1、NORME INTERNATIONALE ISO 10705-4 Premire dition 2001-12-15 Numro de rfrence ISO 10705-4:2001(F) ISO 2001 Qualit de leau Dtection et dnombrement des bactriophages Partie 4: Dnombrement des bactriophages infectant Bacteroides fragilis Water quality Detection and enumeration of bacteriophages Part 4: E
2、numeration of bacteriophages infecting Bacteroides fragilisISO 10705-4:2001(F) ii ISO 2001 Tous droits rservs PDF Exonration de responsabilit Le prsent fichier PDF peut contenir des polices de caractres intgres. Conformment aux conditions de licence dAdobe, ce fichier peut tre imprim ou visualis, ma
3、is ne doit pas tre modifi moins que lordinateur employ cet effet ne bnficie dune licence autorisant lutilisation de ces polices et que celles-ci y soient installes. Lors du tlchargement de ce fichier, les parties concernes acceptent de fait la responsabilit de ne pas enfreindre les conditions de lic
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6、Droits de reproduction rservs. Sauf prescription diffrente, aucune partie de cette publication ne peut tre reproduite ni utilise sous quelque forme que ce soit et par aucun procd, lectronique ou mcanique, y compris la photocopie et les microfilms, sans laccord crit de lISO ladresse ci-aprs ou au com
7、it membre de lISO dans le pays du demandeur. ISO copyright office Case postale 56 CH-1211 Geneva 20 Tel. + 41 22 749 01 11 Fax + 41 22 749 09 47 E-mail copyrightiso.ch Web www.iso.ch Imprim en SuisseISO 10705-4:2001(F) ISO 2001 Tous droits rservs iii Sommaire Page 1 Domaine dapplication 1 2 Rfrences
8、 normatives . 1 3 Ter me et dfinition 2 4 Prcautions relatives la scurit 2 5 Principe . 2 6 Ractifs . 2 7 Appareillage 3 8 Cultures microbiologiques de rfrence . 5 9 chantillonnage 5 10 Prparation des matriaux dessai . 5 11 Mode opratoire . 7 12 Expression des rsultats 10 13 Rapport dessai . 11 Anne
9、xes A Description gnrale des bactriophages infectant Bacteroides fragilis. 12 B Milieux de culture et diluants. 13 C Mthode alternative pour la prparation des prcultures 18 D Mise en culture du bactriophage B56-3 19 Bibliographie 20ISO 10705-4:2001(F) iv ISO 2001 Tous droits rservs Avant-propos LISO
10、 (Organisation internationale de normalisation) est une fdration mondiale dorganismes nationaux de normalisation (comits membres de lISO). Llaboration des Normes internationales est en gnral confie aux comits techniques de lISO. Chaque comit membre intress par une tude a le droit de faire partie du
11、comit technique cr cet effet. Les organisations internationales, gouvernementales et non gouvernementales, en liaison avec lISO participent galement aux travaux. LISO collabore troitement avec la Commission lectrotechnique internationale (CEI) en ce qui concerne la normalisation lectrotechnique. Les
12、 Normes internationales sont rdiges conformment aux rgles donnes dans les Directives ISO/CEI, Partie 3. Les projets de Normes internationales adopts par les comits techniques sont soumis aux comits membres pour vote. Leur publication comme Normes internationales requiert lapprobation de 75 % au moin
13、s des comits membres votants. Lattention est appele sur le fait que certains des lments de la prsente partie de lISO 10705 peuvent faire lobjet de droits de proprit intellectuelle ou de droits analogues. LISO ne saurait tre tenue pour responsable de ne pas avoir identifi de tels droits de proprit et
14、 averti de leur existence. La Norme internationale ISO 10705-4 a t labore par le comit technique ISO/TC 147, Qualit de leau, sous- comit SC 4, Mthodes microbiologiques. LISO 10705 comprend les parties suivantes, prsentes sous le titre gnral Qualit de leau D tection et dnombrement des bactriophages:
15、Partie 1: Dnombrement des bactriophages ARN F spcifiques Partie 2: Dnombrement des coliphages somatiques Partie 3: Validation des mthodes de concentration des bactriophages dans leau Partie 4: Dnombrement des bactriophages infectant Bacteroides fragilis Les annexes A, B, C et D de la prsente partie
16、de lISO 10705 sont donnes uniquement titre dinformation.NORME INTERNATIONALE ISO 10705-4:2001(F) ISO 2001 Tous droits rservs 1 Qualit de leau Dtection et dnombrement des bactriophages Partie 4: Dnombrement des bactriophages infectant Bacteroides fragilis 1 Domaine dapplication La prsente partie de l
17、ISO 10705 spcifie une mthode de dtection et de dnombrement des bactriophages infectant la bactrie Bacteroides fragilis par incubation de lchantillon avec une souche-hte approprie. La mthode est applicable tous les types deaux, aux extraits de sdiments et de boues si ncessaire aprs dilution. Dans le
