1、 Numro de rfrence ISO 10130:2009(F) ISO 2009NORME INTERNATIONALE ISO 10130 Premire dition 2009-12-15Cosmtiques Mthodes analytiques Nitrosamines: Recherche et dosage de la N-nitrosodithanolamine (NDELA) dans les cosmtiques par CLHP, photolyse et drivation post-colonne Cosmetics Analytical methods Nit
2、rosamines: Detection and determination of N-nitrosodiethanolamine (NDELA) in cosmetics by HPLC, post-column photolysis and derivatization ISO 10130:2009(F) PDF Exonration de responsabilit Le prsent fichier PDF peut contenir des polices de caractres intgres. Conformment aux conditions de licence dAdo
3、be, ce fichier peut tre imprim ou visualis, mais ne doit pas tre modifi moins que lordinateur employ cet effet ne bnficie dune licence autorisant lutilisation de ces polices et que celles-ci y soient installes. Lors du tlchargement de ce fichier, les parties concernes acceptent de fait la responsabi
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6、t central ladresse donne ci-dessous. DOCUMENT PROTG PAR COPYRIGHT ISO 2009 Droits de reproduction rservs. Sauf prescription diffrente, aucune partie de cette publication ne peut tre reproduite ni utilise sous quelque forme que ce soit et par aucun procd, lectronique ou mcanique, y compris la photoco
7、pie et les microfilms, sans laccord crit de lISO ladresse ci-aprs ou du comit membre de lISO dans le pays du demandeur. ISO copyright office Case postale 56 CH-1211 Geneva 20 Tel. + 41 22 749 01 11 Fax + 41 22 749 09 47 E-mail copyrightiso.org Web www.iso.org Publi en Suisse ii ISO 2009 Tous droits
8、rservsISO 10130:2009(F) ISO 2009 Tous droits rservs iiiSommaire Page Avant-propos .iv Introduction.v 1 Domaine dapplication 1 2 Principe.1 3 Ractifs.1 4 Appareillage.2 5 Prparation et conservation des chantillons4 5.1 Gnralits.4 5.2 Prparation des talons4 5.2.1 Solution-mre4 5.2.2 Solutions stocks4
9、5.2.3 Solutions de travail .4 5.3 Prparation des chantillons .5 5.3.1 Gnralits.5 5.3.2 Purification SPE.5 5.3.3 Autre mode de prparation des chantillons non dispersibles dans leau (purification DCM) .5 6 Mode opratoire.6 6.1 Gnralits.6 6.2 Conditions chromatographiques.6 6.3 Installation du systme d
10、e raction 6 7 Calcul des rsultats.7 7.1 Courbe dtalonnage.7 7.2 Conditions exprimentales de validit du mesurage 7 7.3 Calcul des concentrations7 8 Rapport dessai8 Annexe A (informative) Exemples de courbe dtalonnage et de chromatogrammes 9 Annexe B (normative) Photolyse et raction du nitrite au ract
11、if de Griess jusqu formation du colorant azoque 12 Annexe C (normative) Configuration du systme de racteur post-colonne.13 Bibliographie.14 ISO 10130:2009(F) iv ISO 2009 Tous droits rservsAvant-propos LISO (Organisation internationale de normalisation) est une fdration mondiale dorganismes nationaux
12、 de normalisation (comits membres de lISO). Llaboration des Normes internationales est en gnral confie aux comits techniques de lISO. Chaque comit membre intress par une tude a le droit de faire partie du comit technique cr cet effet. Les organisations internationales, gouvernementales et non gouver
13、nementales, en liaison avec lISO participent galement aux travaux. LISO collabore troitement avec la Commission lectrotechnique internationale (CEI) en ce qui concerne la normalisation lectrotechnique. Les Normes internationales sont rdiges conformment aux rgles donnes dans les Directives ISO/CEI, P
14、artie 2. La tche principale des comits techniques est dlaborer les Normes internationales. Les projets de Normes internationales adopts par les comits techniques sont soumis aux comits membres pour vote. Leur publication comme Normes internationales requiert lapprobation de 75 % au moins des comits
15、membres votants. Lattention est appele sur le fait que certains des lments du prsent document peuvent faire lobjet de droits de proprit intellectuelle ou de droits analogues. LISO ne saurait tre tenue pour responsable de ne pas avoir identifi de tels droits de proprit et averti de leur existence. LI
16、SO 10130 a t labore par le comit technique ISO/TC 217, Cosmtiques. ISO 10130:2009(F) ISO 2009 Tous droits rservs vIntroduction Lexposition humaine aux N-nitrosamines peut se produire au contact de sources diverses prsentes dans lenvironnement, la nourriture ou les produits de soin personnels. Ces su
17、bstances ayant montr un effet cancrigne notoire sur plusieurs espces animales, il est reconnu quune restriction dexposition aux N-nitrosamines est dune importance primordiale pour la prservation de la sant humaine. Parmi les N-nitrosamines, il a t tabli que la N-nitrosodithanolamine (NDELA) est un c
18、ontaminant potentiel des cosmtiques. Dans ce contexte, plusieurs mthodes analytiques ont t dveloppes pour rechercher et doser sa prsence dans les cosmtiques, comme la chromatographie en phase gazeuse couple lanalyse dnergie thermique (TEA), la chromatographie en phase liquide haute performance (CLHP
