1、 Numro de rfrence ISO 14183:2005(F) ISO 2005NORME INTERNATIONALE ISO 14183 Premire dition 2005-11-01Aliments des animaux Dtermination des teneurs en monensine, narasine et salinomycine Mthode par chromatographie liquide utilisant la drivatisation post-colonne Animal feeding stuffs Determination of m
2、onensin, narasin and salinomycin contents Liquid chromatographic method using post- column derivatization ISO 14183:2005(F) PDF Exonration de responsabilit Le prsent fichier PDF peut contenir des polices de caractres intgres. Conformment aux conditions de licence dAdobe, ce fichier peut tre imprim o
3、u visualis, mais ne doit pas tre modifi moins que lordinateur employ cet effet ne bnficie dune licence autorisant lutilisation de ces polices et que celles-ci y soient installes. Lors du tlchargement de ce fichier, les parties concernes acceptent de fait la responsabilit de ne pas enfreindre les con
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6、ous. DOCUMENT PROTG PAR COPYRIGHT ISO 2005 Droits de reproduction rservs. Sauf prescription diffrente, aucune partie de cette publication ne peut tre reproduite ni utilise sous quelque forme que ce soit et par aucun procd, lectronique ou mcanique, y compris la photocopie et les microfilms, sans lacc
7、ord crit de lISO ladresse ci-aprs ou du comit membre de lISO dans le pays du demandeur. ISO copyright office Case postale 56 CH-1211 Geneva 20 Tel. + 41 22 749 01 11 Fax + 41 22 749 09 47 E-mail copyrightiso.org Web www.iso.org Version franaise parue en 2008 Publi en Suisse ii ISO 2005 Tous droits r
8、servsISO 14183:2005(F) ISO 2005 Tous droits rservs iii Sommaire Page Avant-propos. iv 1 Domaine dapplication.1 2 Rfrences normatives .1 3 Principe.1 4 Ractifs .1 5 Appareillage .5 6 chantillonnage .6 7 Prparation de lchantillon pour essai 6 8 Mode opratoire.6 8.1 Prparation de lchantillon de contrle
9、 qualit 6 8.2 Extraction .6 8.3 Analyse CLHP 7 8.4 Dtermination.9 9 Confirmation CLHP10 9.1 Gnralits .10 9.2 Drivation post-colonne laide de DMAB .10 9.3 Extraction lhexane.10 10 Calculs des rsultats.10 10.1 Gnralits .10 10.2 Monensine 11 10.3 Salinomycine12 10.4 Narasine12 10.5 Interprtation des do
10、nnes de confirmation 14 11 Fidlit 14 11.1 Essai interlaboratoires 14 11.2 Rptabilit.15 11.3 Reproductibilit15 11.4 Limite de quantification 16 12 Rapport dessai16 Annexe A (informative) Rsultats de lessai interlaboratoires .17 Bibliographie .22 ISO 14183:2005(F) iv ISO 2005 Tous droits rservsAvant-p
11、ropos LISO (Organisation internationale de normalisation) est une fdration mondiale dorganismes nationaux de normalisation (comits membres de lISO). Llaboration des Normes internationales est en gnral confie aux comits techniques de lISO. Chaque comit membre intress par une tude a le droit de faire
12、partie du comit technique cr cet effet. Les organisations internationales, gouvernementales et non gouvernementales, en liaison avec lISO participent galement aux travaux. LISO collabore troitement avec la Commission lectrotechnique internationale (CEI) en ce qui concerne la normalisation lectrotech
13、nique. Les Normes internationales sont rdiges conformment aux rgles donnes dans les Directives ISO/CEI, Partie 2. La tche principale des comits techniques est dlaborer les Normes internationales. Les projets de Normes internationales adopts par les comits techniques sont soumis aux comits membres po
