1、 中 华 人 民 共 和 国 国 家 标 准 GB/T 14927.2 2001 实 验 动 物 近交系小鼠、大鼠皮肤移植法 Laboratory animal Genetic monitoring： skin grafting of inbred mice and rats 2001-08-29发布 2002-05-01实施 中华人民共和国 国家质量监督检验检疫总局 发 布 GB/T 14927.2 2001 前 言 本标准是对 GB/T 14927.2 1994实验动物 近交系小鼠、大鼠皮肤移植法的修订，对原标 准有关设备和材料及操作步骤内容做了修改。 此法是近交系小、大鼠纯度检测的经典方
2、法，应用时间长，操作技术简单，在此次修订中没有 更多的改动。 本标准自实施之日起，代替 GB/T 14927.2 1994。 本标准由中华人民共和国科学技术部提出并归口。 本标准起草单位：中国实验动物学 会 。 本标准 主要 起草人： 邢瑞昌 、 刘双环 、 沈洁 、 李善如 、 白琴 华、 张瑞忠 。 本标准 于 1994年 1月首 次发布。 中华人民共和国国家标准 实 验 动 物 近交系小鼠、大鼠皮肤移植法 GB/T 14927.2 2001 Laboratory animal 代替 GB/T 14927.2 1994 Genetic monitoring： skin grafting o
3、f inbred mice and rats 1 范围 本标准 规定 了近交系小鼠、大鼠皮肤移植法。 本标准 适 用 于 近交系小鼠和大鼠在 培育过程 中纯度的检 查以 及近交系小鼠和大鼠在 繁殖饲养过 程 中的 遗传监 测。 2 技术原理 移植的在 同一 近交系中 可以被互相接受 ， 即同 系移植 （ isograft） 是 成功 的。 移植物在 不同 近 光 系中 互相排斥 ， 亦即同种 移植 （ allograft） 是 不成功 的。 F1代动物 可以接受任何一个双亲 的 组织 移植物， 双亲则不能接受 F1代的移植物。 F1代动物 可以接受 F2代 以后各 代动物的移植物。 亲 本 品
4、 系 可以接受某些 F2代 以后各 代动物的移植物， 但 是 绝 大部 分被排斥 。 本标准 采 用 背 部皮肤移植法和 尾 部皮肤移植法。 两种 方法原 理相同 ，并 具 有 同等 标准 效力 。 3 背部皮肤移植法 3.1 设备和材料 3.1.1 固定板（ 18 12） 。 3.1.2 戊巴比妥钠（医 用 ） 。 3.1.3 医 用 橡 皮 膏 。 3.1.4 医 用 凡士 林 。 3.1.5 粉剂青霉素 G钠（ 80万 U，人 或兽 用 ）。 3.1.6 3%碘酒棉球 。 3.1.7 75%酒精棉球 。 3.1.8 眼 科 剪刀 。 3.1.9 眼 科 镊子 。 3.1.10 注射器 （
5、 1mL） 。 3.1.11 4号或 5号注射器针头 。 3.1.12 纱 布 （ 剪 成 40mm长， 25mm宽若干条；厚 2 3层若干块 ， 其上涂 医 用 凡士 林 及 粉剂青霉 素 G钠） 。 3.1.13 脱脂棉 做 成 的 棉球 。 3.1.14 将 3 . 1. 10， 3.1.13的材料 置 于 高压锅 内 121 、 40min高压灭菌 。 3.2 操作步骤 3.2.1 随机取 同 性别 4 12周龄 的动物 10只 ，动物 可 来 自 基础群 、 血缘扩 大 群或生产群 。 3.2.2 每只 动物 分 别编号 并 称取体重 ， 详细记录 品 系 名称 、 性别 、出 生
6、年月 日、 谱 系及 其他特征 。 3.2.3 用 无菌生 理 盐水配制 0.7%戊巴比妥钠 溶液 。 3.2.4 采 用 腹腔注射麻醉 动物。大鼠 每 20g体重注射 0.1mL，小鼠 每 10g体重注射 0.1mL。 因 不同品 系动物对 麻醉剂敏感性 不同 。 注射量 可适 当增 减 （ 手 术时 室温 应 控 制 在 25 28 之间 ）。 3.2.5 待 动物 麻醉 失去知觉 后 ， 将其 背 部 朝 上 放 在 固定板 上 ， 固定 动物， 剪 去 被 毛 ，并用 3%碘酒棉 球 和 75%酒精棉球 消毒 。 3.2.6 在 背 部 剪 下直径 5 mm 10 mm的皮肤 左右 各
7、一 块 （ 其 中 一 块 用做自 体 移植， 另 一 块 用做 异 体 移植 ）。 3.2.7 将剪 好 的皮 片翻转 过 来 放入带少 量生 理 盐水 的 双 碟 （ 直径 = 6cm） 中，用 眼 科 剪刀 ， 轻轻地切 去 皮 下 组织 至真 皮， 然 后 放 在 无菌生 理 盐水 中 冲 一 下 。 3.2.8 两 只 动物的皮 片 ， 除左侧 皮 片 做自 体 移植 外 ， 右侧 皮 片循 环 交 换 ， 逆毛 方 向 移植并 使 之 吻合 。 3.2.9 覆盖 涂 过凡士 林 和 青霉素 G钠 的 纱 布 块 ， 3 4层 ，用 1cm宽 橡 皮 膏固定 ， 松紧 适 度。 3.
