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    NF U47-302-2002 Animal health analysis methods - Reagent control protocol for the detection of antibodies against the bovine enzootic leucosis virus by the ELISA method in serums (.pdf

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    NF U47-302-2002 Animal health analysis methods - Reagent control protocol for the detection of antibodies against the bovine enzootic leucosis virus by the ELISA method in serums (.pdf

    1、 AFNOR 2002 Tous droitsrservsFA120422 ISSN 0335-3931NF U 47-302Octobre 2002Indice de classement : U 47-302ICS : 11.220 ; 65.020.30Mthodes danalyse en sant animaleProtocole de contrle des ractifs pour la recherche des anticorps dirigs contre le virus de la leucose bovine enzootique par la mthode ELIS

    2、A dans des srums (mlange ou individuels)E : Animal health analysis methods Reagent control protocol for the detection of antibodies against the bovine enzootic leucosis virus by the ELISA methodin serums (individual or mixed)D : Analysenverfahren in der Veterinrmedizin Reagenzprfprotokoll fr die For

    3、schung von Antikrpern gegen den Virus der enzootischen Leukose der Rinder durch das ELISA-Verfahren in Serums (einzeln oder gemischt)Norme franaise homologue par dcision du Directeur Gnral dAFNOR le 5 septembre 2002 pour prendre effetle 5 octobre 2002.Correspondance la date de publication du prsent

    4、document, il nexiste pas de travaux europensou internationaux traitant du mme sujet.Analyse Le prsent document sinscrit dans un ensemble de normes de mthodes danalyseen sant animale. Il dcrit un protocole de contrle des ractifs pour la recherche desanticorps dirigs contre le virus de la leucose bovi

    5、ne enzootique par la mthodeELISA partir des srums (mlange ou individuels).Descripteurs Thsaurus International Technique : maladie des animaux, maladie infectieuse,leucose, bovin, dpistage, mthode danalyse, recherche, anticorps, srum, proto-cole, contrle.Modifications AFNOR 2002 AFNOR 2002 2e tirage

    6、2002-10-Fdite et diffuse par lAssociation Franaise de Normalisation (AFNOR) 11, avenue Francis de Pressens 93571 Saint-Denis La Plaine Cedex Tl. : + 33 (0)1 41 62 80 00 Fax : + 33 (0)1 49 17 90 00 www.afnor.frCorrections Par rapport au 1ertirage, corrections mineures pages 2 et 3.Mthodes danalyse en

    7、 sant animale AFNOR U47AMembres de la commission de normalisationPrsident : M TOMASecrtariat : MME DRUEZ-VERITE AFNORMME BADUEL MINISTERE DE LAGRICULTURE ET DE LA PECHE DIRECTION GENERALE DE LALIMENTATIONM BAROUX LDA 01-LABORATOIRE DEPARTEMENTAL DANALYSESMME BEDIDI-MADANI LVD 55-LABORATOIRE VETERINA

    8、IRE DEPARTEMENTALMME BETZ COFRAC COMITE FRANAIS DACCREDITATIONM BIET SANDERS ALIMENTS ISNCM BIND LABORATOIRE DE TOURAINEMME BLANCHARD LABORATOIRE AVIMARMME BONNET LDV 04-LABORATOIRE DEPARTEMENTAL VETERINAIREM BUFFEREAU LDA 22-LABORATOIRE DEPARTEMENTAL DANALYSESMME BUGGIN-DAUBIE DELTAVIT SICA SAM CAR

    9、PINSCHI LDA 50-LABORATOIRE DEPARTEMENTAL DANALYSESM CHABANET LDA12- LABORATOIRE DEPARTEMENTAL DANALYSESM CHEVAL IDAC-INSTITUT DEPARTEMENTAL DANALYSE ET CONSEIL NANTESM CUDENNEC LDV 02-LABORATOIRE DE DIAGNOSTIC VETERINAIREMME DESCARSIN AES LABORATOIREMME DUPLANTIER ADOUR BIO CONSEILM EUZEBY ECOLE NAT

