1、Norme internationale INTERNATIONAL ORGANIZATION FOR STANDARDIZATION.ME)I(CIYHAPOHAR OPTAHM3AUMR Il0 CTAHAPTl43AL sinon, procder directement comme dcrit en 8.3. Sassurer que la prise dessai soit reprsentative de hechantillon pour laboratoire (chantillon final). 8.1.1 pices entires ou en morceaux Conc
2、asser le produit en petits morceaux, peser, 0,l g prs, 25 g environ de lchantillon et les transfrer dans un bcher (6.2). 8.1.2 pices moulues Peser, 0,l g prs, 25 g environ de lchantillon et les transf- rer dans un bcher (6.2). 8.2 limination prliminaire des huiles essentielles et de la matire grasse
3、 Dans le bcher ajouter 200 ml dther de ptrole (5.5) la prise dessai (8.1). Porter, puis maintenir douce bullition sur un bain deau chaude durant 15 min. liminer par dcantation lther de ptrole en prenant soin de ne pas perdre de produit pendant cette opration. 83 . Sparation des impurets lourdes et d
4、u sable la prise dessai (8.1) ou au rsidu obtenu en 8.2 ajouter dans le bcher 400 ml de chloroforme (5.1). Laisser reposer durant au moins 1 h en remuant priodiquement. Transfrer le produit et le solvant sur lentonnoir de Buchner (6.31, en laissant le rsidu lourd de sable et de terre dans le bcher.
5、Essorer. Si une partie apprciable du tissu cellulaire de lpice se maintient au fond du bcher, ajouter des portions successives de chloro- forme mlang avec du ttrachlorure de carbone afin daug- menter la densit relative jusqu ce que la totalit du tissu cellulaire de lpice soit pratiquement spare par
6、flottation. Transfrer le rsidu lourd du bcher sur le papier filtre sans cendre (6.5) et laver le rsidu avec de leau, afin dliminer le chlorure de sodium prsent dans lpice. Examiner le rsidu. Sil y a un rsidu important, mettre le papier filtre dans le creu- set tar (6.61, calciner et peser le sable e
7、t la terre. 8.4 Traitement du rsidu retenu sur lentonnoir de Buchner Scher le produit retenu sur lentonnoir de Buchner (voir 8.3) durant 1 h dans ltuve (6.7) rgle 80 OC. 8.4.1 Mode opratoire sans traitement enzymatique Transfrer le rsidu dans Ia fiole pige (6.1). Ajouter 150 ml environ deau, porter
8、lbullition et laisser bouillir doucement durant 15 min en remuant. Laver lintrieur de la fiole en faisant couler de leau, et refroidir jusqu une temprature infrieure 20 OC, tout en amenant jusqu 600 ml environ avec de leau. 8.4.2 Mode opratoire par traitement enzymatique Transfrer le rsidu sec dans
9、un bcher de 600 ml (6.2). Ajouter 300 ml deau et agiter jusqu ce que le mlange soit homo- gne. Ajouter 50 ml de la solution de pancratine (5.2) et 2 . mlanger. Ajuster le pH 8 avec la solution dorthophosphate trisodique (5.3). Rajuster le pH aprs 15 min, puis une nou- velle fois aprs 45 min environ.
