1、 DB36备案号： 15590-2004 江西省地方标准DB36/T 4392004盐酸克伦特罗的快速筛查 胶体金免疫层析法 Rapid determination of clenbuterol hydrochloride Colloidal gold immunochromatographic assay 2004-07-01 发布 2004-08-01 实施江西省质量技术监督局发布DB36/T 4392004 I 目 次 前言 . II 1 范围 1 2 规范性引用文件 1 3 原理 1 4 试剂材料 1 5 分析步骤 1 6 结果判定 2 附录A （规范性附录） 盐酸克伦特罗（瘦肉精）速
2、测卡性能要求 . 3 A.1 检测范围 3 A.2 符合率要求 3 A.3 检测范围的试验规则 3 A.4 符合率的试验规则 3 DB36/T 4392004 II 前 言 本标准由江西省农业厅提出。 本标准主要起草单位：江西省农产品质量安全检测中心、江西中德大地生物工程有限公司。 本标准主要起草人：康升云、王茜、曹芳、赖卫华、陈高明、熊勇华。DB36/T 4392004 1 盐酸克伦特罗的快速筛查 胶体金免疫层析法 1 范围 本标准规定了盐酸克伦特罗的现场快速筛查胶体金免疫层析法的原理、试剂材料、测定步骤和结果判定。 本标准适用于动物尿液、畜禽饮用水中盐酸克伦特罗的筛查。 本方法适用范围为3
3、g/L-10000000g/L。 2 规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。 GB/T 5009.192-2003 动物性食品中克伦特罗残留量的测定 3 原理 本方法为竞争抑制法。将氯金酸用还原法制成一定直径的金溶胶颗粒，标记抗体。以硝酸纤维素膜为载体，利用了微孔膜的毛细管作用，滴加在膜条一端的液体慢慢向另一端渗移，在移动的过程中，会发生相应的抗原抗体反应，并通过免
4、疫金的颜色而显示出来。样本中的盐酸克伦特罗在流动的过程中与胶体金标记的特异性单克隆抗体结合，抑制了抗体和NC膜检测线上盐酸克伦特罗BSA偶联物的结合，使检测线不显颜色，结果为阳性。反之，检测线显示红色，结果为阴性。 阴性 阳性 4 试剂材料 4.1 试纸条组成或“盐酸克伦特罗（瘦肉精）速测卡”成品 4.1.1 盐酸克伦特罗全抗原的偶联率为 1:10-1:20(BSA:CL)。 4.1.2 抗盐酸克伦特罗单克隆抗体由鼠腹水获得，效价应15000（间接 ELISA 法），或有效抗体含量应0.5mg/ml。 4.1.3 样品垫：玻璃纤维或纸质薄片。 4.1.4 胶金垫：玻璃纤维，免疫金释放时间5mi
5、n，释放效率80。 4.1.5 NC 膜：孔径8m，4cm 毛细管时间140s。 4.1.6 吸水纸：棉纸。 4.1.7 底板：塑料。 4.1.8 检测盒：塑料。 4.2 移液器 5 分析步骤 5.1 样本采集 5.1.1 尿液试样 DB36/T 4392004 2 取新鲜尿样，无需作前处理，可以直接检测。 5.1.2 畜禽饮用水 于畜禽饮水槽随机取样即可，无需处理。 5.2 测定步骤 5.2.1 从铝箔袋中取出盐酸克伦特罗（瘦肉精）速测卡，置于平整的清洁台面上。 5.2.2 用移液器移取 70l 样液，滴加于加样孔内。 5.2.3 环境温度 430，加样后 15min 立即判断结果。 6 结
6、果判定 检测区出现红色条带，结果判为阴性；检测区不出现红色条带，结果判为阳性。 对阳性结果的样品，可用GB/T 5009.192-2003 作进一步确证。 DB36/T 4392004 3 附 录 A （规范性附录） 盐酸克伦特罗（瘦肉精）速测卡性能要求 A.1 检测范围 盐酸克伦特罗（瘦肉精）速测卡检测盐酸克伦特罗浓度的适用范围为3g/L-10000000g/L。在此范围内，检测溶液呈阳性反应。 A.2 符合率要求 盐酸克伦特罗（瘦肉精）速测卡符合率用样品的假阳性率和假阴性率表示。假阳性率应小于5%。假阴性率应小于1%。 A.3 检测范围的试验规则 制备盐酸克伦特罗标准系列：0、1、2、3、
7、4、5、10、50、100、1000、10000、100000、1000000、10000000g/L，每个样重复测定20次。测定结果显示，在0-1 0000000g/L 范围内，0-2g/L结果显阴性，3-10000000g/L结果显阳性。 A.4 符合率的试验规则 用50份待检盐酸克伦特罗（瘦肉精）速测卡分别测定50份阴性样本(不含盐酸克伦特罗或盐酸克伦特罗的含量小于1ng/ ml)和50份阳性样本(盐酸克伦特罗的含量大于等于3ng/ml)。实验结果分析如下： 表 A.1 评价盐酸克伦特罗(瘦肉精)速测卡符合率 实验样本 阳性样本 阴性样本 合计 试纸条测 阳性 A B A+B 定结果 阴性 C D C+D 总数 A+C B+D A+B+C +D 真阳性率A/（A+C）100 真阴性率D/（B+D）100 假阳性率B/（B+D）100 假阴性率C/（A+C）100
