrentielle. 4 Ractifs Sauf spcification contraire, utiliser uniquement des ractifs de qualit analytique reconnue et de leau distille ou dminralise, ou de puret quivalente. 4.1 Ractifs pour la dtermination de lure 4.1.1 Solution tampon, pH 6,7. Dissoudre dans une fiole jauge un trait de 1 000 ml

    27、 (5.5) 1,777 g de monohydrognophosphate dipotassique (K 2 HPO 4 ), 1,388 g de dihydrognophosphate de potassium (KH 2 PO 4 ), 7,600 g de chlorure de potassium (KCl), 1,00 g dazide de sodium (NaN 3 ), 0,010 g dactazolamide (5-actamido-1,3,4-thiadiazole-2-sulfonamide), ISO 14637:2004(F) FIL 195:2004(F)

    28、 2 ISO et FIL 2004 Tous droits rservs1,040 g de chlorure de magnsium hexahydrat (MgCl 2 ,6H 2 O), 2 g de Triton X 100, 1 g de Brij 35 et 20 ml de LM1 1) . Diluer au repre avec de leau et mlanger. La solution tampon peut tre conserve pendant 6 mois si elle est stocke 4 C. 4.1.2 Solution denzyme duras

    29、e. Dissoudre 360 mg durase lyophilise (EC 3.5.1.5) dans 1 ml dune solution aqueuse de glycrol 50 % (fraction volumique). Lactivit de la solution enzymatique durase obtenue doit tre de (2 100 300) units/ml 2) . La solution denzyme durase peut tre conserve pendant 6 mois si elle est stocke 4 C. 4.1.3

    30、Solution talon dure. Dissoudre 1 000 g dure (N 2 H 4 CO) pralablement sche sous vide dans une tuve (90 1) C pendant une journe, 7,45 g de chlorure de potassium (KCl) et 1,0 g dazide de sodium (NaN 3 ) dans une fiole jauge de 1 000 ml (5.5). Diluer au trait de jauge avec de leau et mlanger. La soluti

    31、on talon dure peut tre conserve pendant 6 mois si elle est stocke 4 C. 4.1.4 Lait zro. Ajouter 20 l de solution durase (4.1.2) 1 ml de lait cru. Mlanger et faire incuber le lait cru ainsi prpar pendant 10 min dans le bain-marie (5.3) rgl 40 C. 4.2 Ractifs pour le nettoyage et lentretien des lectrode

    32、s 4.2.1 Solution de nettoyage. Dissoudre dans une fiole jauge un trait de 1 000 ml (5.5) 1,742 g de monohydrognophosphate dipotassique (K 2 HPO 4 ), 1,361 g de dihydrognophosphate de potassium (KH 2 PO 4 ), 7,455 g de chlorure de potassium (KCl), 1,00 g dazide de sodium (NaN 3 ), 2 g de Triton X 100

    33、, 2 g de Brij 35 et 3 g de LM1 1) . Diluer au trait de jauge avec de leau et mlanger. La solution de nettoyage peut tre conserve pendant une anne si elle est stocke temprature ambiante. 4.2.2 Solution de rgnration. Utiliser de lacide chlorhydrique une concentration c(HCl) = 0,1 mol/l. La solution de

    34、 rgnration peut tre conserve pendant une anne si elle est stocke temprature ambiante. 4.2.3 Solution de rgnration forte. Dissoudre dans une fiole jauge un trait de 1 000 ml (5.5) 30 g dacide nitrique (HNO 3 ) environ 69 % (fraction massique), 30 g dacide chlorhydrique (HCl) environ 37 % (fraction ma

    35、ssique), 30 g de fluorure de sodium (NaF) et 1 g de Triton X 100. Diluer au trait de jauge avec de leau et mlanger. La solution de rgnration forte peut tre conserve pendant une anne si elle est stocke temprature ambiante. 1) Il est possible de se procurer ce dtergent auprs de Valetudo S.r.l., BG, It

    36、alie; cest un exemple de produit disponible sur le march. Cette information est donne par souci de commodit lintention des utilisateurs de lISO 14637 et ne saurait constituer un engagement de lISO ni de la FIL lgard de ce produit. 2) Cette unit (souvent appele Unit Internationale ou Unit Standard) e