8、2.10 手 术 结束待 动物 苏醒 后 ， 把 动物 放入 鼠 盒 内，并 挂 上 标 记 卡片 ， 10d后 拆除包扎 。 3.3 结果观察 3.3.1 拆包 后 ，发 现 皮 片 干 瘪 、 脱 落 则 为 技术 失败 。 如 皮 片 脱 痂 ， 手 术部位 平整 、 一 周 后 有 新毛 长出 则 为手 术 成功 。对 照 自 体 移植，技术 失败率 不 得 大 于 10%。 3.3.2 如 果 皮 片 在 2 3周 内 脱 落 ， 则 为急 性 排斥 。 遗传 污染通常引 起 急 性 排斥 。 3.3.3 如 果 皮 片 在 3周脱 落 ， 则 为慢 性 排斥 。移植物有 否慢 性
9、排斥 至少观察 100d， 遗传 突变通常引 起 慢 性 排斥 。 3.3.4 如 果 对 结果怀疑 ， 则要 进行 生 新 移植， 可以 使 用 一 批新 的动物， 也 可能 使 用 已 做 过 移植 但 对 结 果 产生 怀疑 的动物。 如 果 是 后 者 ， 则排斥 更 迅 速 、更典 型 。 4 尾部皮肤移植法 4.1 设备和材料 4.1.1 11号 手 术 刀 柄 。 4.1.2 11号 手 术 尖 刀 片 。 4.1.3 玻璃套 （ 直径 8mm，大鼠 可适 当 大 些） 。 4.1.4 其他 材料 见 3.1。 4.2 操作步骤 4.2.1 随机取 同 性别 4 12周龄 的动物
10、 10只 ，动物 可 来 自 基础群 、 血缘扩 大 群或生产群 。 4.2.2 每只 动物 分 别编号 并 称取体重 ， 详细记录 品 系 名称 、 性别 、出 生 年月 日、 谱 系及 其他特征 。 4.2.3 用 无菌生 理 盐水配制 0.7%戊巴比妥钠 溶液 。 4.2.4 采 用 腹腔注射麻醉 动物。大鼠 每 20g体重注射 0.1mL，小鼠 每 10g体重注射 0.1mL。 因 不同品 系动物对 麻醉剂敏感性 不同 。 注射量 可适 当增 减 （ 手 术时 室温 应 控 制 在 25 28 之间 ）。 4.2.5 待 动物 麻醉 失去知觉 后 ， 将 5只 一组 按顺序 采 取 仰
11、卧式 放 在 一 块 滤纸 上 ，并用 3%碘酒棉球 和 75%酒精棉球 消毒 鼠 尾 。 4.2.6 用 左手 食指按住 动物 尾 根 ， 左手 拇指按住 尾 尖 ， 固定 鼠 尾 并 使 其 微微伸展 ， 然 后 右手 持解剖 刀 ， 刃面 朝 上 ， 与 尾 部皮肤 成 20 30夹角 ，在 尾 静脉 上 部 或 两 条 尾 静脉 之间，在 离 尾 部 5mm处削 下 一 片 宽 约 2mm 3mm，长 约 7mm 8mm的皮肤， 其厚 度 前 者 以 没有 严 重 出 血 ， 后 者 能 足 以 暴露 出 白 色 的 肌腱 但 又 不 割伤 血 管 为 宜 。 4.2.7 右手 将刀
12、片逆 时 针 方 向 交 给 左手 ， 附着 在 刀 片 上 的皮 片 相 应 转 了 180 ， 将 皮 片 用 眼 科 镊子取 下 贴 在原 创面 上 ，并 尽 量 使 其 吻合 ，用 一 小 片 滤纸 覆盖 ， 再 轻轻 按 压 一 下 ， 然 后 取 掉滤纸 片 ， 该 移 植作 为 自 体 移植对 照 。 4.2.8 按 照 4 .2.6和 4. 2.7步骤， 完 成 另 4只 动物的自 体 移植对 照 。 4.2.9 按 照 4. 2.6和 4.2.7步骤， 参 照 皮肤移植 相互 循 环 系 统图示 ， 进行循 环 皮肤移植。 亦即 前边 鼠 的 第三 片 皮和 后 边 相 邻
13、鼠的 第二 片 皮 进行 相互 交 换 植皮， 具 体 操作 见图 1。 4.2. 10 取 五支玻璃套管 ， 分 别 轻轻 套 入 动物 尾巴 至 根 部 3mm处 ，用 医 用 胶 布在 尾巴 远端靠 近 套管 处 将 尾巴 粘住 ， 胶 布 往返粘贴 2 3圈 ， 使 套管 可 做 轻 微 上 下 活 动 但不 脱 落 。 4.2.11 套 好 玻璃管 后 ，用 落地手 术 灯 照 射 动物大 约 15min 30min。 然 后 将 动物 仰躺着 放入 鼠 盒 中 挂 上 标 记 卡片 。 4.2.12 24h后 取 下 套管 ，此时 可 看到 皮 片已 粘 在 创面 上 。 4.3
14、结果观察 4.3.1 皮 片 在 第 一 周 内 苍 白 、 干 瘪 、 脱 落 ， 则 为 技术 失败 。对 照 自 体 移植，技术 失败率 不 得少 于 10%。 4.3.2 皮 片 在 第 2 3周 内发 炎 、 水 肿 、 坏死 、 结痂直至 脱 落 ， 则 为急 性 排斥 。 遗传 污染通常引 起 急 性 排斥 。 4.3.3 皮 片 在 第 3 9周 内 逆毛 逐渐 脱 落 ， 直至 无 毛 ；或 者 因 排斥 留 下 凹陷 疤痕 ， 都 为慢 性 排斥 。 遗 传 突变通常引 起 慢 性 排斥 。 4.3.4 皮 片 在 100d的 观察 期 内， 始终 有 逆毛 ， 则 为 永久 接受 的标 志 。 4.3.5 如 果 对 结果 有 怀疑 ， 则要 进行 重 新 移植， 以 得 出 明确 结果 。