10、 Ajouter 5 gouttes de la solution de formaldhyde (5.4) et laisser lattaque se faire toute une nuit une temprature de 37 40 OC. Refroidir et transfrer le pro- duit dans la fiole pige (6.11, tout en amenant jusqu 600 ml environ avec de leau. 8.5 Sparation des impurets lgres 8.51 Ajouter 25 ml dther de
11、 ptrole (5.6) en les versant le long de la baguette agitateur de la fiole pige. Incliner la fiole sous un angle denviron 45O par rapport la verticale et, par un mouvement vif de rotation de 4 impulsions par seconde, mlan- ger durant 1 min, de facon que le liquide soit amen tourner. viter les project
12、ions hors de la surface du liquide dans la fiole pige munie du bouchon en caoutchouc. Laisser reposer durant 5 min. Puis, remplir la fiole avec de leau et laisser reposer durant 30 min. Remuer toutes les 5 min. 8.5.2 Faire tourner rapidement le bouchon pour entraner le sdiment, amener le bouchon aus
13、si loin que possible dans le col de la fiole, en sassurant que la couche dther de ptrole et au moins 1 cm du liquide se situant en-dessous de linterface se trouvent au-dessus du bouchon. Maintenir le bouchon en place et transvaser le liquide pig dans lentonnoir de Buchner (6.4). Filtrer. 8.5.3 Ajout
14、er 15 ml dther de ptrole (5.6) dans la fiole pige et mlanger soigneusement. Au bout de 15 min, rpter les oprations dcrites en 8.5.2. Si la deuxime extraction donne une quantit apprciable dimpurets, dcanter le plus possible du liquide de la fiole, ajouter encore 15 ml dther de ptrole (5.6) et effectu
15、er une troisime extration. 8.6 Examen microcospique des impurets lgres Retirer le papier filtre de lentonnoir de Buchner et le transfrer dans une bote de Petri (6.9). Introduire la bote de Petri dans ltuve (6.8) rgle 103 OC et ly laisser 30 min. Le papier filtre sch est soigneusement coll sur la bot
16、e de Petri. Examiner la totalit de la surface du papier filtre au moyen de lappareil optique (6.101, en lumire rflchie, tout en remuant et en sondant simultanment avec une aiguille monte. ISO 12084982 Effectuer lexamen de gauche droite, de haut en bas pou FI le premier i ntervalle, de bas en haut po
17、u bas pour le troisime et ainsi de suite. r le second, de haut en 9 Expression des rsultats 9.1 Impurets lourdes (voir 8.4) Noter la prsence de matires dorigine minrale. Si la quantit de sable et de terre est telle quelle a ncessit la calcination et la pese de ces impurets, la teneur en impurets min
18、rales du produit, exprime en pourcentage en masse, est gale 100 ml x - m0 m0 est la masse, en grammes, de la prise dessai; est la masse, en grammes, du rsidu obtenu (8.3). 9.2 Impurets lgres (voir 8.6) N,oter la prsence de matires dorigine animale (voir 8.61. Noter sparment, si cest demand, les nomb
19、res de fragments dinsectes, de poils de rongeurs et dautres matires dorigine animale prsents dans la prise dessai, cest-dire les nombres pour 25 g dchantillon. 10 Procs-verbal dessai Le procs-verbal dessai doit indiquer la mthode utilise et les rsultats obtenus. II doit, en outre, mentionner tous le
20、s dtails opratoires non prvus dans la prsente Norme internationale, ou facultatifs, ainsi que les incidents ventuels susceptibles davoir agi sur les rsultats. Le procs-verbal dessai doit donner tous les renseignements ncessaires Iindentification complte de lchantillon. ISO 12084982 (FI Couche dther
21、de ptrole Couche deau l H-f- ,/- ,/ Baguette en mtal - Bouchon en caoutchouc Fiole - Bouchon en caoutchouc Couche dther ,-“- de ptrole / - - - -w-_ - - P - - - - - _ - - Bouchon en position descendue, crou (encastr dans le bouchon Bouchon en position pour melanger, etc. en caoutchouc) Rlevbe, pour s
22、iphonner Figure - Fiole Pi&ge de Wildman (6.11, montrant la procdure dutilisation Couche deau NOTE - Lcrou et la rondelle suprieurs ont t omis. ISO 12084982 (FI Annexe Pancratine - A.0 Gnralits La pancratine est une substance contenant des enzymes, en particulier Iamylase pancratique, la trypsine et
23、 la lipase pan- cratique, obtenues partir du pancras du porc, Sus scrofa Linne var. domesticus Gray (Famille des suids) ou du boeuf, Bos taurus Linne (Famille des bovids). La pancratine ne transforme pas moins de 25 fois sa masse de fcule de pomme de terre de rfrence (National Formulary Potato Starc
24、h Refe- rente Standard) en hydrates de carbone solubles, et pas moins de 25 fois sa masse de casine en protoses. De la pancratine ayant un pouvoir dattaque plus lev peut tre utilise dans cette norme en y incorporant du lactose ou du saccharose ne contenant pas plus de 3,25 % damidon, ou de la pancra
