1、ICS 67.120 X 04 DB34 安徽省地方标准 DB 34/T 13712011 动物组织中那西肽的残留测定 气相色谱质谱法 Determination Nosiheptide residue in animal tissue - Gas chromatography mass spectrometry method 2011 - 03 - 16 发布 2011 - 04 - 16 实施安徽省质量技术监督局 发布DB34/T 13712011 I 前 言 本标准按照 GB/T 1.1-2009 给出的规则起草。 本标准由安徽省畜牧兽医局提出。 本标准由安徽省农业标准化技术委员会归口。
2、 本标准起草单位：安徽省兽药饲料监察所(安徽省畜产品质量安全检测中心)。 本标准主要起草人：蔡一杰、明文庆、刘红云、吴蕾、张莉、丁作坤、陶小平、钱志平、吴昊。 DB34/T 13712011 1 动物组织中那西肽的残留测定 气相色谱质谱法 1 范围 本标准规定了用气相色谱质谱法测定猪、牛、鸡、鸭肌肉、肝脏、肾脏中那西肽残留测定方法。 本标准适用于猪、牛、鸡、鸭肌肉、肝脏、肾脏中那西肽的残留测定。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682
3、分析实验室用水规格和试验方法 3 试样制备 猪、牛、鸡、鸭的肌肉、肝脏、肾脏等动物组 织，去筋后切成小块，制成糜状后，于 -18 以下温度冷冻保存。 4 原理 样品以乙腈提取，正己烷脱脂，固相萃取柱净化，用 N,O-双三甲基硅基三氟乙酰胺（BSTFA）+1 %三甲基氯硅烷（TMCS）衍生化，气相色谱-质谱进行定性和定量分析。 5 试剂和溶液 5.1 除非另有说明，本法所用试剂均为分析纯，水为符合 GB/T 6682 二级水的规定。 5.2 那西肽标准品：纯度95。 5.3 标准储备液：精密称取那西肽标准品适量，用甲醇配制成 100 g/mL，作为标准储备溶液，4冰箱保存，有效期为 30 天。
4、5.4 标准工作液：精密量取适量那西肽储备液，用甲醇稀释成浓度为 0.5、5.0、10.0、50.0、100.0、200.0 ng/mL 的标准工作液，4 冰箱保存，有效期为 7 天。 5.5 甲醇：色谱纯。 5.6 乙腈：色谱纯。 5.7 乙腈。 5.8 无水硫酸钠。 5.9 磷酸。 5.10 正丙醇。 5.11 正己烷。 DB34/T 13712011 2 5.12 固相萃取柱：碱性氧化铝柱，2 g/12 mL，或相当者。 5.13 衍生化试剂：N,O-双三甲基硅基三氟乙酰胺（BSTFA）+三 甲基氯硅烷（TMCS）（99:1）。 6 仪器设备 6.1 气相色谱质谱仪。 6.2 氮吹仪。
5、6.3 离心机。 6.4 振荡器。 6.5 涡旋混合器。 6.6 分析天平：感量 0.0001 g，0.001 g。 6.7 鸡心瓶 50 mL。 6.8 离心管：50 mL、10 mL。 6.9 分液漏斗：50 ml。 6.10 固相萃取装备。 6.11 旋转蒸发器。 7 测定步骤 7.1 试样提取 称取 5 g（精确到 0.001 g）均质动物组织样品于 50 mL 离心管中，加入 20 mL 乙腈和 4 g 无水硫酸钠，用玻璃棒充分搅拌，振荡 5 min 后，置于离心机上以 3000 r/ min 离心 10 min，转移上清液于分液漏斗中，残渣再用 20 mL 乙腈提取一次，合并两次提
6、取液，转移到已加入 20 mL 正己烷的分液漏斗中，收集乙腈层，加入 5 mL 正丙醇，40 下在旋转蒸发器上浓缩至干备用。 7.2 试样净化 将固相萃取柱（SPE）用 3 mL 95 乙腈淋洗，用甲醇 3 mL 溶解试样提取浓缩物（7.1），上SPE柱，收集洗脱液，混匀。 7.3 衍生化 用氮气吹干净化后洗脱液（7.2），加入 100 L 衍生试剂，密封 70 衍生 1 h，氮气吹干，加0.5 mL 乙腈溶解，用气相色谱质谱分析。同时分别取 5.3 项下标准工作液系列各 1 ml 用氮气吹干，加入 100 L 衍生试剂，按试样同法操作。 7.4 气相条件 色谱柱：5苯基甲基聚硅氧烷，柱长 3
7、0 m，内径 0.25 mm，膜厚 0.25 m 或性能相当的色谱柱。 进样口温度：250。 升温程序：起始温度 100 保持 1 min，以 30/ min 的速率升温至 280（保持 9 min）。 载气：氦气纯度 99.999。 流量：0.8 Ml/min。 进样方式：不分流进样。 进样体积：1.0 L。 DB34/T 13712011 3 7.5 质谱条件 样品离子源：负化学电离源（反应气为甲烷）。 甲烷：纯度 99.999。 离子源温度：150。 传输线温度：250。 检测电压：500V。 选择离子收集模式，收集质荷比为 92，99，182，274 m/z 的 4 个碎片离子。 8
8、定性定量方法 定性方法：样品与标准品保留时间的相对标准偏差不大于 0.5。特征离子基峰丰度与标准品相差不大于 20。 定量方法：以 92，99，182 和 274 峰面积之和进行校正定量。 9 结果计算和表述 按照下式计算试样中药物残留的含量： mAsVCsAX= (1) 式中： X 试样中药物的含量，单位为毫克每千克（ g/kg）； A 试样溶液的选择性离子色谱图中的峰面积响应值； As 标准溶液的选择性离子色谱图中的峰面积响应值； V 定容体积，单位为毫升（mL）； Cs 标准溶液的浓度，单位为纳克每毫升（ng/mL）； m 试样质量，单位为克（g）。 计算结果扣除空白值，平行测定结果用算术平均值表示，结果保留 3 位有效数字。 10 检测方法灵敏度、准确度、精密度 10.1 灵敏度 本方法的检测限为 0.1 g/kg。 10.2 准确度 本方法添加浓度为 1.0 g/kg 时，回收率均为 80120。 10.3 精密度 本方法的批内变异系数 CV15，批间变异系数 CV20。 DB34/T 13712011 4 A A 附 录 A （资料性附录） 那西肽标准溶液衍生物质谱图 图A.1 那西肽标准溶液衍生物质谱图 _