    10、IONALE VETERINAIRE LYONMME FEILLOU LDA 36-LABORATOIRE DEPARTEMENTAL DANALYSESM FORTIER LD 14-LABORATOIRE DEPARTEMENTAL FRANK DUNCOMBEM FRETTE OFIVAL OFFICE NATIONAL INTERPROFESSIONNEL DES VIANDES, DE LELEVAGE ET DE LAVICULTUREM GARIN-BASTUJI AFSSA AGENCE FRANCAISE DE SECURITE SANITAIRE DES ALIMENTS

    11、MAISONS ALFORTMME GERSTER-HARLY LD 21-LABORATOIRE DEPARTEMENTALMME GIRAL LVD 13-LABORATOIRE VETERINAIRE DEPARTEMENTALM GIRAUD LDA 26-LABORATOIRE DEPARTEMENTAL DANALYSESMME GREZE ECOLE NATIONALE VETERINAIRE LYONMME GUERITTE CIAL SOM HUGUET BIOSUD ANALYSESM KAZEK SIMV SYNDICAT DE LINDUSTRIE DU MEDICAM

    12、ENT VETERINAIRE ET REACTIFSM KLEIN LD 61-LABORATOIRE DEPARTEMENTALMME KOBISCH AFSSA AGENCE FRANCAISE DE SECURITE SANITAIRE DES ALIMENTS PLOUFRAGANM LE DREAN LVD 35-LABORATOIRE VETERINAIRE DEPARTEMENTALMME LE GUERN-FELLOUS BIO-RADMME LE POTIER AFSSA AGENCE FRANAISE DE SECURITE SANITAIRE DES ALIMENTS

    13、PLOUFRAGANMMAUCI LIDAL GIEMME MENARD LVD 53-LABORATOIRE VETERINAIRE DEPARTEMENTALM MIELI LDA 22-LABORATOIRE DEPARTEMENTAL DANALYSESMME MOQUAY-TKACZUK LVD 31-LABORATOIRE VETERINAIRE DEPARTEMENTALM MORVAN LDA 22-LABORATOIRE DEPARTEMENTAL DANALYSESM NUSSBAUM VETOQUINOL SA 3 NF U 47-302Ce document a t p

    14、rpar au sein du Groupe de Travail RACTIFS de la Commission de Normalisation U47AMthodes danalyse en sant animale. Ce Groupe de Travail est anim par le Professeur TOMA. Il a t plus particulirement rdig par le Professeur TOMA, M Luc MIELI et M Bruno GARIN BASTUJI.M PARODI ECOLE NATIONALE VETERINAIRE A

    15、LFORTMLLE PELLETIER LD 40-LABORATOIRE DEPARTEMENTALM PICAULT ASSA AGENCE FRANCAISE DE SECURITE SANITAIRE DES ALIMENTS PLOUFRAGANMME POILANE LASAMME POLIAK LD 72-LABORATOIRE DEPARTEMENTALM POURQUIER INSTITUT POURQUIERM POUTREL INRA INSTITUT NATIONAL DE LA RECHERCHE AGRONOMIQUE TOURSMME PRESIER LD 16-

    16、LABORATOIRE DEPARTEMENTALMME RAULT FNGDSB FEDERATION NATIONALE DES GROUPEMENTS DE DEFENSE SANITAIRE DU BETAILM REYNAUD LAVB 63-LABORATOIRE DANALYSES VETERINAIRES Arrt du 31 dcembre 1990 fixant les mesures techniques et administratives relatives la prophylaxie collec-tive de la leucose bovine enzooti

    17、que.3 Termes et dfinitionsPour les besoins du prsent document, les termes et dfinitions suivants sappliquent.3.1leucose bovine enzootiquemaladie systmique du tissu lymphocytaire des bovins. Lagent est un rtrovirus, le virus de la leucose bovineenzootique ou BLV (Bovine Leukemia Virus). Linfection pa

