1、ICS 67.120 X 04 DB34 安徽省地方标准 DB 34/T 13702011 动物组织中三聚氰胺的残留测定 -气相色谱质谱法 Determination melamine residue in animal tissue Gas chromatography mass spectrometry method 2011 - 03 - 16 发布 2011 - 04 - 16 实施安徽省质量技术监督局 发布DB34/T 13702011 I 前 言 本标准按照 GB/T 1.1-2009 给出的规则起草。 本标准由安徽省畜牧兽医局提出。 本标准由安徽省农业标准化技术委员会归口。 本标
2、准起草单位：安徽省兽药饲料监察所(安徽省畜产品质量安全检测中心)。 本标准主要起草人：张莉、吴蕾、明文庆、刘红云、蔡一杰、丁作坤、陶小平、钱志平、吴昊。 DB34/T 13702011 1 动物组织中三聚氰胺的残留测定 气相色谱质谱法 1 范围 本标准规定了用气相色谱质谱法测定动物猪、鸡组织中三聚氰胺残留测定方法。 本标准适用于动物猪、鸡组织中三聚氰胺的残留测定。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 3
3、 试样制备 猪、鸡的肌肉、肝脏、肾脏等动物组织，去筋 后切成小块，制成糜状后，于 -18 以下温度冷冻保存。 4 原理 试样中的三聚氰胺用 1三氯乙酸提取，用阳离子交换柱净化，用 N,O-双三甲基硅基三氟乙酰胺（BSTFA）+1三甲基氯硅烷（TMCS）衍生化，用气相色谱质谱进行定性和定量分析。 5 试剂和溶液 5.1 除非另有说明，本法所用试剂均为分析纯，水为符合 GB/T 6682 二级水的规定。 5.2 三聚氰胺对照品：纯度 99。 5.3 标准储备液：准确称取三聚氰胺对照品，用甲醇配制成 1 mg/mL 的标准储备液，-18 冰箱保存，有效期 90 d。 5.4 标准工作液： 量取适量三
4、聚氰胺储备液， 用甲醇溶液稀释为 0.05、 0.1、 0.2、 0.5、 1.0、 2.0 g/mL的标准工作液。4 冰箱保存，备用，有效期 7 d。 5.5 甲醇：色谱纯。 5.6 三氯乙酸。 5.7 乙酸铅。 5.8 1三氯乙酸：称取 10 g 三氯乙酸加水溶解定容至 1000 mL，混匀。 5.9 5氨化甲醇：量取 5 mL 氨水，用甲醇定容到 100 mL。 5.10 乙酸铅溶液（22 g/L）：称取 22 g 乙酸铅加水溶解后定容至 1L。 5.11 甲醇溶液：取甲醇 200 mL 加水 800 mL，混匀。 DB34/T 13702011 2 5.12 衍生化试剂：N,O-双三甲
5、基硅基三氟乙酰胺（BSTFA）+三甲基氯硅烷（TMCS）99+1。 5.13 吡啶：色谱纯。 5.14 固相萃取小柱（MCX）：混合型阳离子交换固相萃取柱，规格 60 mg /3 mL。 5.15 微孔滤膜：孔径 0.25 m，有机相。 6 仪器设备 6.1 气相色谱质谱仪。 6.2 旋转蒸发仪。 6.3 氮吹仪。 6.4 离心机，转速不低于 4000 r/min 6.5 振荡器。 6.6 涡旋混合器。 6.7 分析天平：感量 0.0001 g，0.001 g。 6.8 鸡心瓶：50 mL。 6.9 离心管：50 mL、10 mL。 6.10 固相萃取装置。 7 测定步骤 7.1 试样提取 称
6、取 5 g（精确至 0.001 g）匀浆后的样品，置离心管中，依次加入 1的三氯乙酸 18 mL 和 2 mL乙酸铅溶液，10000 r/min 均质 1 min，振荡 20 min，120 00 r/min 离心 5 min。取上清液待 用。 7.2 试样净化 MCX柱活化和上样：分别用 3 mL 甲醇，3 mL 水 活化MCX柱，准确移取 5 mL 离心上清液分次上柱。再用 3 mL 水和 3 mL 甲醇洗涤 MCX 柱，抽近干后用 5氨化甲醇溶液 3 mL 洗脱，收集洗脱液，抽干。洗脱液于氮吹仪上 50 吹干，加甲醇溶液 1 mL，振荡溶解，摇匀，备用。 7.3 衍生化 取 7.2 的净
7、化液，用甲醇溶液进行适当稀释，取 400 L 氮气吹干，加入 200 L 的吡啶和 200 L 的 BSTFA，混匀，在 70 衍生 30 min，同时分别取三聚氰胺标准系列(5.3)400 L，氮气吹干，做同步衍生 化 。待气相色谱质谱测定。 7.4 气相条件 色谱柱：DB-5MS柱，柱长 30 m，内径 0.25 mm，膜厚 0.25 m 或性能相当的色谱柱。 进样口温度：250。 升温程序：起始温度 75 保持 1 min，以 30/ min 的速率升温至 30 0（保持 2 min）。 载气：氦气纯度 99.999。 流量：1.3 mLmin。 进样方式：不分流进样。 进样体积：1.0
8、 L。 DB34/T 13702011 3 7.5 质谱条件 样品离子源：EI源。 传输线温度：280。 四极杆温度: 150。 离子源温度: 230 。 溶剂延迟: 6.9 min。 EI源轰击能：70eV。 选择离子收集模式，收集 99、171、327、342 m/z 的 4 个碎片离子。 8 定性定量方法 定性方法：样品待测物质与标准品衍生物保留时间的相对标准偏差不大于 0.5。特征离子基峰丰度与标准品相差不大于 20。 定量方法：以 342，327，171，和 99 峰面积之和进行校正定量。 9 结果计算和表述 按照下式计算试样中三聚氰胺的含量： 21 nnmAsVCsAX = . (
9、1) 式中： X 试样中三聚氰胺的含量，单位为毫克每千克（mg/kg）； A 试样溶液对应的色谱峰面积响应值； As 标准溶液对应的色谱峰面积响应值； V 净化后加入的甲醇溶液体积，单位为毫升（mL）； Cs 三聚氰胺标准溶液的浓度，单位为微克每毫升（ g/mL）； m 试样质量，单位为克（g）； n1 提取稀释倍数； n2 衍生前稀释倍数。 平行测定结果用算术平均值表示，结果保留 3 位有效数字。 10 检测方法灵敏度、准确度、精密度 10.1 灵敏度 本方法三聚氰胺的检测限为 0.05 mg/kg。 10.2 准确度 本方法在添加浓度为 0.2 mg/kg时，回收率为 70120。 10.3 精密度 本方法的批内变异系数 CV15，批间变异系数 CV20。 DB34/T 13702011 4 A A 附 录 A （资料性附录） 三氯氰胺的气相质谱监测的离子图 图A.1 三聚氰胺的气相质谱监测的离子图 _