14、ur vote. Leur publication comme Normes internationales requiert lapprobation de 75 % au moins des comits membres votants. Lattention est appele sur le fait que certains des lments du prsent document peuvent faire lobjet de droits de proprit intellectuelle ou de droits analogues. LISO ne saurait tre
15、tenue pour responsable de ne pas avoir identifi de tels droits de proprit et averti de leur existence. LISO 14183 a t labore par le comit technique ISO/TC 34, Produits alimentaires, sous-comit SC 10, Aliments des animaux. NORME INTERNATIONALE ISO 14183:2005(F) ISO 2005 Tous droits rservs 1 Aliments
16、des animaux Dtermination des teneurs en monensine, narasine et salinomycine Mthode par chromatographie liquide utilisant la drivatisation post-colonne 1 Domaine dapplication La prsente Norme internationale spcifie une mthode de dtermination des teneurs en monensine, en narasine et en salinomycine da
17、ns les aliments pour animaux, les complments (secs et liquides) et les prmlanges de minraux, par chromatographie liquide haute performance (CLHP). La mthode ne sapplique pas aux prmlanges mdicamenteux (produits pharmaceutiques) et ne permet pas de dterminer le lasalocide et la semduramicine. La limi
18、te de quantification est respectivement denviron 1 mg/kg, 2 mg/kg et 2 mg/kg pour la monensine, la salinomycine et la narasine. Une limite de quantification infrieure peut tre atteinte mais cela est sujet validation par lutilisateur. 2 Rfrences normatives Les documents de rfrence suivants sont indis
19、pensables pour lapplication du prsent document. Pour les rfrences dates, seule ldition cite sapplique. Pour les rfrences non dates, la dernire dition du document de rfrence sapplique (y compris les ventuels amendements). ISO 6498:1998, Aliments des animaux Prparation des chantillons pour essai 3 Pri
20、ncipe Les ionophores monensine, narasine et salinomycine sont extraits laide dun mlange mthanol/eau (90 + 10) par agitation mcanique pendant 1 h, puis les extraits sont filtrs. Les ionophores sont dtermins par CLHP en phase inverse utilisant la drivation post-colonne laide de vanilline et dtection 5
21、20 nm. Les chantillons suprieurs la limite de dtection ainsi que les chantillons daliments mdicamenteux contenant des ionophores inattendus suspects sont confirms par une extraction lhexane ou par une drivation post- colonne avec du dimthylaminobenzaldhyde (DMAB). 4 Ractifs Sauf spcification contrai
22、re, utiliser uniquement des ractifs de qualit analytique reconnue. 4.1 Eau, qualit CLHP ou quivalente (par exemple eau purifie Milli-Q). 4.2 Mthanol (CH 3 OH), qualit CLHP. 4.3 Acide sulfurique (H 2 SO 4 ), de 97 % 98 %. 4.4 Acide actique (CH 2 CH 3 CO 2 H), glacial, de 97 % 98 %. ISO 14183:2005(F)
23、2 ISO 2005 Tous droits rservs4.5 Hydrognocarbonate de sodium (NaHCO 3 ), puret dau moins 99 %. 4.6 Vanilline (4-hydroxy-3-mthoxybenzaldhyde), puret dau moins 99 %. 4.7 Dimthylaminobenzaldhyde (DMAB), puret dau moins 99 %. 4.8 Hexane CH 3 (CH 2 ) 4 CH 3 , distill sur verre. 4.9 Solvant dextraction, m
24、thanol/eau (90 + 10). Mlanger 1 800 ml de mthanol (4.2) et 200 ml deau (4.1) dans une fiole de 2 l. Bien mlanger. 4.10 Phases mobiles 4.10.1 Systme de raction post-colonne Tout en remuant doucement, ajouter lentement laide dune pipette 20 ml dacide sulfurique (4.3) 950 ml de mthanol (4.2). Laisser r
25、efroidir, puis ajouter 30 g de vanilline (4.6) tout en remuant. Mettre labri de la lumire. Renouveler chaque jour. 4.10.2 Colonne CLHP Utiliser du mthanol (4.2)/de leau (4.1)/de lacide actique (4.4) (940/60/1). Filtrer sous vide laide de lquipement indiqu en 5.7. 4.11 Mthanol neutralis Ajouter 1,0 g