    18、r le BLV est souvent subclinique et se traduit ou nonpar une lymphocytose persistante et/ou un lymphosarcome. Une lymphocytose persistante a initialement tutilise comme critre de diagnostic mais actuellement la recherche danticorps dirigs contre le BLV a remplacle diagnostic hmatologique. On ne conn

    19、at pas de variants srologiques. Ce virus peut infecter exprimentale-ment dautres espces animales (moutons, lapins, etc.)3.2Gp51glycoprotine denveloppe du virus de la leucose bovine enzootique de poids molculaire 51 000 daltons3.3srum talon primaire europen de la leucose bovine enzootiquesrum E4 four

    20、ni par le laboratoire de rfrence de lUnion Europenne (Statens Serum Institute de Copenhague,Danemark). Le niveau exigible de dtection est la dilution au 1/10 du srum E43.4talon secondaire de la leucose bovine enzootiquetalon secondaire de titre en anticorps anti-Gp 51 identique celui du srum E4 dilu

    21、 au 1/10 5 NF U 47-3024 Exigences spcifiques avant mise en contrleSans objet a priori sauf cas particuliers.5 chantillonnageLe fournisseur adresse au laboratoire de contrle le nombre suffisant de coffrets entiers (microplaques et ractifs)du lot valuer, correspondant aux ractions raliser lors des dif

    22、frents contrles (initial, dbut de lot, en coursde validit).6 Conditions de conservation et dlimination du lotSelon les indications du producteur pendant la dure de vie du lot de ractif.7 chantillons et matriaux de rfrenceCes chantillons sont conservs une temprature 16 C ou lyophiliss une temprature

    23、8 C. 7.1 talon secondaire de la leucose bovine enzootique7.2 chantillons ngatifs de rfrence Des chantillons de srum prlevs dans au moins huit exploitations diffrentes indemnes de leucose bovineenzootique depuis plusieurs annes, pour disposer dchantillons individuels. Dix chantillons de srum sontprle

    24、vs dans chacune dau moins cinq exploitations ayant les mmes caractristiques pour disposer dchan-tillons de mlange ; des chantillons de srum danimaux indemnes de leucose bovine enzootique, pluri-vaccins avec diffrentsvaccins ne comprenant pas de valence de la leucose bovine enzootique.7.3 chantillons

    25、 positifs de rfrencechantillons de srum danimaux infects par le virus de la leucose bovine enzootique, de titre en anticorps sup-rieur ou gal au niveau exigible de dtection.7.4 Srum ngatif de dilutionMlange dau moins trois srums ngatifs.7.5 chantillon pour la mesure de la rptabilitDilution dun srum

    26、positif dans le srum ngatif de dilution de telle sorte quil prsente un titre en anticorps qui-valent au niveau exigible de dtection.NF U 47-302 6 8Principe8.1 Contrle initialLe laboratoire de contrle, contrle les paramtres suivants :8.1.1 Dtectabilit Dilutions de ltalon secondaire de raison 2 allant

    27、 du srum pur jusquau 1/128, analyses une fois par micro-plaque sur deux microplaques ; dilution de ltalon secondaire en tenant compte de lindice de dtectabilit, analyse cinq fois par microplaquesur deux microplaques.8.1.2 Sensibilit Cinq chantillons positifs de rfrence analyss une fois par microplaq

    28、ue sur deux microplaques.8.1.3 Spcificit Vingt chantillons individuels ngatifs analyss une fois par microplaque sur deux microplaques ; vingt chantillons de mlange analyss une fois par microplaque sur deux microplaques.8.1.4 Rptabilitchantillon pour la mesure de rptabilit, analys au moins 20 fois pa

    29、r microplaque sur deux microplaques ; encas de cupules demeurant disponibles, cet chantillon est utilis dans ces cupules pour complter ltude de rp-tabilit. Le liquide est dpos dans chaque cupule laide de la mme pipette monocanal et en partant de la mmedilution pour toutes les cupules utilises.8.1.5