25、tine ayant un pouvoir dattaque infrieur. A.1 Description La pancratine se prsente sous la forme dune poudre amor- phe de couleur crme ayant une odeur faible, caractristique mais pas dsagrable. La pancratine transforme les protines en protoses et en substances drives, et convertit lamidon en dextrine
26、s et en sucres. Elle a son activit la plus leve en milieu neutre ou faiblement alcalin. Elle est rendue inerte sil y a prsence de quantits importantes dhydroxydes alcalins ou sil y a plus que des traces dacides minraux. Un excs de carbo- nate alcalin inhibe galement son action. A.2 Contrle de matire
27、s grasses Introduire 2 g de pancratine dans une fiole de 50 ml environ, ajouter 20 ml doxyde dithylique, Ja boucher et la laisser de ct durant plusieurs heures en remuant par rotation des intervalles frquents. Dcanter loxyde dithylique surnageant laide dune baguette dentranement sur un papier filtre
28、 lisse denviron 7 cm de diamtre, pralablement humidifi loxyde dithylique, et recueillir le filtrat dans un bcher tar. Au rsidu restant dans la fiole, ajouter une nouvelle portion de 10 ml doxyde dithylique, en procdant de la mme facon que prc- demment, puis une troisime portion de 10 ml doxyde dithy
29、li- que, et transfrer loxyde dithylique et le rsidu de pancratine sur le filtre. Laisser sgoutter et svaporer loxyde dithylique spontanment, et scher le rsidu 105 OC durant 2 h. Le rsidu de matire grasse ne doit pas peser plus de 60 mg (3,O %L La teneur en matire grasse peut galement tre dtermine en
30、 utilisant un appareil extraction continue de Soxhiet. A.3 Dtermination du pouvoir dattaque de lamidon Dterminer la teneur en eau sur 500 mg environ, pess avec prcision, de fcule de pomme de terre de rfrence (National Formulary Potato Starch Reference Standard) en schant 120 OC durant 4 h. Porter et
31、 maintenir lbullition une quan- tit suffisante deau durant 10 min, et la laisser refroidir la temprature ambiante. Utiliser par la suite cette eau pour toutes les dilutions faites avec de leau. Spcifications Mlanger soigneusement une quantit de fcule de pomme de terre de rfrence quivalant 3,75 g de
32、tmoin de rfrence sec, avec 10 ml deau. Ajouter le mlange, en remuant cons- tamment, 75 ml deau pralablement chauffe 55 OC envi- ron contenue dans un bcher de 250 ml tar. Entraner lamidon restant et lintroduire dans le bcher avec 10 ml deau. Chauffer le mlange jusqu lbullition et laisser bouillir dou
33、cement, en remuant constamment, durant 5 min. Ajouter suffisamment deau pour amener la masse du mlange 100 g, refroidir la pte 40 OC et placer le bcher dans un bain deau maintenue 40 OC. Mettre en suspension dans un bcher de 250 ml contenant 5 ml deau, 150 mg de pancratine tester et ajouter la suspe
34、nsion la pte damidon, bien la mlanger en versant le mlange de bcher bcher durant 30 s, en notant lheure laquelle la suspension de pancratine a t ajoute en premier la pte. Maintenir le mlange la temprature de 40 OC durant 5 min exactement. Remuer et ajouter immdia- tement 0,l ml de ce mlange une solu
35、tion pralablement prpare par addition de 0,2 ml de solution diode, C(V2 12) = 0,l mol/l, 60 ml deau, une temprature de 23 25 OC, et mlanger: aucune coloration bleue ou violette ne doit se produire. A.4 Dtermination du pouvoir dattaque de la casine Placer 100 mg de casine finement pulvrise dans une f
36、iole jauge de 50 ml, ajouter 30 ml deau et bien agiter pour que la casine soit en suspension. Ajouter 1,O ml de solution dhydroxyde de sodium, c(NaOH) = 0,l mol/l, et chauffer le mlange 40 OC jusqu ce que la casine soit compltement dissoute, ce qui ne doit pas prendre plus de 30 min. Refroidir, dilu
37、er 50 ml avec de leau et mlanger. Dissoudre 100 mg de pancratine tester dans 500 ml deau. Dissoudre galement 100 mg de pancratine de rfrence pour lactivit dattaque de la casine dans 500 ml deau, sparment. Mlanger 1 ml dacide actique cristallisable avec 9 ml deau et 10 ml dtha- nol. Placer respective
38、ment 5 ml de la solution de casine dans deux tubes essais. Ajouter, lun des deux tubes, 2 ml de solution de pancratine bien agite et, lautre tube, 2 ml de la solution de rfrence bien agite. Ajouter 3 ml deau chaque tube, mlanger doucement par agitation, et immerger immdia- tement les tubes essais da
39、ns un bain deau 40 OC et mainte- nir cette temprature durant 1 h. Puis, retirer les tubes du bain deau et ajouter, chaque tube, 3 gouttes du mlange dacide actique. Lintensit du trouble (haze) dans le tube contenant la solution de pancratine tester ne doit pas tre suprieure celle du tube contenant la solution de rfrence. A.5 Emballage et entreposage Conserver la pancratine dans des emballages tanches, de prfrence une temprature denviron 10 OC mais en aucun cas suprieure 30 OC.