19、) couple, soit une dtermination par spectromtrie de masse, soit une photolyse avec quantification colorimtrique. Cette dernire mthode ncessite lusage dune technologie particulire dans le but de garantir une slectivit maximale lors de la recherche de la NDELA, afin de limiter le plus possible le risq
20、ue de formation artefactuelle de lanalyte recherch et de permettre une quantification prcise de la substance. La prsente mthode analytique emploie la chromatographie en phase liquide haute performance (CLHP) associe une photolyse et une drivation post-colonne afin de sparer et de rechercher les trac
21、es de NDELA dans un ingrdient cosmtique ou dans une matrice de produit prsentant une slectivit la NDELA. La prsente Norme internationale fait rfrence une tude mene en collaboration par sept laboratoires (Rfrence 2) et publie en 2006. Des critres de validation sont donns dans la Rfrence 2. NORME INTE
22、RNATIONALE ISO 10130:2009(F) ISO 2009 Tous droits rservs 1Cosmtiques Mthodes analytiques Nitrosamines: Recherche et dosage de la N-nitrosodithanolamine (NDELA) dans les cosmtiques par CLHP, photolyse et drivation post- colonne 1 Domaine dapplication La prsente Norme internationale dcrit une mthode d
23、e recherche et de quantification de la NDELA dans les cosmtiques et les matires premires utilises dans les cosmtiques par CLHP, photolyse et drivation post- colonne. La prsente mthode ne sapplique pas la recherche et/ou la quantification des nitrosamines autres que la NDELA, ni la recherche et/ou la
24、 quantification de la NDELA dans les produits autres que les cosmtiques ou les matires premires utilises dans les cosmtiques. Si un produit est susceptible dtre contamin par la NDELA contenue dans ses ingrdients ou que la formation de NDELA est possible du fait de la composition en ingrdients, alors
25、 la mthode est appliquer lors des essais des produits cosmtiques et constitue une alternative lISO 15819. Le prsente mthode ne sapplique pas aux matrices contenant des colorants doxydation. 2 Principe Lextraction de la nitrosamine NDELA des chantillons cosmtiques est ralise avec de leau. La purifica
26、tion est effectue soit par extraction en phase solide (purification SPE, voir 5.3.2) laide dune cartouche C18, soit laide de dichloromthane (purification DCM, voir 5.3.3) lorsque les chantillons ne peuvent pas se disperser dans leau. Les extraits sont analyss par CLHP, photolyse et drivation post-co
27、lonne. La NDELA est spare de la matrice cosmtique par chromatographie en phase liquide inverse. La liaison N-nitroso est coupe par photolyse UV avec formation dion nitrite. Selon la raction de Griess, le groupe fonctionnel nitrite est diazot par du sulfanilamide en milieu acide puis associ du chlorh
28、ydrate de N-(1-naphthyl)thylne diamine (NED) pour former un colorant azoque pourpre qui est ensuite dos quantitativement par spectrophotomtrie max540 nm (voir Annexe B). La prsence de NDELA peut tre confirme en procdant une nouvelle analyse sans photolyse (aucun ion nitrite nest alors produit car la
29、 liaison N-nitroso nest pas coupe). Labsence de pic chromatographique au temps de rtention de la NDELA sur le chromatogramme confirme que le pic observ lors de la premire analyse correspond bien la NDELA. 3 Ractifs 3.1 Mthanol, qualit CLHP. 3.2 Eau, qualit CLHP. 3.3 Dichloromthane, qualit CLHP. ISO
30、10130:2009(F) 2 ISO 2009 Tous droits rservs3.4 N-Nitrosodithanolamine, de puret connue suprieure 95 %. Numro CAS: 116-57-7. 3.5 Acide orthophosphorique 85 %, de qualit analytique. 3.6 Actate dammonium, de qualit analytique. 3.7 Solution dactate dammonium, 1 mol/l. Dissoudre 77,08 g dactate dammoniun
31、 (3.6) dans 1,0 l deau (3.2). 3.8 Solution dactate dammonium, 0,02 mol/l. Prlever 20 ml de solution dactate dammonium 1 mol/l (3.7) et complter 1 l avec de leau (3.2). 3.9 Chlorhydrate de N-(1-naphthyl)thylne diamine, de puret connue suprieure 98 %. Numro CAS: 1465-25-4. Il convient que ce ractif so
32、it scell et conserv hermtiquement labri de la lumire. 3.10 Sulfanilamide, de puret connue suprieure 99 %. Numro CAS: 63-74-1. 3.11 Ractif de Griess. Dissoudre, dans une fiole jauge, 0,25 g de chlorhydrate de N-(1-naphthyl)thylne diamine (3.9) dans de leau (3.2) et complter 250 ml. Dissoudre 4,0 g de
33、 sulfanilamide (3.10) dans 250 ml dune solution aqueuse 5 % (masse/volume) dacide orthophosphorique 85 % (3.5). Mlanger les ractifs dans un flacon en verre ambr et conserver le mlange labri de la lumire. Le mlange peut tre utilis pendant 5 jours et doit, en tout cas, rester incolore lorsquil est con
34、serv une temprature comprise entre 2 C et 8 C. 4 Appareillage Utiliser une verrerie et un matriel de laboratoire normaliss, ainsi que lquipement suivant. 4.1 Agitateur mcanique ou de type Vortex 1) . 4.2 Flacon en verre haute performance, de 20 ml, avec un bouchon vis (type Poly-Cone lined urea). 4.