    30、Contrle de dbut dun lotLe laboratoire de contrle ralise le contrle de dbut de lot.Le contrle de dbut dun lot est identique celui du contrle initial lexception de la spcificit pour laquelledix chantillons individuels ngatifs de rfrence et dix chantillons de mlange ngatifs sont utiliss.8.2 Contrle en

    31、cours de validitLe laboratoire de contrle ralise le contrle en cours de validit en milieu de priode de conservation du produitIl peut dcider de ne pas le raliser si le fournisseur lui fournit des rsultats du contrle en cours de validit quila effectu.Par ailleurs le laboratoire de contrle peut dcider

    32、 de la mise en uvre dun contrle en cas de besoin estim enfonction dinformations issues des utilisateurs ou des usagers. Les paramtres contrls sont les suivants sur au moins une microplaque : dtectabilit ; sensibilit ; spcificit ; rptabilit. 7 NF U 47-3029 Appareillage et verrerieMatriel courant du l

    33、aboratoire dimmunosrologie.10 Mode opratoireIl consiste respecter strictement la notice technique du producteur. Il peut utiliser les extrmes de fourchettesde dure ou de temprature prvues par la notice.Le contrle initial et le contrle de dbut dun lot sont mis en uvre sur au moins deux microplaques d

    34、ans desconditions de rptabilit. Le contrle en cours de validit est mis en uvre sur au moins une microplaque. 11 valuation des rsultatsLa rponse doit tre positive avec ltalon secondaire pur (pour les srums individuels) ou dilu en tenant comptede lindice de dtectabilit (pour les mlanges de srum).11.1

    35、DtectabilitLa rponse doit tre positive avec ltalon secondaire dilu en tenant compte de lindice de dtectabilit.11.2 SensibilitLa rponse doit tre positive avec les chantillons positifs de rfrence.11.3 SpcificitLa rponse doit tre ngative avec les chantillons ngatifs de rfrence.11.4 RptabilitLe coeffici

    36、ent de variation des densits optiques (pour les ractifs sans cupule tmoin) ou des diffrences de den-sits optiques (entre cupules voisines pour les ractifs ayant une cupule tmoin) sur les analyses ralises avecle srum pour la mesure de la rptabilit doit tre infrieur ou gal 10 % sur chacune des micropl

    37、aques. Dansle cas dun rsultat suprieur obtenu avec un ractif bicupule, un nouvel essai de 42 rptitions sera ralis surune microplaque supplmentaire. Le coefficient de variation devra alors tre infrieur 10 %.12 Restitution des rsultatsLe laboratoire de contrle fournit au fournisseur lensemble des rsul

    38、tats dtaills correspondant aux essaisdcrits larticle 8, et en particulier, les densits optiques obtenues et les plans de microplaque utiliss.13 Rapport de contrleLe rapport de contrle se prononce sur la conformit ou non des rsultats obtenus par rapport aux critresdvaluation.NF U 47-302 8 Bibliograph

    39、ie1 OIE : Manual of standards for Diagnostic Tests and Vaccines Office International des Epizooties, 2000,Fourth edition, 371-380.2 CERTIBIO rfrentiel R 003 : guide de prsentation de la mthodologie de fixation du seuil de positivit dunractif. dition 5 du 08/10/1993 rdacteur principal : M Luc MIELI.D

    40、isponibilit : Ministre de lAgriculture (DGAl) 251 rue de Vaugirard 75.3 CERTIBIO rfrentiel R 004 : mthodologie statistique applicable au contrle des paramtres techniquespermettant lvaluation de la qualit dun ractif. dition 5 du 08/10/1993 rdacteur principal :M Luc MIELI.Disponibilit : Ministre de lAgriculture (DGAl) 251 rue de Vaugirard 75.4 CERTIBIO rfrentiel R 0011 : Essais de contrle des ractifs effectuer par CERTIBIO.dition 5 du 08/10/1993 rdacteur principal : M Luc MIELI.Disponibilit : Ministre de lAgriculture (DGAl) 251 rue de Vaugirard 75.


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