18、cas de faibles populations de phages, une tape de prconcentration peut savrer ncessaire pour laquelle une Norme internationale distincte a t labore. La mthode est galement applicable aux extraits de coquillages. NOTE Il est souhaitable que les Normes internationales soient adoptes le plus largement
19、possible. La prsente partie de lISO 10705 comporte des rfrences des procdures alternatives qui vitent davoir utiliser du matriel ou des quipements coteux qui peuvent ne pas tre aisment disponibles dans les pays en voie de dveloppement. Lutilisation de ces procdures alternatives naffectera pas les pe
20、rformances de la prsente mthode. 2R frences normatives Les documents normatifs suivants contiennent des dispositions qui, par suite de la rfrence qui y est faite, constituent des dispositions valables pour la prsente partie de lISO 10705. Pour les rfrences dates, les amendements ultrieurs ou les rvi
21、sions de ces publications ne sappliquent pas. Toutefois, les parties prenantes aux accords fonds sur la prsente partie de lISO 10705 sont invites rechercher la possibilit dappliquer les ditions les plus rcentes des documents normatifs indiqus ci-aprs. Pour les rfrences non dates, la dernire dition d
22、u document normatif en rfrence sapplique. Les membres de lISO et de la CEI possdent le registre des Normes internationales en vigueur. ISO 3696, Eau pour laboratoire usage analytique Spcification et mthodes dessai ISO 5667-1, Qualit de leau chantillonnage Partie 1: Guide gnral pour ltablissement des
23、 programmes dchantillonnage ISO 5667-2, Qualit de leau chantillonnage Partie 2: Guide gnral sur les techniques dchantillonnage ISO 5667-3, Qualit de leau chantillonnage Partie 3: Guide gnral pour la conservation et la manipulation des chantillons ISO 6887-1, Microbiologie des aliments Prparation des
24、 chantillons, de la suspension mre et des dilutions dcimales en vue de lexamen microbiologique Partie 1: Rgles gnrales pour la prparation de la suspension mre et des dilutions dcimales ISO 8199, Qualit de leau Guide gnral pour le dnombrement des micro-organismes sur milieu de cultureISO 10705-4:2001
25、(F) 2 ISO 2001 Tous droits rservs 3 Terme et dfinition Pour les besoins de la prsente partie de lISO 10705, le terme et la dfinition suivants sappliquent. 3.1 bactriophage infectant Bacteroides fragilis virus des bactries capable dinfecter certaines souches-htes slectionnes de Bacteroides fragilis e
26、n se fixant sur la paroi cellulaire au dbut du processus dinfection NOTE 1 De tels bactriophages provoquent lapparition de plages visibles (zones de lyse) sur un tapis confluent de bactries- htes cultives dans des conditions appropries. NOTE 2 Une description gnrale des bactriophages infectant B. fr
27、agilis est donne dans lannexe A. 4P r cautions relatives la scurit La souche-hte utilise pour les besoins de la prsente partie de lISO 10705 est une souche non pathogne pour lhomme et lanimal, et quil convient de manipuler conformment aux procdures normales (nationales ou internationales) des labora
28、toires danalyses bactriologiques. Les bactriophages infectant Bacteroides fragilis ne sont pathognes ni pour lhomme ni pour lanimal, mais certains types sont trs rsistants la dessiccation. Des prcautions appropries doivent tre prises pour viter tout risque de contamination croise des chantillons, en
29、 particulier lors de lexamen ou de la manipulation de cultures de concentration leve ou lors de lensemencement de cultures de souches-htes. Ces oprations doivent tre ralises dans une enceinte pour risque biologique ou dans une zone spare du laboratoire. Le chloroforme est une substance cancrigne. Pr
30、endre les prcautions de scurit applicables ou utiliser une autre mthode defficacit gale. Il est recommand que le personnel en charge dappliquer la prsente mthode ait acquis ou acquire un certain niveau dexprience dans la manipulation des bactries anarobies. 5P r i n c i p e Lchantillon est mlang un
31、faible volume de milieu de culture nutritif semi-solide. Une culture de la souche-hte y est ajoute et le mlange est coul dans une bote contenant du milieu de culture nutritif solide. Aprs cela, les botes sont incubes et examines pour y reprer lapparition de plages. Les rsultats son exprims en nombre
32、 de particules formant plages (galement identifies par units formant plages, ufp) par unit de volume (ufp/ml, ufp/l, etc.). 6R actifs 6.1 Matriaux de base. Pour la prparation des milieux de culture et des ractifs, utiliser des produits de qualit constante ainsi que des ractifs de qualit analytique,
