1、 Numro de rfrence ISO 10710:2010(F) ISO 2010NORME INTERNATIONALE ISO 10710 Premire dition 2010-06-15 Qualit de leau Essai dinhibition de croissance sur la macro algue deaux marine et saumtre Ceramium tenuicorne Water quality Growth inhibition test with the marine and brackish water macroalga Ceramiu
2、m tenuicorne ISO 10710:2010(F) PDF Exonration de responsabilit Le prsent fichier PDF peut contenir des polices de caractres intgres. Conformment aux conditions de licence dAdobe, ce fichier peut tre imprim ou visualis, mais ne doit pas tre modifi moins que lordinateur employ cet effet ne bnficie dun
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5、es pour garantir lexploitation de ce fichier par les comits membres de lISO. Dans le cas peu probable o surviendrait un problme dutilisation, veuillez en informer le Secrtariat central ladresse donne ci-dessous. DOCUMENT PROTG PAR COPYRIGHT ISO 2010 Droits de reproduction rservs. Sauf prescription d
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7、opyright office Case postale 56 CH-1211 Geneva 20 Tel. + 41 22 749 01 11 Fax + 41 22 749 09 47 E-mail copyrightiso.org Web www.iso.org Publi en Suisse ii ISO 2010 Tous droits rservsISO 10710:2010(F) ISO 2010 Tous droits rservs iiiSommaire Page Avant-propos .iv Introduction.v 1 Domaine dapplication 1
8、 2 Termes et dfinitions 1 3 Principe.2 4 Organismes dessai, nutriments, milieux et matriaux .3 4.1 Organismes dessai.3 4.2 Eau de mer naturelle et artificielle .3 4.3 Nutriments4 4.4 Milieu.5 5 Culture 6 6 Appareillage .7 7 Mode opratoire.7 7.1 Algues.7 7.2 Prparation de leau de dilution.8 7.3 Choix
9、 des concentrations dessai .9 7.4 Dmarrage de lessai.9 7.5 Incubation.9 7.6 Mesurage10 7.7 Essai avec substances de rfrence.10 8 Critres de validit 10 9 valuation des rsultats .10 9.1 Calculs10 9.2 Dtermination de la C x E r 11 9.3 Expression des rsultats11 9.4 Interprtation des rsultats 11 10 Repro
10、ductibilit .11 11 Rapport dessai12 Annexe A (informative) Modle de croissance de Ceramium tenuicorne aux salinits 7S et 20S 13 Annexe B (informative) Rsultats de lessai interlaboratoires avec Ceramium tenuicorne la salinit 20S .16 Bibliographie.17 ISO 10710:2010(F) iv ISO 2010 Tous droits rservsAvan
11、t-propos LISO (Organisation internationale de normalisation) est une fdration mondiale dorganismes nationaux de normalisation (comits membres de lISO). Llaboration des Normes internationales est en gnral confie aux comits techniques de lISO. Chaque comit membre intress par une tude a le droit de fai
12、re partie du comit technique cr cet effet. Les organisations internationales, gouvernementales et non gouvernementales, en liaison avec lISO participent galement aux travaux. LISO collabore troitement avec la Commission lectrotechnique internationale (CEI) en ce qui concerne la normalisation lectrot
13、echnique. Les Normes internationales sont rdiges conformment aux rgles donnes dans les Directives ISO/CEI, Partie 2. La tche principale des comits techniques est dlaborer les Normes internationales. Les projets de Normes internationales adopts par les comits techniques sont soumis aux comits membres
14、 pour vote. Leur publication comme Normes internationales requiert lapprobation de 75 % au moins des comits membres votants. Lattention est appele sur le fait que certains des lments du prsent document peuvent faire lobjet de droits de proprit intellectuelle ou de droits analogues. LISO ne saurait t
15、re tenue pour responsable de ne pas avoir identifi de tels droits de proprit et averti de leur existence. LISO 10710 a t labore par le comit technique ISO/TC 147, Qualit de leau, sous-comit SC 5, Mthodes biologiques. ISO 10710:2010(F) ISO 2010 Tous droits rservs vIntroduction La macro algue rouge Ce
16、ramium tenuicorne appartient aux Ceramiaceae, Rhodophyta. Lespce peut tre utilise comme organisme modle pour lcosystme ctier. Cette espce existe dans les eaux marines tempres des hmisphres nord et sud et elle est donc reprsentative de grandes zones. En tant que producteurs primaires, les macro algue
17、s sont une source de nourriture pour de nombreux invertbrs et servent dhabitat aux bactries, invertbrs et aux juvniles de poissons. Elles servent aussi de substrat de nombreuses espces de poissons ovipares. NORME INTERNATIONALE ISO 10710:2010(F) ISO 2010 Tous droits rservs 1Qualit de leau Essai dinh
18、ibition de croissance sur la macro algue deaux marine et saumtre Ceramium tenuicorne AVERTISSEMENT Il convient que lutilisateur de la prsente Norme internationale connaisse bien les pratiques courantes de laboratoire. La prsente Norme internationale na pas pour but de traiter tous les problmes de sc