    37、st dfinie comme tant la quantit denzyme qui catalysera la transformation dune micromole de substrat par minute sous des conditions normales. ISO 14637:2004(F) FIL 195:2004(F) ISO et FIL 2004 Tous droits rservs 3 5 Appareillage Matriel courant de laboratoire, et en particulier: 5.1 Balance analytique

    38、, permettant de peser 1 mg prs. 5.2 Micropipettes ( dplacement positif), dune capacit de 15 l et de 20 l. 5.3 Bain-marie pouvant tre maintenu (38 1) C et (40 1) C. 5.4 Appareillage de mesure de pHmtrie diffrentielle, fonctionnant gnralement selon le schma donn lAnnexe A. La disposition et les lments

    39、 utiliss peuvent diffrer. Lappareillage de mesure de pHmtrie diffrentielle se compose de pompes pristaltiques pour la circulation des liquides, dune chambre de mlange, de deux lectrodes capillaires circulation en verre (EL1 et EL2) et dun systme lectronique de mesure. 5.5 Fioles jauges un trait, dun

    40、e contenance de 1 000 ml. 6 chantillonnage Il est important que le laboratoire reoive un chantillon rellement reprsentatif, qui nait pas t endommag ni modifi pendant le transport ou le stockage. La mthode spcifie dans la prsente Norme internationale ninclut pas lchantillonnage. LISO 707/FIL 50 indiq

    41、ue une mthode dchantillonnage recommande. 7 Prparation de lchantillon dessai Chauffer lchantillon dans le bain-marie (5.3) rgl 38 C tout en le mlangeant. Refroidir 20 C juste avant la prparation de la prise dessai. 8 Mode opratoire 8.1 Gnralits Il existe diffrents modles dappareillages de mesure de

    42、pHmtrie diffrentielle (5.4), qui sutilisent diffremment, par consquent loprateur doit suivre soigneusement les instructions du fabricant pour rgler, calibrer et faire fonctionner lappareillage. Mettre lappareillage sous tension et le laisser se stabiliser. Si deux mesurages conscutifs sont effectus

    43、5 min dintervalle ou plus, renouveler la solution tampon (4.1.1) dans la chambre de mlange de lappareillage. 8.2 Dtermination du blanc Remplir les lectrodes circulation EL1 et EL2 de lappareillage de mesure de pHmtrie diffrentielle (5.4) avec la solution tampon (4.1.1). Mesurer la diffrence de pH (D

    44、 1 ) entre les lectrodes. La diffrence entre les deux lectrodes doit tre de 150 units mpH (millipH). ISO 14637:2004(F) FIL 195:2004(F) 4 ISO et FIL 2004 Tous droits rservs laide dune micropipette (5.2), ajouter 15 l de solution denzyme durase (4.1.2) dans la chambre de mlange de lappareillage et mla

    45、nger. Remplir seulement llectrode circulation EL2 avec le mlange tampon/enzyme. Mesurer de nouveau la diffrence de pH (D 2 ) entre les deux lectrodes. Calculer la diffrence de pH, H 0 , pour le blanc laide de lquation suivante: 021 H DD = o H 0est la diffrence de pH entre les deux mesures de diffren

    46、ce de pH, D 1et D 2 , pour la dtermination du blanc; D 1est la valeur numrique de la diffrence de pH entre les deux lectrodes remplies avec la solution tampon; D 2est la valeur numrique de la diffrence de pH entre les lectrodes remplies soit avec la solution tampon, soit avec le mlange tampon-enzyme

    47、. La diffrence, H 0 , entre les deux lectrodes doit tre 3 units mpH alors que la diffrence entre deux mesurages conscutifs doit tre u 0,5 units mpH. Si ces rsultats ne sont pas obtenus, contrler la solution tampon et rpter lopration ci-dessus. Si les rsultats ne satisfont toujours pas aux exigences, procder un nettoyage (8.8) et recommencer la dtermination du blanc comme indiqu ci-dessus. 8.3 Calibrage 8.3.1 Mode opr


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