26、 dhydrognocarbonate de sodium (4.5) dans 4 l de mthanol (4.2). Bien mlanger et filtrer si ncessaire laide dun papier filtre de 11 m (par exemple Whatman N 1) 1) . Voir la Note en 4.13. 4.12 talons de rfrence Le titre ou la composition est requis pour chaque lot dtalons de rfrence. 4.12.1 Monensine s
27、odium 2)4.12.2 Narasine 2)4.12.3 Sodium salinomycine 3)AVERTISSEMENT viter toute inhalation et exposition aux substances talons toxiques et leurs solutions. Travailler sous une hotte aspirante lors de la manipulation des solvants et des solutions. Porter des lunettes et des vtements de protection. 4
28、.13 Solutions mres talons de ionophore, environ 0,50 mg/ml. Peser exactement, 0,1 mg prs, 25 mg de chaque talon (4.12.1 4.12.3) dans des fioles jauges spares de 50 ml. Dissoudre dans du mthanol neutralis (4.11) et diluer au volume. Les renouveler tous les mois. Stocker au frais. 1) Exemple de produi
29、t appropri disponible sur le march. Cette information est donne lintention des utilisateurs de la prsente Norme internationale et ne signifie nullement que lISO approuve ou recommande lemploi exclusif du produit ainsi dsign. 2) Disponible auprs des laboratoires Lilly Research, Lilly Corporate Center
30、, Indianapolis, Indiana 46285, tats-Unis. 3) Disponible auprs de la socit Alpharma Inc., Animal Health Division, 1 Duggar Drive, Willow Island, WV, tats- Unis 26134-97111, et Hoechst Roussel Vet, D-65926 Frankfurt am Main, Gebaude H 790, Allemagne. ISO 14183:2005(F) ISO 2005 Tous droits rservs 3 Pro
31、tger toutes les solutions talons de la lumire ou les prparer dans des fioles qui arrtent les rayons actiniques. NOTE Lexigence relative au mthanol neutralis na pas t vrifie pour la salinomycine. Elle nest pas requise sil sagit uniquement dune analyse de monensine mais elle est requise pour lanalyse
32、de narasine. 4.13.1 Solution mre talon de monensine Prparer comme dcrit en 4.13. Calculer la concentration de la solution mre talon base sur le composant principal, monensine A. Le composant secondaire, monensine B, lu juste avant la monensine A 4est dtermin dans les chantillons pour essai bass sur
33、la monensine A. Utiliser la composition du composant identifie sur la feuille de profil de ltalon de rfrence: M M 0, 5 100 S = o 0,5 est la concentration de la solution mre talon (4.13), en milligrammes par millilitre, consigne trois chiffres significatifs; Mest la concentration du composant donn de
34、 monensine A dans la solution mre talon, en milligrammes par millilitre; S Mest la proportion du composant donn de monensine A dans ltalon de rfrence conformment la feuille de profil, en pourcentage. EXEMPLE Le lot dtalon de rfrence RS0234 contient 93,71 % de monensine A sur une base en ltat. 4.13.2
35、 Solution mre talon de salinomycine Prparer comme dcrit en 4.13. Dterminer la concentration laide de la valeur de concentration de ltalon de rfrence donne par le fournisseur 2 : S 0,5 1000 w = o Sest la concentration de salinomycine dans la solution mre talon, en milligrammes par millilitre; west la
36、 concentration de ltalon de salinomycine donne par le fournisseur, en microgrammes par milligramme. EXEMPLE Pour le lot WS-19B, la concentration de ltalon est gale 986 g/mg. 4.13.3 Solution mre talon de narasine Prparer comme dcrit en 4.13. Calculer la concentration de la solution mre talon base sur