19、urit qui sont, le cas chant, lis son utilisation. Il incombe lutilisateur dtablir des pratiques appropries en matire dhygine et de scurit, et de sassurer de la conformit la rglementation nationale en vigueur. IMPORTANT Il est absolument essentiel que les essais raliss conformment la prsente Norme in
20、ternationale soient excuts par un personnel ayant reu une formation adquate. 1 Domaine dapplication La prsente Norme internationale spcifie une mthode de dtermination de linhibition de la croissance de la macro algue Ceramium tenuicorne par des substances et des mlanges contenus dans leau de mer ou
21、par des eaux uses dont les salinits sont comprises entre 4S et 32S. Cette mthode est applicable des substances qui sont facilement hydrosolubles. NOTE Les effets inhibiteurs des matriaux organiques et inorganiques faiblement solubles, des composs volatils, des mtaux, des eaux rsiduaires, des chantil
22、lons deau de mer et des lutriats de sdiments peuvent tre soumis essai, avec des modifications telles que celles dcrites dans lISO 14442 4et dans lISO 5667-16 2 . 2 Termes et dfinitions Pour les besoins du prsent document, les termes et dfinitions suivants sappliquent. 2.1 longueur de lalgue longueur
23、 depuis la premire division jusquau bourgeon le plus distant de lalgue NOTE La longueur de lalgue est exprime en millimtres. Voir Figure 1. 2.2 milieu tmoin combinaison de leau de dilution et/ou du milieu nutritif utilise pour lessai ISO 20079:2005 5 , 3.6 2.3 lot tmoin milieu tmoin, incluant les or
24、ganismes utiliss pour lessai ISO 20079:2005 5 , 3.5 ISO 10710:2010(F) 2 ISO 2010 Tous droits rservs2.4 concentration effective C x E rconcentration de lchantillon pour essai laquelle un effet de x % est mesur par rapport au tmoin ISO 20079:2005 5 , 3.9 2.5 milieu de croissance mlange deau de mer nat
25、urelle et de nutriments utilis pour les prcultures des algues, dans lequel les cellules algales sont incubes NOTE Adapt de lISO 8692:2004 3 , 3.3. 2.6 taux de croissance qualit de leau taux proportionnel de croissance en longueur de lalgue par jour NOTE Voir lArticle 9. 2.7 salinit salinit pratique
26、S eau de mer rapport K 15entre la conductivit lectrique de lchantillon deau de mer la temprature de 15 C et sous une pression dune atmosphre normale et celle dune solution de chlorure de potassium dont la fraction massique de KCl est de 32,435 6 10 3 , la mme temprature et la mme pression NOTE Adapt
27、 de la Rfrence 14, p. 28. 2.8 milieu dessai mlange deau de mer, de nutriments et dchantillon pour essai NOTE Adapt de lISO 8692:2004 3 , 3.5. 2.9 chantillon pour essai qualit de leau chantillon aqueux, par exemple substance chimique, mlange de produits chimiques ou eaux rsiduaires, pour lequel les e
28、ffets inhibiteurs sur la croissance des algues doivent tre dtermins NOTE Adapt de lISO 8692:2004 3 , 3.4. 3 Principe Les bourgeons dalgues provenant de monocultures de gamtophytes femelles de Ceramium sont cultivs dans des conditions dessai dfinies et dans un milieu dfini contenant une plage de conc
29、entrations de lchantillon pour essai. Les solutions dessai sont incubes pendant une priode de sept jours aprs laquelle laugmentation de longueur est mesure et le taux de croissance calcul. Linhibition de la croissance est dtermine comme une rduction du taux de croissance par rapport aux cultures tmo
30、in cultives dans des conditions identiques. Lorsque la toxicit des chantillons est compare celle dautres produits chimiques ou deaux uses, les essais peuvent tre raliss dans de leau de mer artificielle. Si lessai est destin valuer et prdire les effets pour une masse deau rceptrice spcifique, les ess
31、ais peuvent tre effectus avec une algue adapte la salinit de la masse deau rceptrice. Dans ce cas, de leau de mer naturelle provenant dun site non contamin ayant les mmes proprits est utilise. ISO 10710:2010(F) ISO 2010 Tous droits rservs 34 Organismes dessai, nutriments, milieux et matriaux Sauf in
32、dication contraire, utiliser uniquement des ractifs de qualit analytique reconnue et de leau distille ou dminralise ou de leau de puret quivalente. 4.1 Organismes dessai Utiliser lun des clones dalgues marines suivants: a) Ceramium tenuicorne Ktzing Waern (clone 7S originaire de la mer Baltique); b)
33、 C. tenuicorne Ktzing Waern (clone 20S et 30S originaire du fjord dOslo). Ces algues sont des espces de macro algues largement distribues (phylum Rhodophyta) dans les zones estuariennes et ctires. Les souches recommandes sont disponibles en cultures unialgales, non axniques 1) . NOTE 1 Cet essai din
