1、 ICS 65.020.01 DB51B 15 备案号： 27231-2010 四川省地方标准DB51/T 1022-2010辣椒抗疫病性室外盆栽人工鉴定技术规程 Rule of Resistance Identification with Artificial Method for phytophthora capsici Leonian on the Peppers at the Pots 2010-02-10 发布 2010-03-01 实施四川省质量技术监督局发布DB51/T 1022-2010 I 目 次 前言 . 1 范围 1 2 规范性引用文件 1 3 术语和定义 1 4 用具和
2、试剂 1 5 健康苗的准备 . 26 接种体准备 2 7 鉴定方法 38 结果判定 4附录A . 5附录B . 5附录C . 6DB51/T 1022-2010 II 前 言 本标准的附录A、附录B、附录C和附录D是资料性附录。 本标准由四川省农业厅提出并归口。 本标准由四川省质量技术监督局批准。 本标准起草单位：四川省农业科学院植物保护研究所、四川省农业科学院园艺研究所、四川省双流县农业发展局植保站。 本标准主要起草人：彭化贤、席亚东、刘波微、滕有德、向清茹。 DB51/T 1022-2010 1 辣椒抗疫病性室外盆栽人工鉴定技术规程 Rule of Resistance Identific
3、ation with Artificial Method for Phytophthora capsici Leonian on the Peppers at the Pots 1 范围 本规程规定了辣椒抗疫病( Phytophthora capsici Leonian )性室外鉴定的健康苗准备、接种体准备、鉴定方法和判定结果的技术要求。 本标准适用于四川省对辣椒品种（系）对疫病的室外盆栽抗性鉴定。 2 规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究
4、是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。 GBT 16715.3 瓜菜作物种子 茄果类 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本标准 3.1 人工接种鉴定 Artificial Inoculation for Identification 用人工繁殖或收集的病原物，仿照自然情况，创造发病条件，按一定量接种，诱发植物病害发生，根据接种对象抗性表现和发病程度确定品种抗性的鉴定方法。 3.2 接种体 Inoculum 指用于人工接种鉴定用的病原体，本规程特指辣椒疫霉菌的菌丝体。 3.3 营养土 Nutrition Soil 根据幼苗生长发育的需要人工配制和混合好的
5、土壤。 3.4 对照品种 Control Variety 在抗性鉴定时附加的本规程特定的感病和抗病品种作为对照的品种。 3.5接种针Inoculation Needle 用于划伤辣椒茎部的接种工具。 4 用具和试剂 DB51/T 1022-2010 2 4.1用具 倒置显微镜、超净工作台、恒温生物培养箱、冰箱、消毒 锅、不锈钢打孔器（3mm）、14cm 1 4cm塑料钵、塑料薄膜、特殊接种针。 4.2试剂 硝酸钾KNO 3、硫酸铜CuSO 44.3消毒剂 0.1%升汞、75%酒精、甲醛 (38HCHO) 。 4.4肥料和农药 过磷酸钙(主要成分为Ca(H 2PO4)2)、尿素CO(NH 2)2
6、、50多菌灵WP 。 5 健康苗的准备 5.1育苗土壤的配置 采用1份田土、2份草炭土或堆肥等腐熟的有机肥，土壤过于黏重时适当加入一些沙子或炭灰，混匀之后， 加入过磷酸钙1 kg/m32 kg/m3、 尿素250 g/m3300 g/m3、 硝酸钾0.5kg1.0kg/m3， 草木灰5 kg/m310 kg/m3，最后过筛去掉粗颗粒物，即配成营养土。 5.2营养土的消毒处理 福尔马林消毒法 将营养土铺开在硬质地面，厚度约3cm4cm ，按每立方米的营养土喷洒福尔马林溶液(38甲醛)75 倍液200 ml 250ml，充分拌匀，再堆积起来，覆盖塑料薄膜封闭 3d5d ，打开薄膜把营养土摊开，晾晒
7、10d 左右即可使用。 多菌灵消毒法 用50多菌灵WP500 倍镕液喷营养土，每立方米营养土用药量25g 30g 。 5.3营养钵的准备 将塑料钵用75%酒精浸泡15 min后，将消毒营养土装入消毒塑料钵，放入水层为2cm的盘内24h后，取出备用。 5.4种子质量 符合GBT 16715.3中二级良种以上的要求。 5.5种子消毒和催芽 先将消毒后的种子在弱光下晾晒2h3h，然后用约55的热水浸种并不停地搅拌30min，再用清水浸种2h3h，略加揉搓后洗净捞出，即可播种。 5.6播种 用水喷透营养钵土面，每钵均匀撒播种子粒粒，覆盖约0.2cm厚的消毒营养土，参试鉴定的每份品种共播5钵，整齐摆放在