37、 le composant principal, narasine A. Les composants secondaires (narasine D et I) lus aprs la narasine A 5sont dtermins dans les chantillons pour essai bass sur la narasine A. Utiliser la composition du composant identifie sur la feuille de profil de ltalon de rfrence: N N 0,5 100 S = o Nest la conc
38、entration du composant de narasine A dans la solution mre talon, en milligrammes par millilitre; ISO 14183:2005(F) 4 ISO 2005 Tous droits rservsS Nest la proportion du composant donn de narasine A dans ltalon de rfrence conformment la feuille de profil, en pourcentage. EXEMPLE Pour le lot dtalon de
39、rfrence RS0302, le pourcentage de chaque composant sur une base en ltat est: narasine A = 85,4 %, narasine D = 1,9 %, narasine I = 0,7 %. 4.14 Solution talon intermdiaire mlange, environ respectivement 20 g/ml, 40 g/ml et 40 g/ml de monensine, salinomycine et narasine. Transfrer, laide dune pipette,
40、 respectivement 10,0 ml, 20,0 ml et 20,0 ml des solutions mres talons de monensine, salinomycine et narasine (4.13) dans une fiole jauge de 250 ml. Diluer au volume laide de solvant dextraction (4.9). Bien mlanger. Renouveler tous les mois. 4.15 talons mlangs pour CLHP Prparer cinq solutions talons
41、mlanges pour CLHP en pipettant une partie aliquote de ltalon intermdiaire mlang (4.14) dans des fioles jauges de 100 ml qui arrtent les rayons actiniques et diluer au volume laide du solvant dextraction (4.9), tel que spcifi dans le Tableau 1. Bien mlanger. Renouveler tous les mois. Tableau 1 Concen
42、tration approximative dtalon pour CLHP g/ml Identification de ltalon mlang pour CLHP Quantit dtalon intermdiaire (4.14) ml Monensine Salinomycine Narasine A 1 0,2 0,4 0,4 B 5 1 2 2 C 10 2 4 4 D 25 5 10 10 E 50 10 20 20 4.16 talons uniques pour CLHP 4.16.1 Monensine, environ 5 g/ml. Pipetter exacteme
43、nt 1,0 ml de solution mre talon de monensine (4.13.1) dans une fiole jauge de 100 ml qui arrtent les rayons actiniques. Diluer au volume laide de solvant dextraction (4.9). Bien mlanger. Renouveler tous les mois. Stocker au frais. 4.16.2 Salinomycine, environ 10 g/ml. Pipetter exactement 2,0 ml de s
44、olution mre talon de salinomycine (4.13.2) dans une fiole jauge de 100 ml qui arrtent les rayons actiniques. Diluer au volume laide de solvant dextraction (4.9). Bien mlanger. Renouveler tous les mois. Stocker au frais. 4.16.3 Narasine, environ 10 g/ml. Pipetter exactement 2,0 ml de solution mre tal
45、on de narasine (4.13.3) dans une fiole jauge de 100 ml qui arrtent les rayons actiniques. Diluer au volume laide de solvant dextraction (4.9). Bien mlanger. Renouveler tous les mois. Stocker au frais. ISO 14183:2005(F) ISO 2005 Tous droits rservs 5 5 Appareillage Appareillage courant de laboratoire
46、et, en particulier, ce qui suit. 5.1 Systme de CLHP constitu des lments suivants: 5.1.1 Pompe, sans impulsions, avec un dbit de 0,1 ml/min 2,0 ml/min. 5.1.2 Systme dinjection, manuel ou par chantillonneur automatique, muni dune boucle permettant des injections de 100 l. 5.1.3 Dtecteur UV/VIS, avec l
47、ongueur dondes variable, adapt aux mesurages 520 nm et 592 nm. 5.1.4 Intgrateur ou systme de donnes informatiques. 5.1.5 Racteur post-colonne, avec une bobine de raction de 1,5 ml 2,0 ml, pour une utilisation 98 C. La bobine peut tre une bobine disponible dans le commerce ou une bobine fabrique laide de 7,5 m 10 m de tube en acier inoxydable 316, de diamtre intrieur de 0,5 mm, enroul dans un format compatible avec ltuve du racteur. Par exemple, enrouler la bobine dans une f