34、hibition de croissance est fond sur deux clones, considrs auparavant comme deux espces diffrentes. Ces espces taient la Ceramium strictum Harvey sensu Kylin et lespce deau saumtre C. tenuicorne Ktzing Waern. Les donnes compltes sur le croisement (Rfrences 11 et 12) et lADN (Rfrence 10) ont montr que
35、 les deux entits appartiennent la mme espce, avec C. tenuicorne comme nom valide. Le clone marin (anciennement C. strictum) utilis dans cet essai a t isol en 1973 et est originaire du fjord dOslo (salinit 20S 25S). Il est maintenu en culture au laboratoire depuis plus de 30 ans. Le clone deau saumtr
36、e a t isol en 1995 et est originaire de la mer Baltique, 20 km au sud du laboratoire sko dans le nord de la Baltique proprement dite (salinit de 6S 7S). Les cultures peuvent tre maintenues dans le milieu spcifi lArticle 5. Un repiquage rgulier est ncessaire. NOTE 2 Parmi les algues rouges, des chang
37、ements se produisent entre les gnrations haplodes et diplodes. Dans lessai dinhibition de croissance, la gnration gamtophyte femelle est utilise puisquelle a un type de croissance dichotomique rgulier et le taux de croissance le plus rapide. Dans la nature, il est difficile de faire la distinction e
38、ntre les plants mles et femelles. Cela peut tre fait au laboratoire o les spermatanges sont trouvs sur les branches des thalles mles et les trichogynes peuvent tre observs sur les extrmits des griffes des thalles femelles. NOTE 3 Le clone originaire de la mer Baltique peut tre adapt et utilis dans l
39、es essais des salinits comprises entre 4S et 12S. Le clone marin peut tre utilis comme organisme dessai des salinits comprises entre 12S et 32S. 4.2 Eau de mer naturelle et artificielle 4.2.1 Gnralits Leau de mer naturelle est utilise pour la culture de lalgue et il convient demployer soit de leau d
40、e mer naturelle soit de leau de mer artificielle pour lessai. Le type deau de mer utiliser dpend des objectifs de lessai. Lorsque de leau de mer naturelle est utilise, il faut veiller ce quelle ne soit pas pollue. Il faut veiller en particulier viter la contamination de leau par des substances organ
41、iques ou inorganiques pendant la prparation et le stockage. Les quipements en cuivre ne doivent pas tre utiliss. 4.2.2 Eau de mer artificielle Prparer les solutions mres pour leau de mer artificielle conformment au Tableau 1. Dmarrer avec environ un tiers du volume deau dsir, ajouter les produits ch
42、imiques pess en quantit requise conformment au Tableau 1 et complter au volume avec de leau. 1) Des fournisseurs appropris sont: a) ITM, Department of Applied Environmental Research of Science, Stockholm University, S-106 91 Stockholm, Sude; b) University of Oslo, Department of Biology, P.O. Box 106
43、6 Blindern, N-0316 Oslo, Norvge. Cette information est donne lintention des utilisateurs de la prsente Norme internationale et ne signifie nullement que lISO approuve ou recommande lemploi exclusif des fournisseurs ainsi dsigns. ISO 10710:2010(F) 4 ISO 2010 Tous droits rservsCette solution mre dune
44、salinit de 100S (quivalant 10 % en masse par volume) est stable pendant au moins six mois si elle est stocke labri de la lumire temprature ambiante. Avant utilisation, il convient de diluer la solution mre avec de leau jusqu la salinit dsire. Ajuster le pH 8,0 0,2 avec une solution de HCl 1 mol/l ou
45、 de NaOH 1 mol/l. Leau de mer artificielle doit tre strilise en autoclave ou par filtration strile (porosit de 0,2 m) avant utilisation. Procder une seconde vrification du pH aprs strilisation, puis lajuster si ncessaire avant utilisation au pH 8,0 0,2 avec une solution de HCl 1 mol/l ou de NaOH 1 m
46、ol/l. Tableau 1 Eau de mer artificielle avec une salinit de 10 % en masse par volume ou 100S (adapt daprs la Rfrence 13) Quantit pour 1 l de milieu Quantit pour 5 l de milieu Quantit pour 10 l de milieu Substance g/l g/5 l g/10 l NaCl 70,1 351 702 Na 2 SO 411,7 58,7 117 KCl 2,03 10,2 20,3 KBr 0,293
47、1,47 2,93 Na 2 B 4 O 7 , 10H 2 O 0,113 0,567 1,13 MgCl 2 , 6H 2 O 31,7 158 317 CaCl 2 , 6H 2 O 6,6 33 66 SrCl 2 , 6H 2 O 0,066 0,334 0,668 4.2.3 Eau de mer naturelle Leau de mer naturelle doit provenir dun site non contamin. Filtrer pour retirer les particules plus grandes. Si ncessaire, diluer avec de leau. Il convient daugmenter la salinit avec de leau de mer naturelle dune salinit plus leve ou avec de leau de mer artificielle