33、et suivre les instructions donnes dans lannexe B. Pour toute information relative la conservation, se reporter lISO 8199, sauf indication spcifique donne dans la prsente partie de lISO 10705. Des milieux de culture complets dshydrats peuvent galement tre utiliss. Dans ce cas, suivre scrupuleusement
34、les instructions du fabricant. Des produits chimiques dautres qualits peuvent tre utiliss, pourvu quil puisse tre dmontr quils conduisent aux mmes rsultats. 6.2 Eau, pour la prparation des milieux de culture, distille dans des rcipients en verre ou dminralise, exempte de substances susceptibles dinh
35、iber la croissance des bactries dans les conditions de lessai, et conforme lISO 3696. 6.3 Diluant, pour faire des dilutions dchantillon, tel quune solution peptone saline ou tout autre diluant conforme lISO 6887-1.ISO 10705-4:2001(F) ISO 2001 Tous droits rservs 3 7 Appareillage En dehors des apparei
36、ls fournis sous forme strile, striliser la verrerie et les autres matriels conformment lISO 8199. Matriel et verrerie de laboratoire striles dusage courant en microbiologie, ou matriel usage unique en plastique conformes lISO 8199, et comprenant notament les lments suivants: 7.1 tuve air chaud, pour
37、 strilisation en chaleur sche, et autoclave. 7.2 Incubateur ou bain deau, maintenu thermostatiquement . 7.3 Incubateur ou bain deau, maintenu thermostatiquement et quip dun agitateur. 7.4 Bain deau ou bloc chauffant, maintenu thermostatiquement . 7.5 Bain deau ou dispositif quivalent, pour faire fon
38、dre la glose. 7.6 pH-mtre et papier indicateur de pH. 7.7 Appareil de comptage, quip dune source de lumire indirecte, oblique. 7.8 Conglateur, maintenu thermostatiquement . 7.9 Conglateur, maintenu thermostatiquement ou rservoir de stockage azote liquide. 7.10 Spectrophotomtre, quip dun filtre pour
39、la gamme de longueurs donde allant de avec une largeur de bande maximale de , capable de contenir des cuves de de trajet optique (7.21) ou des tubes en verre de Hungate (7.20) avec un bouchon en caoutchouc butyle et une capsule vis, ou encore des tubes de culture en verre capsule vis. 7.11 Enceinte
40、anarobie, ou jarres ou sachets anarobies, ainsi que gnrateurs danarobiose et indicateurs danarobiose. 7.12 Rfrigrateur, rgl une temprature de . 7.13 Botes de Petri, ventiles, de de diamtre. 7.14 Pipettes gradues, de , , et de capacit et pipettes Pasteur. 7.15 Flacons en verre, de volume appropri. 7.
41、16 Flacons en verre capsule vis, de volume appropri. 7.17 Tubes de culture, avec capsules ou dispositifs quivalents. 7.18 Tubes de culture en verre capsule vis. 7.19 prouvettes gradues, de capacit approprie. 7.20 Tubes en verre de Hungate, avec bouchon en caoutchouc butyle et capsule vis, ou tubes e
42、n verre capsule vis pouvant sadapter sur le spectrophotomtre (voir la Figure 1). (36 2) C (36 2) C (45 1) C (20 5) C (70 10) C 500 nm 650 nm 10 nm 1 cm (5 3) C 9cm 0,1 ml 1 ml 5 ml 10 mlISO 10705-4:2001(F) 4 ISO 2001 Tous droits rservs 7.21 Cuves optiques, de de trajet optique. 7.22 Units de filtrat
43、ion sur membrane, pour la dcontamination, de de porosit, de prfrence des membranes faible pouvoir de fixation des protines, par exemple celles composes de difluorure de polyvinylidne. 7.23 Tubes en plastique, bouchs, de de capacit. 7.24 Tubes en verre, capsule vis, de de capacit. 7.25 Seringues et a
44、iguilles. 7.26 Tampons douate. Figure 1 Tube en verre de Hungate avec bouchon en caoutchouc et capsule vis 10 mm 0,2 m 3ml 3mlISO 10705-4:2001(F) ISO 2001 Tous droits rservs 5 8 Cultures microbiologiques de rfrence La souche recommande est Bacteroides fragilis RYC2056 (ATCC 7007786) 1 . Utiliser le
45、bactriophage B56-3 (ATCC 700786-B1) infectant la bactrie Bacteroides fragilis RYC2056 pour la prparation des matriaux de rfrence (11.4). NOTE Les souches ATCC sont disponibles auprs de American Type Culture Collection (ATCC), 10801 University Boulevard, Manassas, VA 20110-2209, USA. Cette informatio
46、n est donne lintention des utilisateurs de la prsente partie de lISO 10705 et ne signifie nullement que lISO approuve ou recommande lemploi exclusif du produit ainsi dsign. Des produits quivalents peuvent tre utiliss sil est dmontr quils conduisent aux mmes rsultats. 9 chantillonnage Prlever des cha
47、ntillons et les transporter au laboratoire conformment lISO 8199, lISO 5667-1, lISO 5667-2 et lISO 5667-3. 10 Prparation des matriaux dessai 10.1 Mise en culture et entretien des souches-htes 10.1.1 Gnralits La mise en culture et lentretien des souches-htes impliquent diffrentes tapes qui sont rsumes sur la Figure 2. La bactrie Bacteroides fragilis est une anarobie stricte. Elle ne ncess