35、3 Microtube en polypropylne, de 1,5 ml destin la centrifugation. 4.4 T de mlange faible volume mort. 4.5 Station de traitement dchantillon, pour application SPE (telle que les systmes Vacmaster ou Visiprep 1) . 4.6 Centrifugeuse, pouvant atteindre au moins 20 000g et pouvant rguler la temprature. 1)
36、 Vortex , Poly-Cone , Vacmaster , Visiprep sont des exemples de produits appropris disponibles sur le march. Cette information est donne lintention des utilisateurs de la prsente Norme internationale et ne signifie nullement que lISO approuve ou recommande lemploi exclusif des produits ainsi dsigns.
37、 ISO 10130:2009(F) ISO 2009 Tous droits rservs 34.7 Colonnes dextraction en phase solide, par exemple Sep Pak 2)cartouches C18 ou Bakerbond 2)C18 6 ml, avec 500 mg doctadcylsilane en phase inverse fixe sur gel de silice, de 40 m de diamtre de particule moyen (APD), 60 . 4.8 Chromatographe pour chrom
38、atographie en phase liquide haute performance, muni dun amortisseur dimpulsions, dun rservoir dluant, dune pompe, dun systme dinjection, dun systme de traitement des donnes, cest-dire un intgrateur, coupl un dtecteur UV/visible quip dune lampe filament de tungstne dune sensibilit de 0,001 AUFS ou de
39、 0,000 5 AUFS (units dabsorbance pleine chelle). 4.9 Systme dalimentation en ractif de Griess: une pompe basse pression sans pulsation, ou une seconde pompe CL dote des mmes proprits que la premire peuvent tre utilises. 4.10 Unit de photolyse: un racteur photochimique comprenant un tube en PTFE tres
40、s supportant de hautes pressions long de 5 m 6 m et de diamtre interne de 0,3 mm, dispos comme une gaine autour dune lampe UV basse pression mettant la longueur donde 254 nm (par exemple des photoracteurs Beam Boost 2) . 4.11 Module post-colonne ou four colonne, quip dun racteur en PTFE tress de 1 m
41、l et dun t de mlange faible volume mort. Le racteur est une gaine de tube tress de manire viter ltalement des pics (voir Rfrence 3). 4.12 Colonne analytique de sparation CLHP en phase inverse C18 (par exemple Spherisorb ODS (octadcylsilane) II 2)protge par une colonne de garde. Colonne de sparation
42、longueur: 150 mm diamtre intrieur: 4,6 mm taille des particules sphriques: 5 m Colonne de garde longueur: 10 mm diamtre intrieur: 4,6 mm taille des particules sphriques: 5 m 4.13 Configuration du systme de racteur post-colonne (voir Annexe C). Les tubes de raccordement en aval de la vanne dinjection
43、 doivent tre aussi courts que possible. La colonne est directement relie un systme dinjection quip dune boucle dchantillonnage de 50 l ou de 100 l. Un racteur photochimique (1) muni dun racteur tubulaire translucide tress et dune lampe UV mettant 254 nm est reli la sortie de la colonne. La sortie du
44、 racteur photochimique est relie une des branches du t de mlange (2). La deuxime branche du t est connecte la pompe permettant dintroduire le ractif de drivation (3). La troisime branche est relie au module post-colonne compos dun racteur en tube PTFE tress (4). La sortie du module post-colonne est
45、relie au dtecteur UV/visible (5). Les pics lus sont enregistrs par un micro-ordinateur quip dun progiciel commercial dintgration. 2) Sep Pak cartouches C18 ou Bakerbond , Beam Boost , Spherisorb sont des exemples de produits appropris disponibles sur le march. Cette information est donne lintention
46、des utilisateurs de la prsente Norme internationale et ne signifie nullement que lISO approuve ou recommande lemploi exclusif des produits ainsi dsigns. ISO 10130:2009(F) 4 ISO 2009 Tous droits rservs5 Prparation et conservation des chantillons 5.1 Gnralits AVERTISSEMENT La plupart des N-nitrosamine
47、s sont trs cancrignes et toutes les prcautions possibles doivent donc tre prises afin dviter lexposition humaine ces substances. Il convient deffectuer toute opration impliquant la manipulation de N-nitrosamines ou de solutions les contenant sous une hotte aspirante ventile ou dans une bote gants adaptes. Les gants de chirurgie en latex frquemment employs nassurent pas une protection compl