8、半径100m内没有辣椒种植的露地中，覆盖地膜保温。 5.7苗期管理 80%种子出苗后，揭地膜。苗龄35d40d、具2片3片真叶时，选晴天定苗，浇水，每钵2苗苗。定苗7d后，用1%尿素根部追肥一次，辣椒植株具有6片叶时开始接种。病虫害管理见附录A。 6 接种体准备 6.1培养基制备 DB51/T 1022-2010 3 燕麦琼脂培养基（ OMA）： 燕麦15 g，蔗糖20 g, 琼脂18g，蒸馏水1000ml。在121C高压灭菌锅湿热灭菌40分钟后备用,灭菌后的pH为7.07.2。 胡萝卜琼脂培养基（ CAA） :胡萝卜汁200g，琼脂18g，蒸馏水1000ml。在121C高压灭菌锅湿热灭菌40
9、分钟后备用，灭菌后的pH为7.07.2。 6.2病原菌分离与鉴定 采集当年的典型疫病的新鲜茎秆病，在病健交界处取表皮 或植株茎髓组织块5 mm10 mm，经自来水冲洗干净，经0.1%升汞、75%酒精消毒，置入OMA培养基上，放入25C1C恒温培养箱中培养，待长出菌丝，转入OMA培养基上培养15d，在倒置显微镜（1616倍）下鉴定是否产生游动孢子囊，游动孢子囊大小和形态描述见附录B。 6.3接种针制作 用于划伤辣椒茎部的特殊接种针。 用一个直径为4mm5mm、 长为10cm12cm的圆形塑料棒或木质棒，在棒的端部固定平行、紧挨的2根大头针，大头针的尖部仅为0.5mm长。 6.4病原菌培养 挑取带
10、孢子囊的菌丝置于接种在 CAA培养基上，在25C1C恒温培养箱中培养7d，待菌丝覆盖整个培养皿（直径90mm）备用。 6.5接种 在辣椒植株茎与叶片分叉处，用酒精消毒接种针轻轻的刺伤茎杆，造成一浅口，将带菌培养基切成约2mm小菌片，贴在浅口上,用湿棉球盖上保湿18h24h。每份参试鉴定的辣椒品种设接菌和不接菌的对照，培养基不带病原菌。设立感病品种和抗病品种两个对照。每品种重复5钵,每钵3株。 7 鉴定方法 7.1调查时间和次数 接种后10d15d调查，调查一次 7.2调查方法 对参试鉴定的辣椒品种（系）进行逐株调查，以茎为单位，按附录D辣椒疫霉菌症状描述进行病情分级。记载每株的病情级别，根据病
11、情分级数计算病情指数。 表1 原始记载表 病情分级 品种名称 0 1 2 3 4 病情指数 7.3计算 用病情指数表示辣椒品种疫病发生平均严重度。病情指数用I表示，按公式（1）进行计算。 （l id i） I 100 （1） L DB51/T 1022-2010 4 式中： I 病情指数； li 各级病株数； di 各严重度级值； L 调查总株数； D 最高级值。 计算结果保留到小数点后两位。 8 结果判定 品种抗病性评价是按照病情指数划分品种的抗性水平，见附录C。在抗性鉴定中，实验的感病对照品种的病情指数50，抗病对照品种病情指数30（该值为参考数值），参试品种的空白对照的病情指数为0，即辣
12、椒植株不发病，该抗性鉴定结果有效。 DB51/T 1022-2010 5 附 录 A （资料性附录） 主要虫害及推荐防治方法 病虫害名称 推荐农药及方法 50%抗蚜威 WP 2000 倍，叶面喷雾 蚜虫 10%吡虫啉 WP 1500 倍，叶面喷雾 1.8%阿维菌素 EC 1500 倍，叶面喷雾 跗线螨 10%浏阳霉素 2000-4000 倍液，叶面喷雾 附 录 B (资料性附录) 辣椒疫病的症状 辣椒疫病属于真菌性病害，叶片、茎和果实均可发病。以茎基部和茎节分杈处发生成段水渍状的暗绿色病斑为典型症状。苗期发病，发病部位在幼苗茎基部，呈暗绿色水渍状软腐，致使上部猝倒。成株期发病，根、茎、叶、枝、
13、果均可受害。茎部多在近地面处发生，病斑初期为暗绿色水渍状，以后出现环绕表皮扩展的暗褐色或黑褐色条斑，病部易缢缩折倒，病部以上茎梗也易凋萎死亡。果实受害多从蒂部开始，病斑呈暗绿色水渍状软腐，边缘不明显，很快扩展到全果实，引起腐烂，潮湿时病部覆盖白色霉层，干燥后形成暗褐色僵果。 游动孢子囊大小和形态描述：疫霉菌在培养基上都能产生成熟的游动孢子囊（见图），游动孢子囊形态变化很大，有圆形、椭圆形、长椭圆形、不规则形等，游动孢子囊大小范围为长 19.41m -84.11m，寛18.76m -45.29m；游动孢子囊一般有一个乳突，厚度为 1.29m -9.71m。 辣椒疫霉菌游动孢子囊 DB51/T 1022-2010 6 附 录 C (资料性附录) C.1 辣椒疫病菌病情分级标准 病级 受害症状 级 无病 级 茎的一部分变褐或接种叉叶柄变蔫 级 茎的大部分变褐、缢缩 级 茎变褐、叶萎蔫 级 植株倒伏萎蔫或枯死 C.2 辣椒品种抗疫病性评价分级标准 抗性水平 英文缩写 病情指数 高抗 HR 05.99 抗 R 6.0015.99 中抗 MR 16.00 29.99 中感 MS 30.00 49.99 感 S 50.00 69.99 高感 HS 大于 70.00
